【正文】 理論塔板數(shù)按肉桂酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2023.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取肉桂酸對(duì)照品 10mg，置100ml棕色量瓶中，用 50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻、精密量取 5ml，置 100ml棕色量瓶中，加 50%甲醇至刻度，搖勻，即得（每 1ml含肉桂酸 5ug）。 （ 4）高效液相色譜法u香豆素類成分含有芳香環(huán)及其它共軛結(jié)構(gòu)，用 HPLC測(cè)定時(shí)，有較高的靈敏度，u常用固定相為 C18，流動(dòng)相為不同比例的甲醇 — 水（ 5）氣相色譜法u 某些分子量小、具有揮發(fā)性的香豆素類成分，可用氣相色譜法測(cè)定，如蛇床子素、歐前胡素、香柑內(nèi)酯、異虎耳草素、花椒毒素、花椒毒酚等成分可用 GC測(cè)定，常用 SE30石英毛細(xì)管柱， FID檢測(cè)器。 定性鑒別熒光法u 羥基香豆素大多能產(chǎn)生熒光，利用此性質(zhì)可進(jìn)行定性鑒別。理化性質(zhì)顯色反應(yīng)（ 1）異羥肟酸鐵反應(yīng)內(nèi)酯環(huán)在堿性條件下開環(huán)，與鹽酸羥胺縮合成異羥肟酸，然后再在酸性條件下與三價(jià)鐵離子配合成鹽而顯紅色。 對(duì)酸敏感：成苷后苷鍵易被水解斷裂，苷元結(jié)構(gòu)中 C1的羥基和 C2位的氧是一個(gè)半縮醛結(jié)構(gòu)，化學(xué)性質(zhì)活潑，易發(fā)生進(jìn)一步氧氣化聚合等反應(yīng)，尤其在酸堿作用下更易變化。 顯色劑：常用 pH指示劑，如溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、磷鉬酸試劑等。? 檢測(cè)器多為示差折光檢測(cè)器，? 通常用氨基鍵合硅膠柱分離，但其穩(wěn)定性差，用硅膠柱動(dòng)態(tài)改性，可避免這一問題。 u單一成分測(cè)定：主要采用氣相色譜法和薄層色譜法。 第五節(jié) 揮發(fā)性成分分析 一、概述 揮發(fā)性成分是指中藥中一類具有芳香氣并易揮發(fā)的成分，其化學(xué)組成復(fù)雜，主要包括揮發(fā)油類成分和其他分子量較小、易揮發(fā)的化合物。比色法u常用三萜皂苷顯色劑有香草醛 硫酸、香草醛 高氯酸、醋酐 硫酸、高氯酸、濃硫酸以及亞甲藍(lán)等。u三萜皂苷類成分進(jìn)行薄層層析時(shí)通常采用硅膠為吸附劑，也有采用氧化鋁、硅藻土等為吸附劑。第四節(jié) 皂苷類成分分析 一、概述 ? 三萜是由 30個(gè)碳原子組成的萜類化合物，大多數(shù)三萜化合物均可看作由 6個(gè)異戊二烯單位聯(lián)結(jié)而成。 黃酮類成分的 HPLC條件他為正相和反相色譜兩類，反相色譜應(yīng)用較多。 黃酮類化合物當(dāng)加入一些位移試劑如甲醇鈉、醋酸鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生位移，選擇性提高，還可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測(cè)定。 鋁鹽： 常用試劑為 1%三氯化鋁或硝酸鋁溶液。苷類由于在結(jié)構(gòu)中引入糖的分子，故均有旋光性，且多為左旋。由這些中藥參與配伍的中藥制劑也較多見。 結(jié)合蒽醌的測(cè)定u通常是取游離蒽醌測(cè)定項(xiàng)下的藥渣將苷提出，水解成苷元后再測(cè)定；u將藥渣先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測(cè)定；u取待測(cè)樣品先行酸水解，然后用非極性溶劑提取苷元后測(cè)定，其結(jié)果為總蒽醌含量，從中減去游離蒽醌含量，即得結(jié)合蒽醌的含量。 三、定性鑒別顯色反應(yīng) 將中藥制劑用適當(dāng)方法提取分離，制成供試品液，利用堿性條件下的呈色反應(yīng)或醋酸鎂顯色反應(yīng)等可對(duì)羥基蒽醌類成分進(jìn)行鑒別。u 結(jié)合成苷后極性增大，易溶于甲醇、乙醇中，在熱水中也可溶解，幾乎不溶于乙醚、苯、氯仿等非極性溶劑中。 二、結(jié)構(gòu)特征及理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)類型及特征苯醌類 苯醌類化合物從結(jié)構(gòu)上可分為鄰苯醌及對(duì)苯醌兩大類。通常采用色譜法對(duì)每種生物堿進(jìn)行分離后分析應(yīng)用示例戊已丸中生物堿的含量測(cè)定處方組成：黃連、吳茱萸（制）、白芍（炒）。 常用方法：直接測(cè)定、離子對(duì)萃取比色法u直接測(cè)定 不經(jīng)過化學(xué)反應(yīng) ,利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測(cè)定的方法 。此反應(yīng)一般在酸性水溶液中進(jìn)行。u生物堿的沉淀反應(yīng)可以檢查中藥制劑中生物堿的存在，當(dāng)某些沉淀試劑與生物堿生成的沉淀組成恒定時(shí)，還可以用于中藥制劑中生物堿成分的含量測(cè)定。u 一般生物堿為無色或白色，但結(jié)構(gòu)中具有較長(zhǎng)共軛體系，并有助色團(tuán)的，可顯不同顏色。 一、 生物堿類成分的主要性質(zhì)及分析特征結(jié)構(gòu)特征u生物堿大多由 C、 H、 N、 O元素組成，極少數(shù)分子中尚含有其他元素；大多結(jié)構(gòu)復(fù)雜，結(jié)構(gòu)類型較多 .u結(jié)構(gòu)中的氮原子有多種形式：脂氮、芳氮；季胺、叔胺、仲胺及伯胺；游離狀態(tài)和與酸結(jié)合狀態(tài)；還有以氮氧配位鍵形式存在的。u含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液。（ 6）紫外光譜特征u結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫外吸收，其中包括結(jié)構(gòu)母核即為共軛體系的和只有部分結(jié)構(gòu)為共軛系統(tǒng)的。目前主要使用酸堿滴定法。在反相高效液相色譜中 ,由于硅膠表面殘留硅醇基的影響 ,使生物堿分析易產(chǎn)生保留時(shí)間延長(zhǎng)、峰形變寬、拖尾 .可采取改進(jìn)流動(dòng)相、固定相等措施以克服游離硅醇基的影響 ,滿足定量定量分析的要求 . 中藥制劑中生物堿成分時(shí)行高效液相色譜法測(cè)定時(shí) ,使用較多的是紫外檢測(cè)器 . u氣相色譜法 只適用于有揮發(fā)性的、遇熱不分解的生物堿類 。 第二節(jié) 蒽醌類成分分析一、概述 中藥中醌類化合物主要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四種類型。（ A） （ B）蒽醌類 蒽醌類成分包括蒽醌衍生物及其不同還原程度的產(chǎn)物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚物等。u與金屬離子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)中，如果有 α酚羥基或具有鄰位二酚羥基時(shí)，則可與 Pb2+、 Mg2+等金屬離子形成絡(luò)合物。 B：正丙醇 乙酸乙酯 水（ 4： 4： 3）和異丙醇 乙酸乙酯水（ 9： 9： 4），適于分離番瀉苷和二蒽酮苷 C：不含水或甲醇的混合溶媒適合于他離蒽醌類的苷元。第三節(jié) 黃酮類成分分析一、概述? 黃酮類化合物（ flavonoids）是廣泛存在于自然界的一大類化合物。 大多黃酮及其苷類含有游離酚羥基，可與聚酰胺形成氫鍵，可用聚酰胺色譜法進(jìn)行分析。 堿性 氧原子的性質(zhì)u 黃酮類化合物分子中 γ 吡喃酮環(huán)上的 1位氧原子，因有未共用的電子對(duì)，故表現(xiàn)出微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。黃酮類化合物分子中有游離的 3或 5OH存在時(shí)，均可反應(yīng)生成黃色的鋯絡(luò)合物。 層析后可將含有待測(cè)組分的色斑刮下，再用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摵?，用紫?可見分光光度法測(cè)定。供試品溶液的制備：精密量取本品 1ml，置 50ml量瓶中，加 50%甲醇適量，超聲處理 20min，放置至室溫，加 50%甲