綠色熒光蛋白ppt課件-免費閱讀
【正文】 大腦彩虹圖象抽象畫 此混雜又濃密的神經(jīng)元位于腦干的聽覺區(qū) 這些位于大腦皮層的神經(jīng)元就是通常所說的大腦灰質(zhì)，參與思考和各種感覺。 發(fā)綠光的狗 轉(zhuǎn) GFP基因的蜜蜂 轉(zhuǎn) GFP基因的蠑螈（ 斑馬魚 ） 轉(zhuǎn) GFP基因的兔子 GFP基因在蛾子的眼部表達 2022年 7月 12日韓國科學家成功培育出身體可發(fā)出熒光的轉(zhuǎn)基因雞。 研究生物膜的生長特性及其菌落特性 C6:red R1:blue GFP在微生物研究中的應用 ? GFP在真菌研究中的應用 （ 1） GFP基因通過隨機插入真菌基因組的方法 ,已經(jīng)被成功地用來研究真菌的生態(tài)、生防菌對病原菌的侵染模式及病原菌與其寄主的關系等 （ 2） GFP基因通過與目標基因融合的方法 ,則被廣泛地用于真菌的基因轉(zhuǎn)錄規(guī)則、蛋白質(zhì)及細胞器定位、細胞亞結(jié)構和蛋白質(zhì)功能等研究 . GFP在生物醫(yī)學中的應用 ? 藥物篩選 利用 GFP熒光探針，從數(shù)量眾多的化合物中判斷出那些化合物具有與信號分子相似的，能引起配體 受體復合物遷移并介導生理反應的功能。 GFP在植物研究中的應用 GFP在微生物研究中的應用 ? GFP用于微生物與宿主相互作用研究 利用 GFP 標記基因可以研究病毒、細菌和真菌等侵染植物的過程和機制。岳莉莉等成功地實現(xiàn)了 gfp與 HBVe抗原基因融合后在大腸桿菌和昆蟲細胞中高效表達，得到既能發(fā)射熒光又具有抗原性的雙功能融合蛋白，為獲得一種新型發(fā)光免疫診斷試劑奠定了基礎。 S65TGFP，激發(fā)譜 中只有一個峰，且紅移至 490nm，用藍光即可激發(fā) RSFP，使之更適于普通熒光顯微鏡觀察?；鶓B(tài) A對應于 395nm的吸收峰，基態(tài) B對應于 475nm的吸收峰，基態(tài) A占優(yōu)勢，基態(tài) B的分子數(shù)量約是基態(tài) A的 1/6，兩種基態(tài)間能緩慢地轉(zhuǎn)換，但激發(fā)態(tài) (*)之間的轉(zhuǎn)換很快且發(fā)生了質(zhì)子轉(zhuǎn)移， A*快速高效地衰變至另一激發(fā)態(tài)，應該存在一個中間過度態(tài) I，質(zhì)子轉(zhuǎn)移使 A*轉(zhuǎn)變成 I*, I*回遷到基態(tài) I時產(chǎn)生發(fā)射峰 504nm的熒光，構象改變使 I*轉(zhuǎn)變成 B*，由 B*到 B發(fā)射熒光而不發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移。但是在蛋白質(zhì)內(nèi)部改為發(fā)射能量稍低的光子來釋放能量，使它得到了保護。而一些弱還原劑并不影響 GFP熒光。這是繼美國、韓國、日本之后第四例成功通過體細胞核移植方式生出的綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬。 綠色熒光蛋白的研究史 ? 1994年 Chalfie等首次在大腸桿菌細胞和線蟲中表達了GFP，開創(chuàng)了 GFP應用研究的先河。 綠色熒光蛋白的研究史 維多利亞水母 (Aequorea Victoria) A test tube containing a sample of a cyan (greenishblue) fluorescent protein from a sea anemone illuminated by ultraviolet light from below. ? 水母體內(nèi)有一種發(fā)光蛋白 ——Aequorin，它與鈣離子結(jié)合時會發(fā)出藍光，這道藍光立刻被一種蛋白吸收，從而發(fā)出綠色螢光。 Boston University Medical School Massachusetts, MA, USA Columbia University New York, NY, USA University of California San Diego, CA, USA。 馬丁 沙爾菲 ? 如果說下村修是綠色熒光蛋白的“接生婆”，沙爾菲則是綠色熒光蛋白的價值發(fā)現(xiàn)者。 1997年 10月 1822日在美國 NewJersey專門召開了一次關于GFP的國際會議。 ? 盡管 450～ 490nm(藍光 )是 GFP的副吸收峰，但由于長波能量低，細胞忍受能力強 ,因此更適合于活體檢測。蛋白質(zhì)鏈形成一個圓柱形罐頭（藍色），子鏈的一部分直接從中間穿過（綠色），發(fā)色團剛好在罐頭盒的中間，它被保護起來以免受周圍環(huán)境的影響。 綠色熒光蛋白的發(fā)光基團 Stereo view of the fluorophore and its environment. His148, Gln94 and Arg96 can be seen on opposite ends of the fluorophore and probably stabilize resonant forms of the fluorophore. Charged, polar, and nonpolar side chains all contact the fluorophore in some way. 綠色熒光蛋白的發(fā)光基團 His48 Gln94 Arg96 Model of the fluorophore and its environment superposed on the MADphased electron density map at 197。 GFP的其他生化特性 GFP作為標記蛋白的優(yōu)點 ① 熒光穩(wěn)定 ② 檢測方便 ③ 無種屬特異性，也無有細胞種類和位置的限制 ④ GFP對受體細胞基本無毒害 ⑤ 易于構建載體，不受假陽性干擾 ⑥ 不需任何反應底物和輔助因子 ⑦ 可制成永久標本 ⑧ 靈敏度高 GFP基因的改進 ? 更換 GFP生色團氨基酸 ? 改變堿基組成 ? 除去 GFP基因中隱蔽剪接位點 ? 插人植物內(nèi)含子 ? 更換強啟動子等突變體 GFP
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