高效液相色譜儀ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 柱 溫： 50 186。 當(dāng)樣品中溶質(zhì)組分較多及不同溶質(zhì)的性質(zhì)差別較大時(shí)，考慮梯度洗脫。有機(jī)相濾膜一般用于過濾有機(jī)溶劑，過濾水溶液時(shí)流速低或?yàn)V不動(dòng)。 ? 流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法 正常進(jìn)行。 在選擇溶劑時(shí)， 溶劑的極性 是選擇的重要依據(jù)。 四、液相色譜的流動(dòng)相 1. 流動(dòng)相特性 ? 液相色譜的流動(dòng)相又稱為：淋洗液，洗脫劑。 缺點(diǎn) ：只適合于能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的檢測(cè)。 溶 劑 UV截止波長(zhǎng)（ nm） 乙 腈 190 水 190 環(huán) 己 烷 195 己 烷 200 甲 醇 210 乙 醇 210 乙 醚 220 二氯甲烷 220 氯 仿 240 四氯化碳 265 四氫呋喃 280（ 220） 甲 苯 285 在使用紫外檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)與所用溶劑的截止波長(zhǎng)接近（或低于截止波長(zhǎng)）時(shí)，容易產(chǎn)生噪音干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。 (4) 液相色譜 檢測(cè)器 分類 按檢測(cè)原理： 光學(xué)檢測(cè)器（如 紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射 ） 熱學(xué)檢測(cè)器 (如吸附熱） 電化學(xué)學(xué)檢測(cè)器（如庫(kù)倫、安培） 電學(xué)檢測(cè)器（電導(dǎo)、介電常數(shù)） 按測(cè)量性質(zhì)： 通用型檢測(cè)器（如示差折光、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器） 專屬型檢測(cè)器（如紫外、熒光檢測(cè)器） 按檢測(cè)方式： 濃度型檢測(cè)器 質(zhì)量型檢測(cè)器 著重介紹四種檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器（光電二極管陣列檢測(cè)器）、 示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 工作原理 ：基于朗伯 比爾定律。由于硅膠表面的硅羥基 (SiOH)或其他極性基 團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即 極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱；正相色譜使用的流動(dòng)相極性相 對(duì)比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。 自動(dòng)進(jìn)樣器 色譜柱是高效液相色譜的心臟，在 HPLC的使用中， 保持色譜柱的柱效，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。 六通進(jìn)樣閥具有使用方便，進(jìn)樣量準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。 也即是貯液瓶中的有機(jī)溶劑或緩沖溶液靠 高壓泵 送入色譜柱。 定義為英鎊 /平方英寸， 它們之間的換算關(guān)系為： 1bar≈ =105Pa ， 145psi = 1Mpa 1psi = = 高壓泵 應(yīng)具有以下性能 ? 流量穩(wěn)定，精度在 1%左右 ? 輸出壓力高，通常 20~30MPa，最高 50 MPa ? 流量范圍寬，一般在 ~10mL/min范圍內(nèi) ? 能抗溶劑腐蝕 ? 壓力波動(dòng)小、更換溶劑方便、容易清洗、具梯度洗脫 ? 操作方便、容易維修 ? 根據(jù)泵的操作原理不同，分為恒壓泵和恒流泵 氣動(dòng)放大泵（恒壓泵） 往復(fù)泵 （恒流泵）是目前液相色譜使用最普遍的一種 高 壓泵。L、 50181。 發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被 沖洗出 ， 而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留 。 a. 紫外檢測(cè)器 (UVD)： 應(yīng)用最廣泛的選擇性檢測(cè)器。 特點(diǎn) ：通用性檢測(cè)器； 對(duì)溫度變化比較敏感，要保持在 177。色譜柱后流出物在通向檢測(cè)器途中，被高速載氣 (氮?dú)?)噴成霧狀液滴，再進(jìn)入蒸發(fā)漂移管中，流動(dòng)相不斷蒸發(fā)，含溶質(zhì)的霧狀液滴形成不揮發(fā)的微小顆粒，被載氣載帶通過檢測(cè)器。 ? 若流動(dòng)相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。 常用溶劑的極性順序 ： 水 (最大 ) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷 氯仿 溴乙烷 苯 四氯化碳 二硫化碳 環(huán)己烷 己烷 煤油 (最小 ) 3. 流動(dòng)相選擇 4. 選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問題 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下
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