蛋白質(zhì)工程ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 酶活力檢測 ? 反應(yīng)產(chǎn)物： 顯色 pH指示劑顯色 pH指示劑顯色，分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀 ? 通過檢測底物消耗或產(chǎn)物生成進(jìn)行終點(diǎn)檢測： GC/HPLC，使用較短的柱子以縮短分析時(shí)間 ? 同位素標(biāo)記底物 ：質(zhì)譜 ? 熱力學(xué)紅外檢測 噬菌體顯示篩選模式 pH指示劑顯色高通量篩選 產(chǎn)物顯色篩選 熒光產(chǎn)物篩選 基于比色法和熒光檢測 的高通量篩選 蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用實(shí)例 ? 胰蛋白酶 ? 金屬硫蛋白 ? 人白細(xì)胞介素 2 ? 組織纖溶酶原激活因子 ? 枯草桿菌蛋白酶 組織纖維蛋白溶酶原激活因子 ? 組織纖維蛋白溶酶原激活因子 (tPA)是一種血漿糖蛋白，其功能是將單鑰活性形式的血淺纖溶酶原（ plg)激活，轉(zhuǎn)變成纖溶酶。 ? 通過改變單個(gè)基因（或基因家族）原有的核苷酸序列創(chuàng)造新基因，并賦予表達(dá)產(chǎn)物以新功能。這個(gè)過程可通過靈敏的篩選方法，選擇陽性突變子。 定向進(jìn)化與自然進(jìn)化的差別 定向進(jìn)化的一般過程 酶 定向進(jìn)化的意義 ? 酶作為生物催化劑其專一性和高效性是一般催化劑所不能比擬的，但是天然酶的許多性質(zhì)不適應(yīng)工業(yè)生產(chǎn)的條件。 定向進(jìn)化 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 多樣化， Diversification: 在此步驟中常用的技術(shù)是易錯(cuò) PCR和 DNA改組。 ? 國外有許多研究機(jī)構(gòu)正在致力于研究蛋白質(zhì)與核酸、酶抑制劑與蛋白質(zhì)的結(jié)合情況，以開發(fā) 具有高度專一性的藥用蛋白質(zhì)。 蛋白質(zhì)工程的前景 ? 蛋白質(zhì)工程取得的進(jìn)展向人們展示出誘人的前景。 ?蛋白質(zhì)工程是在基因重組技術(shù)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)學(xué)科基礎(chǔ)上，融合了蛋白質(zhì)晶體學(xué)、蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)、蛋白質(zhì)化學(xué)和計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)等多學(xué)科而發(fā)展起來的新興研究領(lǐng)域 蛋白質(zhì)工程進(jìn)展 ? 蛋白質(zhì)工程是發(fā)展較好、較快的分子工程。 ? 福什特（ Forsht）等在 1985年間對酪氨酰 tRNA合成酶的分子改造工作。 ? 用蛋白質(zhì)工程方法制成的電子元件，具有體積小、耗電少和效率高的特點(diǎn)，因此有極為廣闊的發(fā)展前景。雖然這方面的工作尚在起步階段，但可預(yù)見將來能建立一套完整的理論來解釋結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系，用以設(shè)計(jì)、預(yù)測蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。 ? 這三個(gè)步驟稱為一個(gè)“回合”定向進(jìn)化。 RNA噬菌體 Q 定向進(jìn)化的歷史 ? 1981年， ebg酶的底物專一性，開發(fā)出對幾種糖苷鍵有水解能力的酶。 ? 關(guān)鍵是控制 DNA的突變頻率。 ?突變體基因篩選能否成功的關(guān)鍵是將基因的表型和能通過定量表征的篩選手段緊密聯(lián)系。 枯草桿菌蛋白酶 ? 枯草桿菌蛋白酶是重要的工業(yè)用酶。溶解血栓，目前進(jìn)行 tPA蛋白質(zhì)工程的研究主
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