藥品檢驗(yàn)用菌種的傳代和保藏(存儲(chǔ)版)
【正文】 0級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)，全過程必須無菌操作， 防止微生物污染 。藥品微生物檢驗(yàn)用菌種的傳代和保藏 浙江省藥品檢驗(yàn)所 葉銘龍 2 菌種的定義及其與各應(yīng)用領(lǐng)域的關(guān)系 ? 菌種泛指從自然界獲取的各種微生物的不同的種。 無菌隔離艙 7 獲取純培養(yǎng)的接種工具 接種環(huán) 接種針 接種鏟 接種鉤 其他玻璃器械 8 獲取純培養(yǎng)的其他器具 玻璃器皿：如各種規(guī)格培養(yǎng)皿。 13 定期移植保藏法 一般步驟為： 將菌種接種在所要求的培養(yǎng)基上，置最適溫度下集菌培養(yǎng)。 15 定期移植保藏法 需定期檢查 移植進(jìn)行時(shí)，應(yīng)仔細(xì)核對(duì) 集菌培養(yǎng)完成后，應(yīng)比較培養(yǎng)特征 應(yīng)注意觀察各代之間的變化 16 瓊脂斜面低溫保藏法 菌種的典型菌落接種至斜面，規(guī)定的溫度和時(shí)間培養(yǎng)，充分生長，硅膠塞換成無菌橡膠塞。 ? 該法對(duì)酵母菌的保藏最為有效，對(duì)大多數(shù)細(xì)菌保藏效果一般。 ? 放線菌于 4～ 6℃ 保藏，每 3個(gè)月移植一次。 保存菌種傳代或凍干均應(yīng)填寫專用記錄，菌種管上應(yīng)有標(biāo)簽，表明菌種編號(hào)、代次、批號(hào)、日期。 ? 接種后，將斜面置規(guī)定溫度、時(shí)間培養(yǎng)。 38 過期菌種處理 ? 過期菌種應(yīng)及時(shí)清理、登記，并經(jīng) 121 ℃ 、30分鐘高壓消毒滅菌。 40 例 2：黑曲霉的傳代技術(shù) ? 制備孢子懸液：取滅菌水或生理鹽水 3～5ml，分 2～ 3次小心滴加至菌種管內(nèi)（試管斜面），反復(fù)振搖。 44 大腸埃希菌 確認(rèn)該菌未發(fā)生變異的主要方法為： 通過顯微鑒別，為成對(duì)和呈短鏈排列的近球形的桿菌，一般不形成莢膜，革蘭氏染色為陰性。 47 銅綠假單孢菌 該菌為微生物限度檢查規(guī)定不得檢出的控制菌，可利用氧化酶試驗(yàn)和綠膿菌素試驗(yàn)迅速判斷所保藏的菌種有無發(fā)生變異。 51 金黃色葡萄球菌 確認(rèn)該菌未發(fā)生變異的主要方法為： 通過顯微鑒別，為 單個(gè)或成對(duì)呈短鏈和不規(guī)則堆團(tuán)狀排列的球菌 ，革蘭氏染色為陽性。 55 黑曲霉 確認(rèn)該菌未發(fā)生變異的主要方法為： 通過顯微鑒別，可見分隔菌絲體，分生孢子穗球形，黑色。 54 白色念珠菌 確認(rèn)該菌未發(fā)生變異的主要方法為： 通過顯微鑒別，可見卵形細(xì)胞，有多邊芽殖現(xiàn)象，有假菌絲。 營養(yǎng)瓊脂斜面上菌苔 硫黃色到酪黃色，光滑，軟。 營養(yǎng)瓊脂斜面上菌苔 生長旺盛，薄，白色，閃光，培養(yǎng)基變?yōu)榫G色至暗褐色或黑色，發(fā)熒光。 營養(yǎng)瓊脂斜面上菌苔 生長豐厚，粗糙，不透明，不閃光，蠟質(zhì)，蔓延，奶油色至微褐色。 ? 至 6月 22日，重復(fù)步驟 2，得第四代菌種管。 b：每一子菌種都應(yīng)以適當(dāng)標(biāo)簽、標(biāo)記來表示名稱、標(biāo)準(zhǔn)號(hào)、接種日期和傳代日期。 ? 接種操作：左手拿住菌種管，將管口靠近火焰旁，右手拿接種棒，將白金耳燒紅約 30秒，桿部通過火焰滅菌。 菌種傳代次數(shù)規(guī)定： 2022版藥典規(guī)定不超過 5代。 ? 對(duì)細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌等都有一定的效果，有些菌種最長可達(dá) 17年 。 液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基上端 ～1cm為宜 4～ 6 ℃ 冰箱保藏
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