有機(jī)酸測(cè)定ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 成熟度、氣候條件及其它因素 。經(jīng)離心分離或過濾后收集提取液，用 SepPAK C18（ Waters SepPak C18小柱固相萃?。?凈化柱處理 ，收集餾出液。由于 C18(ODS)是長鏈烷基鍵合相 ，有較高的碳含量和更好的疏水性，對(duì)各種類型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，因此在生物化學(xué)分析工作中應(yīng)用的最為廣泛，近年來，為適應(yīng)氨基酸、小肽等生物分子的分析任務(wù)，又發(fā)展了 CH、 C C4等短鏈烷基鍵合相和大孔硅膠（ 20～ 40μm ）。 定性：將各種單一有機(jī)酸液依次進(jìn)樣，記錄各自保留時(shí)間。l 根據(jù)各待測(cè)樣品的響應(yīng)值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相應(yīng)的含量。 可查閱相關(guān)手冊(cè)，了解樣品酸的含量范圍。l 分離有機(jī)酸 ,既要考慮流動(dòng)相的組成，濃度及 pH，還要考慮有機(jī)酸的強(qiáng)弱， 磷酸鹽緩沖液是 C18反相柱上應(yīng)用較廣的流動(dòng)相。 操作步驟? 試樣準(zhǔn)備l蔬菜 ： 把樣品切成 3mm見方，稱取 溫水(80℃ ，部分蔬菜可用 800ml/L乙醇代替研磨 )，提取2次，合并提取液，加 酚酞指示劑 ，用 溶液滴定， 求總酸量 ，同時(shí)使有機(jī)酸成為鈉鹽。l 酯化 用上述方法制備的有機(jī)酸中，加 丁醇 2mL，無水硫酸鈉 2g，濃硫酸 ，連接冷凝管，在電熱板上平穩(wěn)沸騰約 30min(加熱時(shí)要不斷攪拌 )， 使有機(jī)酸成為丁酯 。 Sensitivity為 10MΩ ， Range為。l 大部分蔬菜試樣有時(shí)混入一些丁醇不溶物或酯化反應(yīng)液呈淺褐色，對(duì)測(cè)定值無影響。思 考 題 有機(jī)酸的總酸度、有效酸度和揮發(fā)性酸度測(cè)定的意義和方法原理是什么？氣相色譜法，液相色譜法測(cè)定有機(jī)酸的方法原理有什么不同？這兩種方法的主要操作步驟和方法要點(diǎn)有哪些？思 考 題。水果新鮮物重 1～ 10g，蔬菜 1015g。l 分析 柱子在 60℃ 下保持 6min后，以每分鐘升溫5℃ 速度升至 250℃ 。l 取此提取液 10～ 50mL，用 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至無醇后 ，依次 通過 Amberite CGl CG4B及 CGl20柱，得到有機(jī)酸組分 ，加入 酚酞指示劑 并滴定， 求出總酸含量 。? 可定量的有機(jī)酸有：甲酸、乙酸、丙酸、異丁酸、正丁酸、乳酸、異戊酸、異乙酸、正己酸、乙酰丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、反丙烯三羧酸以及檸檬酸等。l 反相分配色譜法，與正相的相反， 常用于分離極性較弱的化合物，分析的順序是 極性較強(qiáng)的組分保留時(shí)間短，先流出色譜柱。否則分離不好，引起較大誤差 。l 分別注入待測(cè)樣品 10181。L，進(jìn)行色譜分析。Ll檢測(cè)器： 紫外檢測(cè)器， 214nm， l 最常用的 “ 萬能柱 ” 填料為 “ C18” ，簡稱 “ ODS”柱，即十八烷基硅烷鍵合硅膠填料 （Octadecylsilyl，簡稱 ODS）。l 樣品溶液的制備l液體樣品 ： 需經(jīng)合適倍數(shù)稀釋， 用 SepPAK C18凈化柱處理 （有色素等雜質(zhì) ,會(huì)干擾有機(jī)酸的分析 ,同時(shí)造成色譜柱的污染，因此 ,在樣品前處理中必須將其去除），收集餾出液，經(jīng) 后備用。l 水果、蔬菜等有機(jī)酸組分的測(cè)定 ( 高效液相色譜法 )l 有機(jī)酸是果、蔬的主要組成分之一。l 其 pH值與總酸度之間沒有嚴(yán)格的比例關(guān)系， pH值的大小不僅取決于酸的數(shù)量和性質(zhì) (種類 )，而且受其中的酸、果膠、某些鹽類和蛋白質(zhì)緩沖能力的影響。 ， 切不可漏氣。前者在蒸餾時(shí)較易揮發(fā)，后者比較困難。采用鄰苯二甲酸氫鉀，它與氫氧化鈉的反應(yīng)為： KHC8H4O4 + NaOH KNaHC8H4O4 + H2O 到達(dá)化學(xué)計(jì)量點(diǎn)時(shí)，溶液呈弱堿性，可用酚酞 作指示劑。 2． 若顏色過深，可先加入等量蒸餾水稀釋后再滴 定或用活性炭脫色（損失較大，滴定值偏低）。l 在高效液相色譜法檢測(cè)食品中的有機(jī)酸時(shí)， 最重要的是選擇最佳的色譜分離條件 ，這些條件中涉及流動(dòng)相的 pH值、流速、柱溫、檢測(cè)波長
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