【正文】 劑即甲醛、戊 16 二醛和丙稀醛接近于達(dá)到上述要求。在我們的日常工作科研中，對(duì)于組織的固定，應(yīng)有針對(duì)性的選擇，方能獲得滿意的效果。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認(rèn)為，固定液的量與組織的比應(yīng)是 20： 1，這個(gè)要求對(duì)于小組織來說是完全可以達(dá)到的，但對(duì)于大標(biāo)本來說，則是一件非常困難的事情。在一般的常規(guī)病理活檢組織 中，往往用一種固定液，就能夠達(dá)到目的，獲得滿意的結(jié)果。根據(jù) Bencroft 的分類法，將不同的固定劑分為四種類型： Ⅰ類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。 甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，這種在組織化學(xué)方法當(dāng)中，能使酶鈍化，影響其反應(yīng)。 10%福爾馬林鹽固定液 甲醛 100 ml 自來水 900ml Nacl9 克 先將 Nacl 溶于水，再加入甲醛。 當(dāng)前國(guó)內(nèi)外基本上都還是要用甲醛來固定組織。如果沒有酒精，將會(huì)無法完成必要的工作。然后移入 75%的酒精中。 對(duì)組織收縮較大，不宜作單純固定液。切片脫水時(shí)，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。根據(jù)這個(gè)特點(diǎn)，用它配成許多種不 同的混合固定液，以達(dá)到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。冰醋酸也有許多不足之處： 不能作為單一的固定劑。 可配成多種的混合固定液 （ 1） Helly 氏液 [7] 重鉻酸鉀 25g 升汞 50g 蒸餾水 1000ml 甲醛 50ml 臨用時(shí)加入甲醛，因其加入后于 24 小時(shí)后可發(fā)生沉淀而失效，因用時(shí)應(yīng)特別注意。 （六） 氯化汞又稱升汞，具有毒性。經(jīng)升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長(zhǎng)時(shí)間，經(jīng) 24h 后沖 水，然后保存于 70%或 80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉淀，以免由于汞鹽沉淀在切片上而影響對(duì)切片的觀察。 微波是一種具有能量的電磁波，在其運(yùn)動(dòng)期間可產(chǎn)生瞬間熱。微波爐一般分為高火、中火及低火。 第四節(jié) 病理制片程序 一常規(guī)石蠟切片制片法 組織經(jīng)系列酒精的脫水，經(jīng)透明劑的作用，經(jīng)熔化的石蠟的浸漬，包埋后所切成的切片稱為石蠟切片。在使用時(shí)， 通常是從低濃度至高濃度，濃度系列通常是 70%、 80%、 90%、 95%和 100%，組織經(jīng)過這一系列處理后，基本可達(dá)到脫水的目的。 （ 2）、自動(dòng)組織脫水機(jī)脫水法 自動(dòng)組織脫水機(jī)的機(jī)型品種繁多，大小不一，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的軌道式和圓盤式兩種，國(guó)外生產(chǎn)的有圓盤式和柜式兩種，上述國(guó)內(nèi)外四種型號(hào)的機(jī)子，我們都使用過，根據(jù)使用的效果做一簡(jiǎn)單介紹。國(guó)外生產(chǎn)的也有同類產(chǎn)品。試劑貯存箱內(nèi)由 12 個(gè)缸組成，每個(gè)缸的容量為 升。 能大批量地處理標(biāo)本。總之組織的透明，應(yīng)視組織的大小而定，不能千篇一律，要經(jīng)常觀察組織的透明情況，組織一經(jīng)透明，就必須從二甲苯中取出。 二甲苯及苯類物質(zhì)被認(rèn)為是一種致癌性的物質(zhì)，許多單位和個(gè)人都不敢用或盡量少用，或者在切片染色至酒精后，將切吹干就進(jìn)行封片，這種做法是非常糟糕的，以。 二甲苯是一種透明無色的液體，揮發(fā)性強(qiáng)，打開后即可聞其味道，能溶解石蠟，能溶于酒精及丙酮等，但不能溶于水，它是一種良好的透明劑，組織經(jīng)充分脫水后放入該試劑，視組織的大小、種類的不同，確定不同的時(shí)間，便能達(dá)到透明目的。 整個(gè)過程過置于真空負(fù)壓的條件下來進(jìn)行，尤其是浸蠟，可節(jié)省 1/3 以上的時(shí)間，浸蠟充分徹底，尤其是對(duì)多孔的組織如肺組織，效果更明顯。第五套為“八一”程序，第六套為“十一”程序，第七套為元旦程序，第八套為春節(jié)程序，這后 面幾套為節(jié)假日程序，根據(jù)節(jié)假日的放假時(shí)間不同，編排不同的程序。這種機(jī)器脫水時(shí)也屬于揭蓋式的，因此，試劑容易揮發(fā)，特別在夏天，必須經(jīng)常添加試劑，以補(bǔ)充被揮發(fā)去的試劑。 不能大批量的進(jìn)行脫水。因它不管在什么樣比例的情況下都能和水混合，所以它可以慢慢地將水從組織中置換出來。因?yàn)榛顧z取材，現(xiàn)目前組織的制作，都基本上用機(jī)器來進(jìn)行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所制成，組織取材后，一個(gè)一個(gè)的盒子裝著組織，如果除去金屬來用微波固定，這是不現(xiàn)實(shí)的事情。我們的實(shí)驗(yàn)認(rèn)為， 65℃左右的溫度可適合于各種組織，條件是固定取小塊材料，時(shí)間在截取 34min。但是這些固定劑從某些方面來說其穿透力不很強(qiáng)，因而需要較長(zhǎng)時(shí)間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應(yīng)用快速加熱法預(yù)先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發(fā)，污 染環(huán)境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點(diǎn)。 可配成許多混合固定液如： Zenker 氏、 Helly 氏和 Stieve 氏等。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應(yīng)特別注意。它的優(yōu)點(diǎn)是： 能固定脂肪及類 脂物。如果做 HE 的染色，該液不適合。 各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用，尤其是對(duì)富含纖維的組織。 可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意。 可用來保存標(biāo)本。高濃度的酒精如 95%，無水酒精可保存上述兩種物質(zhì)，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物質(zhì)的存在， 19 就不能用含水的固定液來固定組織。 5．醛糖鈣固定液 甲醛 100ml 蔗糖 300ml 乙酸鈣 20g 蒸鎦水 90ml 先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。 甲醛可配成簡(jiǎn)單的或混合的固定液，最簡(jiǎn)單和最容易掌握的方法，就是取 10ml 甲醛液，加水 90ml，這就是 10%的福爾馬林 .當(dāng)然 ,現(xiàn)在使用的固定液要求較為嚴(yán)格些 ,最好是使用緩沖福爾馬林固定液 ,這將有利于后來的免疫組化染色的需要 . 從組織學(xué)的觀點(diǎn)來說 ,甲醛是一種良好的固定劑 ,它有很多的優(yōu)點(diǎn) : 1. 組織收縮較少 ,損傷少 ,保存固有物質(zhì)好 . 2. 固定均勻 ,穿透力強(qiáng) . 3. 能使組織硬化 ,增進(jìn)組織彈性 ,有利于切片 . 4. 能保存脂肪及脂類物質(zhì) . 5. 成本較低 . 雖然甲醛有上述的優(yōu)點(diǎn) ,但這都是相對(duì)而言 ,任何物質(zhì)都不可能十全十美的 ,它也有許多缺點(diǎn) : 1. 雜質(zhì)含量較多 ,如甲醇 ,可鈍化酶類 ,影響反應(yīng) . 2. 含有微量甲酸 ,導(dǎo)致固定液酸變 ,影響染色 . 3. 可產(chǎn)生福爾馬林色素 ,影響觀察 . 4. 不能固定尿酸和糖類物質(zhì) . 5. 容易揮發(fā) ,污染環(huán)境 ,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸 . 6. 可長(zhǎng)期存在于固定過的組織上 .有人做過實(shí)驗(yàn) ,組織用甲醛固定后在 流水中沖洗 5 小時(shí)后 ,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合 ,但需要經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的流水沖洗 (24 天的沖洗 )方能除去 .可見存在于組織上的甲醛是不可能除去的 .因?yàn)榕R床活檢不可能有這么長(zhǎng)的時(shí)間來沖洗組織 .因此要特別指出的是 ,在其后的各種技術(shù)操作中 ,要特別注意到甲醛的存在 ,必須要想辦法除去它 ,否則將會(huì)給各種染色造成影響 ,甚至導(dǎo)致 18 失敗 . 應(yīng)用甲醛 ,可以配成許多種固定液 : 1. 10%緩沖福爾馬林固定液 甲醛 100ml 蒸餾水 900ml NaH2PO4 （十）甲醛 甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛 37— 40%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為 。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧 17 酸固定。固定劑是一種化學(xué)語試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse 指出，對(duì)每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學(xué)研究中的準(zhǔn)備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分反應(yīng)基團(tuán)的效用。固定時(shí)間過長(zhǎng)，可降低抗原的活性。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對(duì)組織固定很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對(duì)固定脫水盒為銅質(zhì)的組織時(shí)，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對(duì)抗原的損害，對(duì)于免疫組織化學(xué)的顯示，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明：可呈弱陽性乃至陰性。固定劑的種類繁多，成份復(fù)雜，對(duì)組織的作用不盡 相同，英國(guó)著名的組織化學(xué)專家 Pearse 指出：對(duì)于每個(gè)既定的組織化學(xué)方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學(xué)研究準(zhǔn)備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對(duì)于各種組織成分的反應(yīng)基團(tuán)的效用。對(duì)于其它達(dá)不到些要求是越快越好。對(duì)于有教學(xué)任務(wù)的醫(yī)院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價(jià)值的大體標(biāo)本，有些大體標(biāo)本，是很難得到的。細(xì)胞的固有物質(zhì)，即細(xì)胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧體，細(xì)胞骨架，組織液，抗原、糖元等。 （一）、固定的作用 組織經(jīng)一系列的處理 后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。路途遙遠(yuǎn)者，可將檢材放入無菌甘油瓶?jī)?nèi)，在 低溫下送檢 [4]。也可人前面鋸開椎體，取出脊髓。 B在灰結(jié)節(jié)部將大腦作冠狀切開，檢查各基底神經(jīng)核，外囊，島葉，下視丘，側(cè)腦室，第三腦室，然后向前向后每隔 作多個(gè)切面檢查。檢查肝的大小，重量，硬度，色澤，注意檢查肝靜脈及腔靜脈，切面外翻否，小葉結(jié)構(gòu)清楚否及有無其它病變。 ② 小腸與大腸的取出前， 應(yīng)檢查腸系膜 淋巴結(jié)及血管，找出空腸的起端，切斷，自腸系膜附著處將腸割下，直至直腸處將其切 斷取出，腸的斷端應(yīng)鉗緊或結(jié)扎，以免糞便污染腹腔。切開檢查肺切面的改變，有無病灶、氣腫、萎陷等，肺門淋巴結(jié)腫大否，切面情況。 B：左心剖開法：第一步，用刀或剪將左心房從左、右靜脈入口之間作直線剖開，以手指檢查二尖瓣是否狹窄。 （ 5） 疑有空氣體栓塞時(shí)，將心包剪開一小口，用鑷子拉緊切口兩側(cè)心包膜，心包腔內(nèi)注滿水，然后，在水上剪開右心房及肺動(dòng)脈，觀察有無氣泡逸出，或者先結(jié)扎進(jìn)出心臟的大血管，取出心臟，淹沒于水下剪開右心，觀察有無氣泡逸出。 （ 2） 腹腔檢查：檢查腹腔內(nèi)有無積 液和積氣，腹膜情況，各器官的位置。留做檢查的標(biāo)本應(yīng)徹底固定，然后檢查。剖開的一般原則： a，顯露器官的最大面積，一般從長(zhǎng)軸剖開； b，將器官內(nèi)導(dǎo)管一齊切開，顯露其分布及關(guān)系。 7， 新生兒剖檢時(shí)，應(yīng)注意肺臟曾否呼吸，發(fā)現(xiàn)心、血管畸形時(shí)，應(yīng)將心與肺一并取出，仔 11 細(xì)檢查心與肺循環(huán)的關(guān)系。操作時(shí)應(yīng)注意 保持清潔，手套、刀剪、器械及尸體表面有血染時(shí)，應(yīng)隨退即洗凈，切勿將污水濺起或?yàn)⒂诘厣稀? 3， 醫(yī)療糾紛病例，必須有醫(yī)療單位和家屬要求的尸體解剖委托書，委托書需簽名或加蓋公章。 （ 1）委托尸檢手續(xù)不完備者（包括未按規(guī)則交納尸檢費(fèi)用者）。 （ 1）同意有關(guān)受理尸檢機(jī)構(gòu)對(duì)死者進(jìn)行尸檢。 受理尸檢部門應(yīng)是具備獨(dú)立尸檢能力的①醫(yī)院病理科；②醫(yī)學(xué)院校的病理學(xué)教研室；經(jīng)醫(yī)政部門注冊(cè)的病理學(xué)診斷中心。 2瘺管或竇道組織：應(yīng)作多數(shù)橫斷面檢查，適當(dāng)取材。 9 2刮宮或陰道排出物標(biāo)志：疑有妊娠者，須仔細(xì)尋找有無胎盤絨毛，眼觀不能判斷時(shí)，須取組織塊，尤應(yīng)注意檢查血凝塊。取材：整個(gè)短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。取材：空洞壁，散播的病變，肺門淋巴結(jié)。檢察前應(yīng)觀察 X 線片。 1膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般沿前側(cè)切開，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長(zhǎng)情況及浸潤(rùn)情況，有無淋巴結(jié)（大小，硬度，切面變化）。 1腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。 肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無結(jié)節(jié)狀或纖維組織增生，有無灰白色結(jié)節(jié)等。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊?；蜓亻L(zhǎng)軸通過腫瘤全徑取出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋 胃潰瘍及胃癌： 全胃或部分切除，大彎及小彎長(zhǎng)度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，硬度及數(shù)目，病變處相應(yīng)漿膜面有何變化。 ⑩ 組織取完即刻放入打印好號(hào)碼的盒內(nèi)，放入固定液中固定。以利于教學(xué)標(biāo)本，陳列標(biāo)本的收集。編號(hào)按年份和流水號(hào)兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號(hào)為較好。 2， 標(biāo)本經(jīng)上述驗(yàn)收后，進(jìn)行編號(hào)登記，以防錯(cuò)亂。 ④ 對(duì)于罕見特殊的標(biāo)本，應(yīng)小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標(biāo)本。 ⑨ 每取完一例標(biāo)本后，所有的工具如刀，剪，盤鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病 例。取材：腫瘤上下交界處各取一塊。 腸梗 阻：梗阻部位、長(zhǎng)度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無潰瘍。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。 1肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林固定。 ④ 肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或 多腔，腔中有無膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內(nèi)為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門淋巴結(jié)情況。 1淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。 取材：最大面積，切成數(shù)塊全 作切片，如為根治術(shù)，要取全部淋巴結(jié)。 取材：母體面、子體面臍帶各一塊。 [2] 第二節(jié) 尸體解剖的受理和規(guī)則