【正文】 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 4:37:44 下午 4:37 下午 16:37:44三月 21n 楊柳散和風，青山澹吾慮。 16:37:4416:37:4416:373/11/2023 4:37:44 PMn 1成功就是日復一日那一點點小小努力的積累。 16:37:4416:37:4416:37Thursday, March 11, 2023n 1乍見翻疑夢，相悲各問年。4)在對 QTL進行轉移時 ,如果沒有轉移互作 QTL,則不會達到預期的結果。但研究表明，即使回交 20代，還能發(fā)現相當大與目標基因連鎖的供體染色體片段。n ，采用 MAS可直接在當代確定。? 提出了 “ 上位性是雜種優(yōu)勢的主要遺傳基礎 ” 的重要觀點。n 利用 cDNAAFLP的方法，闡明了馬鈴薯塊莖在不同發(fā)育階段基因表達的情況，并克隆了 2個與塊莖脂肪氧合酶高度同源的 cDNA片段（ Bachem等1996） 。 新發(fā)現： 不同物種之間在標記探針的同源性、拷貝數及連鎖順序上都具有很大程度的保守性。 n 定位基因：萵苣抗霜霉病基因 、 水稻抗癭蠓基因水稻抗稻瘟病基因、水稻耐黃叢卷葉病毒病基因等分離群體分組分析法 (Bulked Segregation Analysis)產量、品質、熟期等大多數重要農藝性狀，均表現數量性狀的遺傳特點，受許多數量基因座位 （Quantitative用途：鑒定品種真實性和純度，用于新品種登記和品種知識產權保護等。AFLP不僅能縮小抗病基因與連鎖標記之間的距離，而且在 RFLP遺傳圖上，可增加染色體末端標記和填充 RFLP空隙，不干擾 RFLP標記簇，從而大大增加了遺傳圖的飽和度?！癿apaselectrophoresisn SNPs可大大豐富既有的連鎖圖n 成熟自動化技術，有望分析成千上萬的 SNPs 聚類分析n 聚類指標：:a bc d+coefficient) a a + b + cJaccard4． AFLP反應對 PCR要求較高，要首先摸索優(yōu)化 Mg2+、 dNTP條件，達到最佳擴增。60秒Step4 72℃ MseⅠ 引物（ 50ng/181。Step2Step4 72℃ 30秒l） l， 37℃ 酶切 連接 46小時，或過夜 。l） 100BSA l） 酶切 連接；2.（ 3） AFLP分析由于擴增片段較短（ 30700bp)， 分辨率高。 GACTGCGTACCAATTC339。不足：SSR的檢測u瓊脂糖凝膠檢測（同前）u聚丙烯酰胺凝膠檢測u一般采用銀染、熒光檢測。GOTO72℃ 56℃ 95℃ 95℃ v 不同材料重復次數的不同 ， 導致了SSR長度的高度變異性。SSR的分布特點SSR的功能長期以來一直認為 SSR是轉錄啞區(qū)，沒有明確的生理功能。SCARs（ Sequenced Characterized Amplified Regions）n 為提高 RAPD標記穩(wěn)定性，把目標 RAPD片段克隆測序，根據片段兩末端的序列設計特定引物（通常 24個堿基），再進行 PCR擴增，可把相應的單一位點鑒定出來。30秒Step4lGCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGTCATGAGCTCGCanneal primers 60? CTaq polymerase binds 3’ and extendsGCTCGC539。Polymerase Chain ReactionPCR339。ng變性 DNA振蕩洗脫兩次（ 15min/次） ， 吸干包好。NaOH， 進行 SouthernRepeatn AFLPn RAPD—Random分子標記本質是以核苷酸序列作為標記，一般特點：（ 1）不受季節(jié)、環(huán)境、基因表達與否的限制；（ 2）多態(tài)性高，存在著豐富的等位變異； n 如穗形、芒長、穗長、粒色、穗形、矮稈、卷葉等。n 特點：直觀、快速而經濟，但變異十分有限，當染色體數目形態(tài)相似時難以分辨。FragmentAPPCR)n SSRn 變性： n 雜交：預雜交液中加入標記好的 marker和探針，放入雜交膜浸勻。置 70℃ 超低溫冰箱中曝光 10天左右。n 2ul 339。72℃ （ CaetanoAnolles等， 1990）APPCR(arbitrarily primed polymerase chain reaction)l引物較長（ 10～ 50bp） ；l引物濃度較高；l引物長度不定，并且常常來自為其它目的而設計的引物（如 M13通用測序引物）。l不同物種其重復序列及重復單位頻率不同。 提高或降低臨近基因轉錄速率；216。lPrimer（ 1mM） 10Buffer Mg2+（ 25mM） Taq酶（ 5U/181?！?DNAMseI MseI MseI EcoRI EcoRI EcoRIn MseI MseI片段環(huán)化，不利小片段擴增；n EcoRI EcoRI 引物的退火溫度高；n MseI EcoRI 片段優(yōu)先擴增酶切連接接頭序列n MseⅠ 接頭、 PstⅠ 分別為：n MseⅠ ： n 5’GACGATGAGTCCTGAG3’ n 3’TACTCAGGACTCAT5’n PstⅠ ： n 5’CTCGTAGACTGCGTACC3’n 3’CTGACGCATGGTTAA5’n EcoRⅠ ：n 5’CTCGTAGACTGCGTACC3’n 3’CTGACGCATGGTTAA5’ M00:539。GACTGCGTACCAATTCNNN3‘PstIprimers +3: 539。（ 6）引物在不同物種間是通用的，可用于沒有任何分子生物學研究基礎的物種。l） MseⅠ 3單位 3單位MseⅠ l） 引物（ M00， 50ng/181。10PCR dNTP（ 25mM） Step6l） Taq酶（ 5U/181。Step3 65℃ 30秒（ ℃ /cycle）Step230在 ，且不能有降解。．同位素、熒光標記分辨率較高，但價格昂貴，操作不方便；銀染方法方便快捷，掌握好各個環(huán)節(jié)，同樣可以達到很好的效果。（ Sequential Agglomerative Hierarchical and Nested） clusteringESTspectrometry植物基因組遺傳作圖構建遺傳圖譜 （ molecular marker linkage map）以具有遺傳多型性的分子標記為 “ 路標 ”PolymorphicinwithHeun等 1998） 原理：將分離群體 (F BC、 DH）中的個體依據目標性狀 (如抗病、感病 )分成兩組，在每一組中將若干個體 DNA等量混合，形成兩個 DNA混合池 (如抗病池和感病池 )。分子連鎖圖譜的發(fā)展，可以實現對單個 QTL遺傳效應的追蹤，從而應用于分子標記輔助選擇。圖位克隆條件：n (1)目標基因附近緊密連鎖的 DNA標記；n (2)知道這些標記與目的基因的位置n 一旦建立與目的基因緊密連鎖的分子標記圖，就可以找到染色體步行的起始點，從而進行定位克隆。n 隨著最近一些生物的基因組全序列的獲得，比較基因組研究也隨之步入了一個新的時代。雜種優(yōu)勢預測及機理研究雜種優(yōu)勢預測及機理研究n DNA分子標記的應用，使得能夠在整個基因組范圍內對大量親本材料間的遺傳距離進行估測，并在此基礎上有效地預測具有強優(yōu)勢的組合（ Smith等， 1992；Bernardo， 1994）。我國玉米種質基礎植物的許多性狀為數量性狀，受許多微效基因的控制，且易受環(huán)境的影響。n 計算機模擬表明：如果從每個回交世代含有目標基因的 30個的單株中，通過 MAS選出 1株帶