【正文】 t 核苷酸八聚體；PSE近端序列元件，提高轉(zhuǎn)錄效率；TATA區(qū)。這種調(diào)節(jié)元件可以插入載體自身，也可以插入宿主的染色體。一個選擇性剪接的例子就是SV40,當(dāng)它感染細胞時，引導(dǎo)2種蛋白質(zhì)的合成：大T抗原和小T抗原。同時可以節(jié)省大量的遺傳信息。核酶的應(yīng)用舉例：1．核酶在腫瘤治療中的應(yīng)用主要集中在以下幾個方面①核酶與癌基因：核酶獨特的切割目的基因的方式有可能阻斷癌基因的表達, 從而逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞惡性增殖, 并誘導(dǎo)其分化和凋亡。只有某些特定的激活因子作用于已整合人細胞基因的 HIV 前病毒LTR時，才能啟動表達，或使表達從低水平轉(zhuǎn)入高水平。在蛋白質(zhì)翻譯中，每種tRNA分子在它到達核糖體之前都需與相應(yīng)的氨基酸結(jié)合，這種結(jié)合是在一系列被稱為氨酰tRNA合成酶作用下完成的。在原核生物中，轉(zhuǎn)錄和翻譯同時進行。通過翻譯弱化和翻譯偶聯(lián)在翻譯水平上進行精確調(diào)節(jié)，具有重要意義。cAMPCAP復(fù)合物的形成取決于細胞內(nèi)cAMP的濃度，當(dāng)以葡萄糖為能源時，由于其抑制腺苷酸環(huán)化酶的活性，ATP不能轉(zhuǎn)化為cAMP，細胞內(nèi)cAMP濃度降低，形不成CAPcAMP復(fù)合物，因而乳糖結(jié)構(gòu)基因不被轉(zhuǎn)錄。這3個酶的作用是使半乳糖變成葡萄糖1磷酸。在沒有外源半乳糖的情況下，UDPgal是通過半乳糖差向異構(gòu)酶的作用由UDP葡萄糖合成的，該酶是galE基因的產(chǎn)物。這些變性蛋白的折疊發(fā)生改變，暴露出分子內(nèi)部的疏水區(qū)域，從而導(dǎo)致HSP與其結(jié)合。在46℃下細胞合成的蛋白質(zhì)大約30％為一組相當(dāng)保守的熱激蛋白（heat shock protein, HSP）。熱激誘導(dǎo)σ32的合成發(fā)生在翻譯水平。隨后積累的HSP，包括DnaK/HflB，促進σ32的降解，并抑制其合成。. 染色體丟失：某些低等真核生物，如蛔蟲，在其發(fā)育早期卵裂階段，所有分裂細胞出一個外，均將異染色質(zhì)部分刪除掉，從而使染色質(zhì)減少約一半。 順式作用元件: 如絕緣子: 在染色體結(jié)構(gòu)域的邊界,可阻止增強子對區(qū)域外啟動子的影響。 順式作用元件：如增強子，存在于真核細胞中，能顯著加強轉(zhuǎn)錄活性，由比較集中的保守序列組成，它與啟動子的相對位置無關(guān)，也無方向性。翻譯水平的調(diào)節(jié)主要是控制mRNA的穩(wěn)定性和有選擇的進行翻譯。它們還能與正在合成的σ32結(jié)合，阻止其進一步的合成。HSP的誘導(dǎo)合成是由于細胞內(nèi)的σ32水平瞬間升高引起的。 大腸桿菌的最適生長溫度是37℃，當(dāng)環(huán)境溫度升至43℃左右時，細菌還能正常生長。在正常狀態(tài)下，HSF以無活性的單體形式存在于細胞漿中，并與某些HSP結(jié)合在一起。當(dāng)有cAMPCAP時，轉(zhuǎn)錄從S1開始，當(dāng)無cAMPCAP時，轉(zhuǎn)錄從S2開始。21. 解釋大腸桿菌半乳糖操縱子的兩啟動子調(diào)控機制。正調(diào)空機制：cAMPCAP復(fù)合物與 DNA結(jié)合改變了這一區(qū)段 DNA次級結(jié)構(gòu)，促進了RNA聚合酶結(jié)合區(qū)的解鏈。而在原核生物通過蛋白因子進行調(diào)控的途徑有限，而多順反子則可以通過mRNA中不同蛋白編碼序列與起始位點的距離進行表達量的調(diào)控。真核的mRNA只編碼一種蛋白質(zhì)，稱為單順反子。例如:如何獲得高效、無毒的特異性核酶,如何選擇靶序列中最佳切割位點,如何提高核酶進入靶細胞的效率并穩(wěn)定發(fā)揮作用等。2．核酶在抗病毒中的應(yīng)用①抗艾滋病病毒HIV：HIV的長末端重復(fù)序列(LTR)參與病毒蛋白生成的調(diào)節(jié)，起著類似“開關(guān)”的作用。從目前來看，核酶的應(yīng)用主要在基因治療上。mRNA 選擇性剪接涉及生命現(xiàn)象的很多方面，如細胞分化，個體發(fā)育，免疫機理，某些遺傳病的發(fā)生等等。真核生物含有限數(shù)目的基因，但是當(dāng)嚴(yán)格需要時，真核生物通過一系列精確的工具來加工 mRNA,產(chǎn)生不同的轉(zhuǎn)錄類型。需要一種高效的原核表達載體，包括一個強大并且可以嚴(yán)緊調(diào)節(jié)的啟動子；一位于翻譯起始密碼子5’端大約9bp的SD序列；位于目的基因3’末端的一個高效轉(zhuǎn)錄終止子。TFⅢB本身不具有結(jié)合DNA的能力，RNA聚合酶Ⅲ也不能識別特異的DNA序列。13. RNA聚合酶III識別的啟動子有哪幾類？其定位因子是什么？RNA聚合酶的啟動子有三種類型結(jié)構(gòu)。它們受相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子的識別和作用。發(fā)生在兩個部位的結(jié)合因子之間相互作用的詳細情況尚不清楚。11. RNA聚合酶I識別的啟動子包含有哪兩個部分？分別有什么蛋白因子識別？RNA聚合酶Ⅰ只轉(zhuǎn)錄編碼核糖體RNA的基因，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)切割和加工后生成各種成熟rRNARNA 聚合酶I 的轉(zhuǎn)錄單位有兩段起始調(diào)控序列，核心啟動子(Core promoter)和與之相距70bp 處的上游啟動元件upstream promoter element(UPE) （舊稱上游控制元件(Upstream control element，UCE)）核心啟動子(Core promoter)位于起始位點周圍，從45 延伸到+20，它本身就足以起始轉(zhuǎn)錄。在35區(qū)和10區(qū)之間的距離17177。反轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制機制：反轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制是由其自身基因組上pol基因編碼的反轉(zhuǎn)錄指導(dǎo)完成的，該酶具有以下三種性能：①能以RNA為模板合成出第一條互補的DNA鏈（逆轉(zhuǎn)錄酶活性）；②在新和成的DNA鏈上合成另一條互補DNA鏈，形成雙鏈DNA（DNA聚合酶活性）；③水解除去RNADNA雜合分子中的RNA（Rnase活性，即核糖核酸酶活性）。它能結(jié)合到雙鏈的上并使雙鏈解旋并分開，當(dāng)遇到Chi位點時，RecBCD就切開一條單鏈，并失去RecD亞單位，RecBC繼續(xù)解開雙鏈。正常情況下處于不活動狀態(tài)。重組修復(fù)從 DNA分子的半保留復(fù)制開始，在嘧啶二聚體相對應(yīng)的位置上因復(fù)制不能正常進行而出現(xiàn)空缺,在大腸桿菌中已經(jīng)證實這一DNA損傷誘導(dǎo)產(chǎn)生了重組蛋白,在重組蛋白的作用下母鏈和子鏈發(fā)生重組,重組后原來母鏈中的缺口可以通過DNA多聚酶的作用,以對側(cè)子鏈為模板合成單鏈DNA片斷來填補,最后也同樣地在連接酶的作用下以磷酸二脂鍵連接新舊鏈而完成修復(fù)過程。最初在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，包括一系列復(fù)雜的酶促DNA修補復(fù)制過程,主要有以下幾個階段：核酸內(nèi)切酶識別DNA損傷部位，并在5’端作一切口，再在外切酶的作用下從5’端到3’端方向切除損傷；然后在 DNA多聚酶的作用下以損傷處相對應(yīng)的互補鏈為模板合成新的 DNA單鏈片斷以填補切除后留下的空隙；最后再在連接酶的作用下將新合成的單鏈片斷與原有的單鏈以磷酸二酯鏈相接而完成修復(fù)過程。人類細胞中發(fā)現(xiàn)了一種端粒結(jié)合蛋白，但人類染色體末端的DNA蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu)還不清楚。（3）子代分子可能是連環(huán)的，即對應(yīng)于每個單位基因組的相同DNA分子頭尾相連。新鏈圍繞著環(huán)狀負(fù)鏈模板延伸，直到到達原點并代替原點。β二聚體自己并不能組裝到DNA 上 ,它是通過γ復(fù)合物與ATP協(xié)同作用催化ATP的水解而組裝到DNA上的。方向合成DNA的催化活性，每秒可以合成8個核苷酸ε 亞基具有339。3. DNA鏈的終止當(dāng)子鏈延伸達到terminus region（ter，帶有多個20bp序列）時，DNA復(fù)制就終止了。DNA子鏈被合成后，母鏈立即被甲基化（稱為hemimethylated）。1. DNA復(fù)制的起始大腸桿菌中的復(fù)制起始位點是Ori C，全長245Bp，該序列在所有細菌復(fù)制起始位點中都是保守的。Helicase，任何DNA在被復(fù)制前都必須解開雙鏈，這個過程是由helicase來完成的，它可在ATP的作用下將DNA母鏈不斷解開形成單鏈。四級結(jié)構(gòu)：幾個亞基在三級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上相互作用所形成的空間結(jié)構(gòu)。Domain結(jié)構(gòu)域：多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)或超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成三級結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)，它是相對獨立的緊密球狀實體，稱為結(jié)構(gòu)域。、超二級結(jié)構(gòu)（MOTIF）、三級結(jié)構(gòu)、DOMA