病毒感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)整體流程與原理doc(存儲(chǔ)版)
【正文】 ）加入500ul溶液W（去鹽液），12000轉(zhuǎn)離心1min，棄濾液，重復(fù)一次。5. 610h后，移除含有DNA脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基，代之以正常培養(yǎng)液DMED+10%FB（從此刻開(kāi)始算時(shí)間）。在第五天再用該病毒感染靶細(xì)胞，病毒進(jìn)入細(xì)胞后，其遺傳物質(zhì)RNA反轉(zhuǎn)錄出DNA，該基因再整合到靶細(xì)胞的基因組中，完成轉(zhuǎn)染過(guò)程，因?yàn)橘|(zhì)粒DNA只能轉(zhuǎn)錄出病毒RNA和表達(dá)目的基因卻不能表達(dá)出病毒的外殼和膜蛋白成分，因此其不能像普通的病毒一樣在宿主細(xì)胞能反復(fù)增殖，故對(duì)宿主細(xì)胞是無(wú)害的并且高效的將目的基因轉(zhuǎn)然到靶細(xì)胞基因組中。，48小時(shí)即可看熒光，具體時(shí)間根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)來(lái)看。第三步是用特異性的抗體檢測(cè)出已經(jīng)印跡在膜上的所要研究的相應(yīng)抗原。有時(shí)候覺(jué)得自己像個(gè)神經(jīng)病。只有你自己才能把歲月描畫(huà)成一幅難以忘懷的人生畫(huà)卷。在紛雜的塵世里，為自己留下一片純靜的心靈空間，不管是潮起潮落，也不管是陰晴圓缺，你都可以免去浮躁，義無(wú)反顧，勇往直前，輕松自如地走好人生路上的每一步3. 花一些時(shí)間，總會(huì)看清一些事。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)按分子量大小在凝膠中分成帶。，以保證病毒的濃度，在培養(yǎng)10h左右可根據(jù)培養(yǎng)基顏色加培養(yǎng)基。質(zhì)粒DNA為能轉(zhuǎn)錄出慢病毒遺傳物質(zhì)（RNA），但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質(zhì)粒，其同時(shí)連有目的基因和報(bào)告基因，psPAX2為能表達(dá)慢病毒外殼的質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可通過(guò)粘附機(jī)制更易穿過(guò)細(xì)胞膜， ，通過(guò) lipofectamine2000進(jìn)行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)到靶細(xì)胞基因組中，宿主基因組在表達(dá)時(shí)，隨宿主基因轉(zhuǎn)錄出的目的基因RNA與psPAX第一天：用無(wú)抗生素DMEM+10%FBS鋪板293FT細(xì)胞，2ml/孔。7）12000轉(zhuǎn)離心1min，棄濾液。質(zhì)粒DNA在大腸桿菌里轉(zhuǎn)化連接上目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌是為了讓目的基因在大腸桿菌里擴(kuò)增，然后提取質(zhì)粒，以下是質(zhì)粒DNA在大腸桿菌里轉(zhuǎn)化的三步驟。3） 消化好的腺病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染 293A 細(xì)胞，收獲細(xì)胞以制備病毒粗提液。5） 分裝、 80 ℃保存。2） 可以通過(guò)簡(jiǎn)單方式，在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株。1） 直接包裝成為假病毒顆粒，對(duì)分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用，適合 RNAi 研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它 原代細(xì)胞)。4） 病毒的純化和濃縮。1） 構(gòu)建表達(dá) siRNA/miRNA 的腺病毒載體2） 采用 PacI 消化純化的質(zhì)粒。通過(guò)個(gè)些特性，人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過(guò)
法律信息相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1