【正文】 16:37:4416:37:4416:37Thursday, March 11, 2023n 1知人者智，自知者明。 三月 214:37 下午 三月 2116:37March 11, 2023n 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富?；蚓酆贤黄屏嘶亟挥N改良個(gè)別性狀的局限 ,使品種在多個(gè)性狀上同時(shí)得到改良。n 長期以來，選擇都是基于植株的表型性狀進(jìn)行的。n 對(duì)遺傳差異與雜種優(yōu)勢(shì)關(guān)系的評(píng)價(jià)方法經(jīng)歷了從形態(tài)性狀遺傳距離，到生化標(biāo)記遺傳差異，親緣系數(shù)，以及分子標(biāo)記遺傳差異等各種嘗試。? 前者以欲克隆基因的功能為基礎(chǔ)，通過鑒定其產(chǎn)物或某種表型的突變進(jìn)行；? 后者則著眼于基因本身，通過其特定的序列或其在基因組中的特定位置進(jìn)行。利用 NILs方法已定位了許多質(zhì)量性狀基因， eg.番茄抗病毒基因 Tm2a， 番茄抗細(xì)菌病毒基因及水稻半矮桿基因 Sdy等。mapn 分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，使圖譜上標(biāo)記的密度越來越高。n mRNA反轉(zhuǎn)錄成 cDNA， 克隆到質(zhì)?；蚴删w載體，構(gòu)建 cDNA文庫，而后大規(guī)模隨機(jī)挑選克隆，對(duì) 5’或 3’端進(jìn)行一步法測(cè)序，獲得對(duì)生長發(fā)育、遺傳變異、衰老死亡等過程認(rèn)識(shí)的技術(shù)。7Step7 56℃ 混合后按如下 PCR程序擴(kuò)增：Buffer l 混合后，在如下 PCR條件下擴(kuò)增：MseⅠ （ 5）由于特定引物擴(kuò)增，退火溫度高，因而假陽性低，可靠性高。l） 4181。l根據(jù)核心序列堿基數(shù)的不同 ,可分為單堿基、 2堿基、 3堿基、 4堿基等多種重復(fù)型。2分鐘Step210Buffer Target DNA sequenceGCTCGC AGTACTTCATGACGAGCGdenature 95? C539。再放上另一張?jiān)龈衅粒b人暗袋，并用夾板夾好。n 染色： EtBr染色 20分鐘 PolymorphismRFLPn 原理： Restrictionn 特點(diǎn)：直觀簡單n 從基因型到表現(xiàn)型存在基因表達(dá)、調(diào)控、個(gè)體發(fā)育等環(huán)節(jié)，表型差異有時(shí)難以反映基因型差異。Amplified印跡n 沖洗：以 2SSCn 5ul 339。dNTP（ 25mM） 加水至 20181。95℃ Step2PCR擴(kuò) 增：主要特點(diǎn)? 無需雜交，設(shè)計(jì)引物也無須知道序列信息；? DNA需要量少，引物便宜，成本較低；? 技術(shù)簡便，操作方便、快速，不涉及分子雜交和放射性自顯影等技術(shù)。但隨著研究深入，證明并非如此。E00:539。PCR擴(kuò)增，使目的序列擴(kuò)增到 ～ 1μg；3.Step6 95℃ 5分鐘AFLP的 檢測(cè)216。相似系數(shù)(JaccardcSSR、 cSNP——— 從 EST中開發(fā) SSR、 SNPn 目前某些植物全序列的測(cè)定及 EST數(shù)據(jù)庫的開發(fā)，為 SSR、 SNP的開發(fā)開辟了 新的途徑 ?！皉oute在植物遺傳多樣性研究上的應(yīng)用n 對(duì)植物種質(zhì)資源遺傳多樣性的全面了解，對(duì)于拓寬遺傳基礎(chǔ)的育種策略十分重要。Trait? eg 番茄、馬鈴薯和辣椒（ Tanksley等 1988； 1992）；? 水稻、小麥和玉米（ Ahn等， 1993； 1994）；? 小麥、大麥和黑麥（ Devos等， 1993）；? 高粱和玉米（ Pereira等， 1994）；? 以及大麥和水稻（ Maroof等， 1996）? ．．．?。畁 比較基因組學(xué)研究表明，不同物種之間在標(biāo)記探針的同源性，拷貝數(shù)及連鎖順序上都具有很大程度的保守性。n 應(yīng)用 cDNA－ AFLP技術(shù)進(jìn)行雜種優(yōu)勢(shì)機(jī)理的研究表明，強(qiáng)優(yōu)勢(shì)與弱優(yōu)勢(shì)組合間基因表達(dá)有明顯差異，有增強(qiáng)型、減弱型和沉默型。類群 快速選出以輪回親本為遺傳背景的單株n 在回交育種中不僅要考慮優(yōu)良性狀的導(dǎo)入，還必須考慮保持其整個(gè)基因組的遺傳背景基本不變。n Khan等（ 2023）以 AFLP等分子標(biāo)記輔助選擇，將二粒小麥 6BS的高谷蛋白 QTL成功地轉(zhuǎn)入普通小麥品種 Glupro。 三月 2116:37:4416:37Mar2111Mar21n 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 2023/3/11 16:37:4416:37:4411 March 2023n 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023/3/11 16:37:4416:37:4411 March 2023n 1空山新雨后，天氣晚來秋。 三月 2116:37:4416:37Mar2111Mar21n 1故人江海別，幾度隔山川。有效選擇目標(biāo)基因附近發(fā)生重組的個(gè)體n 回交育種中 , 傳統(tǒng)解決連鎖累贅方式是通過擴(kuò)大選擇群體或增加回交次數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)測(cè)驗(yàn)種 AFLP研究基因表達(dá)是非常有效的方法，可同時(shí)比較植物發(fā)育的不同時(shí)期以及分離某些重要基因（ cDNAAFLP）。數(shù)量性狀基因的定位基于圖譜的基因克隆 誰最先了解基因的功能，誰就擁有了該基因的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，也就獲得了更多的利潤。特點(diǎn)： 高度的個(gè)體特異性、環(huán)境的穩(wěn)定性及豐富的多態(tài)性 。asgel(1979)相似系數(shù) .其中 3．酶切 連接反應(yīng)可以分開作，也可以合在一起作，但合在一起更方便些。Step8 72℃ 2分鐘 加水至 25181。 ATP（ 10mM） PstⅠ （ 2）多態(tài)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其它分子標(biāo)記，一般可檢測(cè)到 50100個(gè) AFLP擴(kuò)增產(chǎn)物，能夠在遺傳關(guān)系十分相近的材料產(chǎn)生多態(tài)性，被認(rèn)為是指紋圖譜技術(shù)中多態(tài)性最豐富的一項(xiàng)技術(shù)。SSR的特點(diǎn)：l 兩側(cè)順序保守，在同種間多相同；l 數(shù)量豐富，在整個(gè)基因組均勻隨機(jī)分布；l 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，結(jié)果可靠；l 多數(shù) SSR增減重復(fù)序列頻率高，在品種間具廣泛位點(diǎn)變異；l 共顯性標(biāo)記，可鑒別雜合子和純合子；l 僅需微量組織，適合 PCR分析半自動(dòng)化v 相對(duì)的物種專一性；v 由于開發(fā)時(shí)需針對(duì)每個(gè)座位的微衛(wèi)星序列，發(fā)現(xiàn)其兩端的單拷貝序列設(shè)計(jì)引物，需建立基因文庫、克隆識(shí)別與篩選、測(cè)序等過程，開發(fā)困難，費(fèi)用較高，耗時(shí)長；v 實(shí)際分析時(shí)一般每次只分析單個(gè)位點(diǎn)；v 不同引物退火溫度不同，需要探索。30秒Step4 2分鐘Step2 部分 SSR可產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)復(fù)合物或活化染色體v 兩端序列多是保守的單拷貝序列，可以根據(jù)兩端序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，通過 PCR將其間微衛(wèi)星序列擴(kuò)增出來，利用電泳技術(shù)獲得長度多態(tài)性。l 缺點(diǎn)：l 對(duì)反應(yīng)條件非常敏感，重復(fù)性差。95℃ l） 1181。RAPDn 原理：n 用一個(gè)隨機(jī)引物（ 810bp）、 堿基隨機(jī)排列的寡核苷酸序列，非定點(diǎn)地?cái)U(kuò)增基因組 DNA， 然后電泳分開擴(kuò)增片段。n 洗脫：將膜轉(zhuǎn)入洗脫盒，加入洗脫液 65℃ Sequence生化標(biāo)記 —— 貯藏蛋白和同工酶n 貯藏蛋白n 同工酶n 特點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、方便、成本較低n 結(jié)構(gòu)基因表達(dá)產(chǎn)物，對(duì)非結(jié)構(gòu)基因無能為力；所檢測(cè)位點(diǎn)只是基因組一部分；數(shù)量有限，有時(shí)受發(fā)育時(shí)期和環(huán)境影響。 —Simple封好雜交盒后，置65℃ 溫箱中振蕩過夜。Klenow酶n 加水至 50ul， 37℃ 溫箱中標(biāo)記 2小時(shí)RFLP標(biāo)記 特點(diǎn)l共顯性，可以區(qū)別純合和雜合基因型l穩(wěn)定、重復(fù)性強(qiáng)l某些植物中開發(fā)探針已遍及整個(gè)基因組l缺點(diǎn)： DNA需要量較大，技術(shù)復(fù)雜； 用于做圖較費(fèi)時(shí)，難以分析大量樣品 ； 在基因組較大、嚴(yán)格自花授粉作物上多態(tài)性很低，使遺傳圖飽和度低。DNA（ 20ng/181。15秒Step3ISSRl 共同優(yōu)點(diǎn)： 在不需要知道所擴(kuò)增 DNA序列情況下，產(chǎn)生 DNA片段的指紋； 需 DNA量少，產(chǎn)生多態(tài)性豐富。 基因重組的熱點(diǎn)，是基因變異的來源；216。不等。GACTGCGTACATCGAGNNN3‘ AFLP技術(shù)的特點(diǎn)（ 1）由于內(nèi)切酶及選擇性堿基組合數(shù)和種類很多，產(chǎn)生標(biāo)記數(shù)無限，可覆蓋整個(gè)基因組。BufferStep5 GOTOl） cycles2． AFLP反應(yīng)對(duì)模板 DNA濃度不是很敏感，在50pg50ng時(shí)，均可以觀察到多態(tài)性帶，但為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性， DNA濃度不能太低。Lime