05版藥典微生物限度檢查法操作要點(存儲版)
【正文】 污染的各種類型的菌。驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌株每次試驗的回收率。測定細菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時，取同稀釋級的供試液2ml，每lml供試液可等量分注多個平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計數(shù)。若供試品每1g或lml所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液lml，過濾。％無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為10~l00cfu的菌懸液。三、檢驗方法（一）計數(shù)法的檢驗 計數(shù)方法包括平皿法和薄膜過濾法。每種計數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個平板，均不得有菌生長。含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵母菌數(shù)，合并計數(shù)。選擇濾膜材質(zhì)時應保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。 取相當于每張濾膜含1g或lml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。菌數(shù)報告規(guī)則 以相當于1g或lml供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以1報告菌數(shù)(每張濾膜過濾1g或1ml供試品)，或1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告（二）控制菌檢查法供試品的控制菌檢查應按已驗證的方法進行，增菌培養(yǎng)基的實際用量同控制菌檢查方法的驗證。培養(yǎng)18～24小時。上述2份供試液直接或處理后分別接種至100ml的新鮮庖肉培養(yǎng)基中。 眼用制劑檢出霉菌和酵母菌數(shù)時，須以兩次復試結(jié)果均不得長菌，方可判供試品的霉菌和酵母菌數(shù)符合該品種項下的規(guī)定。結(jié)果判斷 供試品檢出控制菌或其他致病菌時，按一次檢出結(jié)果為準，不再復試。表3 可能的大腸菌群數(shù)表各供試品量的檢出結(jié)果可能的大腸菌群數(shù)N (個/g或ml)++++++103102N10310N10210 注：+代表檢出大腸菌群；一代表未檢出大腸菌群?？刂凭鷻z查采用培養(yǎng)基稀釋法時，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。陰性對照不得有菌生長。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。 (4)如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時，以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應分別點汁霉菌和酵母菌、細菌菌落數(shù)。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。結(jié)果判斷 陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。菌種 對試驗菌種的要求同細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證。然后用此稀釋液進行檢驗。當白色念珠菌和黑曲霉2個菌株的回收率均達到70%以上時，霉菌計數(shù)用該驗證的方法檢驗。二、方法的驗證所有驗證方法的操作均應在陽性接種間。為了更好執(zhí)行05版藥典，現(xiàn)根據(jù)我的理解，對藥典上的各種檢驗方法在驗證時的操作要點與大家作個探討。細菌計數(shù)驗證所用的菌株：大腸埃希菌[CMCC（B）44102]：代表革蘭陰性菌；金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]：代表革蘭陽性球菌； 枯
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