細(xì)胞生物學(xué)研究方法(3)-免費(fèi)閱讀
【正文】 ? 誘發(fā)融合： 異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合 。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。 包被細(xì)胞的液流稱為鞘液 ， 所用儀器稱為流式細(xì)胞計(jì) （ flow cytometer） 。 ? 特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低 ， 介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆粒的最小密度 。 ? 用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器 。 最初是使用帶放射性的 DNA探針 ， 后來又發(fā)明了免疫探針法 。 ? 原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi) ， 經(jīng)過一段時(shí)間后 ， 制取切片 ， 涂上鹵化銀乳膠 ， 經(jīng)放射性曝光 ，使乳膠感光 。 5. 茚三酮反應(yīng)：顯示蛋白質(zhì) 。 2. 化學(xué)固定：如甲醇 、 乙醇 、 丙酮 、 甲醛 、 戊二醛和鋨酸等試劑 。 ? 用途：三態(tài) （ 固態(tài) 、 液態(tài)和氣態(tài) ） 物質(zhì)均可進(jìn)行觀察 。 然后將組織溶掉 ， 把碳和鉑的膜剝下來 ， 此膜即為復(fù)膜 （ replica） 。 ? 用于觀察超微結(jié)構(gòu) （ ultrastructure） ， 即小于 、光 學(xué) 顯 微 鏡 下 無 法 看 清 的 結(jié) 構(gòu) ， 又 稱 亞 顯 微 結(jié) 構(gòu)（ submicroscopic structures） 。 標(biāo)本可略厚一點(diǎn) ， 折射率差別更大 ， 故影像的立體感更強(qiáng) 。 ? 可觀察 4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高 50倍。 （二）熒光顯微鏡 Fluorescence microscope P53 ? 特點(diǎn)：光源為紫外線 ， 波長較短 ， 分辨力高于普通顯微鏡； ? 有兩個(gè)特殊的濾光片； ? 照明方式通常為落射式 。第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法 METHODS AND TECHNIQUES 本章內(nèi)容提要 ? 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 一、光學(xué)顯微鏡 ? 二、電子顯微鏡 ? 三、顯微操作技術(shù) ? 第二節(jié) 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù) ? 第三節(jié) 細(xì)胞分離技術(shù) ? 第四節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞雜交 第一節(jié) 顯微技術(shù) ? 光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。 Fluorescence image of epithelial cell, DNA in blue and Microtubules in green ? 用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。 ? 把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差 ， 從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度 ， 使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見 。 （八）倒置顯微鏡 inverse microscope ? 物鏡與照明系統(tǒng)顛倒 ， 前者在載物臺(tái)之下 ， 后者在載物臺(tái)之上 ， 用于觀察 培養(yǎng)的活細(xì)胞 ， 通常具有相差物鏡 ， 有的還具有熒光裝置 。 1. 原理 透射電子顯微鏡 TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE， TEM 電子束 名 稱 可見光 紫外光 X 射線 α 射線 0. 1Kv 10Kv 波長（ nm ） 390~ 760 13~ 390 0. 05~ 13 0. 005~ 1 0. 123 0. 0122 表二、不同光線的波長 制樣技術(shù) P57 ? 1）超薄切片 ? 電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm的超薄切片，用超薄切片機(jī)（ ultramicrotome）制作。 A Yeast Cell ? 20世紀(jì) 60年代問世 ， 用來觀察標(biāo)本表面結(jié)構(gòu) 。 掃描隧道顯微鏡原理 STM image, Benzene molecules accumulate at step edges on Cu 三、顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的
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