gateway技術(shù)——克隆、表達(dá)新方法(存儲(chǔ)版)
【正文】 裝入 T載體中 3:入門載體質(zhì)粒和目標(biāo)表達(dá)載體質(zhì)粒的抽提。使用 Gateway技術(shù)，您可以進(jìn)入到幾乎是無數(shù)種的表達(dá)系統(tǒng)。終止反應(yīng)后，最后取 15ul BP反應(yīng)液轉(zhuǎn)化大腸桿菌 挑取陽性克隆，進(jìn)行 PCR或驗(yàn)證，然后抽提質(zhì)粒 ，酶切驗(yàn)證。 ? 整合后的附著位點(diǎn)為 ? attL（ BOP’） ? attR（ POB’） ? 整合位點(diǎn) attB attP 切除位點(diǎn) attL attR ? 整合過程需要 Int和 IHF共同作用 attB x attP →attL x attR 完成構(gòu)建 Gateway表達(dá)克隆僅需兩步 （ 1）創(chuàng)建入門克隆 ,通過 PCR或傳統(tǒng)的克隆方法將目的基因克隆進(jìn)入門載體。 Gateway技術(shù)特點(diǎn) ： 通過去除冗長的亞克隆步驟節(jié)省操作時(shí)間，同時(shí)將目的基因轉(zhuǎn)移到多個(gè)表達(dá)系統(tǒng)，在任何選擇的表達(dá)系統(tǒng)如細(xì)菌，酵母，昆蟲，或哺乳動(dòng)物進(jìn)行基因的分析表達(dá)。質(zhì)粒的濃度要求比較高，150ng/ul. 4:引物設(shè)計(jì)。因?yàn)闆]有一個(gè)單一的表達(dá)系統(tǒng)適合于每一種蛋白，優(yōu)化基因表達(dá)的最好方法是在多個(gè)系統(tǒng)中分析您的蛋白 Invitrogen 已將 Gateway技術(shù)合并
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