病毒感染細胞實驗整體流程與原理doc(存儲版)
【正文】 ）加入500ul溶液W（去鹽液），12000轉(zhuǎn)離心1min，棄濾液，重復(fù)一次。5. 610h后，移除含有DNA脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基，代之以正常培養(yǎng)液DMED+10%FB（從此刻開始算時間）。在第五天再用該病毒感染靶細胞，病毒進入細胞后，其遺傳物質(zhì)RNA反轉(zhuǎn)錄出DNA，該基因再整合到靶細胞的基因組中，完成轉(zhuǎn)染過程，因為質(zhì)粒DNA只能轉(zhuǎn)錄出病毒RNA和表達目的基因卻不能表達出病毒的外殼和膜蛋白成分，因此其不能像普通的病毒一樣在宿主細胞能反復(fù)增殖，故對宿主細胞是無害的并且高效的將目的基因轉(zhuǎn)然到靶細胞基因組中。，48小時即可看熒光，具體時間根據(jù)細胞狀態(tài)來看。第三步是用特異性的抗體檢測出已經(jīng)印跡在膜上的所要研究的相應(yīng)抗原。有時候覺得自己像個神經(jīng)病。只有你自己才能把歲月描畫成一幅難以忘懷的人生畫卷。在紛雜的塵世里，為自己留下一片純靜的心靈空間，不管是潮起潮落，也不管是陰晴圓缺，你都可以免去浮躁，義無反顧，勇往直前，輕松自如地走好人生路上的每一步3. 花一些時間，總會看清一些事。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質(zhì)按分子量大小在凝膠中分成帶。，以保證病毒的濃度，在培養(yǎng)10h左右可根據(jù)培養(yǎng)基顏色加培養(yǎng)基。質(zhì)粒DNA為能轉(zhuǎn)錄出慢病毒遺傳物質(zhì)（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質(zhì)粒，其同時連有目的基因和報告基因，psPAX2為能表達慢病毒外殼的質(zhì)粒，其表達產(chǎn)物可通過粘附機制更易穿過細胞膜， ，通過 lipofectamine2000進行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)到靶細胞基因組中，宿主基因組在表達時，隨宿主基因轉(zhuǎn)錄出的目的基因RNA與psPAX第一天：用無抗生素DMEM+10%FBS鋪板293FT細胞，2ml/孔。7）12000轉(zhuǎn)離心1min，棄濾液。質(zhì)粒DNA在大腸桿菌里轉(zhuǎn)化連接上目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌是為了讓目的基因在大腸桿菌里擴增，然后提取質(zhì)粒，以下是質(zhì)粒DNA在大腸桿菌里轉(zhuǎn)化的三步驟。3） 消化好的腺病毒表達載體轉(zhuǎn)染 293A 細胞，收獲細胞以制備病毒粗提液。5） 分裝、 80 ℃保存。2） 可以通過簡單方式，在短時間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達特定基因的多種細胞株。1） 直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細胞均有感染作用，適合 RNAi 研究和體內(nèi)實驗中難于轉(zhuǎn)染的細胞 (比如神經(jīng)元細胞、干細胞或其它 原代細胞)。4） 病毒的純化和濃縮。1） 構(gòu)建表達 siRNA/miRNA 的腺病毒載體2） 采用 PacI 消化純化的質(zhì)粒。通過個些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過
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