【正文】 著差異 （ P＜ ） ； 五靈脂的揮發(fā)油 對大腸桿菌ATCC8099 和金黃色葡萄球菌 ATCC6538 的生長均具有抑制作用，但抑菌效果并不明顯；五靈脂與人參的醇提物 對兩種菌的 生長也都具有抑制作用，但五靈脂與人參二者醇提物比 II 較，五靈脂醇提物的抑菌作用明顯優(yōu)于人參醇提物抑菌作用，隨著配伍比例中五靈脂量的減少，配伍后的 醇提物 對兩種菌 生長的抑制作用也逐漸降低， 以 5:1 配伍的醇提物濃度為25 mg/ml 時，抑制率最高，達(dá)到 %和 %， 與空 白對照組比較有極顯著差異 （ P＜ ） ，且 以 5:1 比例配伍的醇提物，其抑菌效果最為顯著甚至強(qiáng)于單一五靈脂的抑菌效果。 DPPH 活性 .............................. 27 圖 43五靈脂揮發(fā)油 清除 DPPH 活性 .......................................... 27 表 51不同陽性藥的抑菌圈直徑 (mm) ........................................... 33 表 52五靈脂石油醚提取物的抑菌作用（ n=3） .................................. 33 表 53 五靈脂氯仿提取物的抑菌作用（ n=3） ................................... 34 表 54 五靈脂乙酸乙酯提取物的抑菌作用（ n=3） ............................... 35 表 55 五靈脂正丁醇提取物的抑菌作用（ n=3） ................................. 36 表 56 五靈脂揮發(fā)油的抑菌作用（ n=3） ....................................... 36 表 57 五靈脂醇提物的抑菌作用（ n=3） ....................................... 37 表 58 五靈脂與人參（ 5:1）配伍后醇提物的抑菌作用（ n=3） .................... 38 表 59 五靈脂與人參（ 3:1）配伍后醇提物的抑菌作用（ n=3） .................... 39 表 510 五靈脂與人參（ 1:1）配伍后醇提物的抑菌作用（ n=3） ................... 39 表 511 五靈脂與人參（ 1:3）配伍后醇提物的抑菌作用（ n=3） ................... 40 表 512 人參醇提物的抑菌作用（ n=3） ........................................ 41吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性變化研究 1 第一章 前言 五靈脂與人參配伍研究概況 五靈脂與人參配伍的文獻(xiàn)研究 中藥十九畏是中藥藥性理論的重要組成部分，其是否為臨床配伍禁忌，從古至今都頗有爭議。 以五靈脂功效、主治為主的方劑有： 癥 回生片：五靈脂（醋炙） 14g，人參 42g。 ：五靈脂 1 分，人參 1 分。 ：五靈脂（炒） 1 兩，人參 1 兩。 ：五靈脂 5 分，人參 8 分。 ：五靈脂（水飛） 2 錢半，人參 2 錢半。 ：五靈脂 1 分，人參 2 分半。 ：五靈脂（醋浸，瓦焙） 5 錢，人參 5 錢。 ：五靈脂 3 兩，人參 3 兩。 ：五靈脂 5 錢，人參 3 錢。 ：五靈脂（醋炒） 5 錢，人參（去蘆） 3 錢。 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 2 ：五靈脂錢半，人參 5 分。 ：五靈脂 1 兩，人參 1 兩半。 ：五靈脂 2 錢，人參 5 錢。 ：五靈脂（炒 ） 8 錢，人參（去蘆）半兩。 ：五靈脂 1 錢，人參 3 分。 ：五靈脂 5 分，人參 2 錢半。 ：五靈脂（炒） 2 錢，人參 3 錢。 ：人參（去蘆） 2 兩，五靈脂 1 兩。 ：人參 7 錢，五靈脂 5 錢。 ：人參 5 錢，五靈脂 5 錢。 ：人參 7 錢，五靈脂 5 錢。處方來源：《醫(yī)中一得》。處方來源 ： 《幼幼新書》卷二十三引《醫(yī)方妙選》。但是從上邊內(nèi)容分析可知，在五靈脂和人參配伍應(yīng)用的方劑中大多數(shù)是以五靈脂的主治功效為主的，多用于胃痛瘀血癥和婦科瘀血癥，二者配伍后雖然也有用于抗衰老的治療，但數(shù)量較少，只有 23 首，這一點(diǎn)與人參大量在抗衰老方劑中應(yīng)用這一現(xiàn)象很不相稱，是否提示：五靈脂與人參配伍后，五靈脂使人參在抗衰老方面的作用喪失了？人參又是否使五靈脂 的在某些方面的作用增強(qiáng)了？國內(nèi)在對五靈脂與人參配伍后的很多方面都進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，多數(shù)是對人參部分活性成分變化進(jìn)行研究，但從文獻(xiàn)分析來看，五靈脂與人參配伍，多數(shù)是以五靈脂功效、主治為主，但目前對五靈脂與人參配伍后五靈脂活性成分含量變化方面尚缺乏研究來證實(shí)，因此，本論文以此作為深入研究的方向之一。而此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)可以快速的鑒定五靈脂與人參的配伍溶液、藥渣和沉淀中人參皂苷的含量變化。 五靈脂與人參配伍藥理實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展 毒性作用 在現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，五靈脂與人參配伍，從小白鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，二者合用毒性 較小。 郭國華 [8]等的研究表明，人參、五靈脂配伍具有一定的抗免疫抑制劑降低 WBC 的作用， 對正常生理及免疫功能低下的小鼠，當(dāng)人參劑量等于或小于五靈脂時，對小鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及腎上腺等指數(shù)影響不顯著，使骨髓有核細(xì)胞數(shù)顯著降低。在 CPA 及正常條件下，人參組及五靈脂與人參配伍組均能增加血中白細(xì)胞數(shù)，紅細(xì)胞數(shù)及免疫器官的重量，得到結(jié)論五靈脂對上述指標(biāo)影響不明顯，但能延長凝血時間 (正常小鼠 )，且五靈脂與人參配伍后比用單味時效果更明顯 [9]。 郭國華等 [11]觀察了人參與五靈脂配伍對小鼠四氯化碳肝損傷影響，實(shí)驗(yàn)表明：人參與五靈脂配伍對四氯化碳造成的急性肝損傷小鼠有保護(hù)作用。如李時珍的父親李言聞曾指出： “古方療月閉，四物湯加人參、五靈脂，是畏而不畏也。常敏毅 [13]在臨床上治療肝癌、肝硬化及腹腔腫瘤時，常在抗癌中草藥中家紅參 3g，五靈脂 15g，使用多年，并未見有 1 例發(fā)生毒副反應(yīng)，且大多數(shù)癥狀均有改善。 圖 11 復(fù)齒鼯鼠及五靈脂 Pig11 Trogopterus xanthipes MilneEdwards and Faeces Trogopterori 五靈脂的考證與分布 五靈脂的 基原考證 五靈脂這味藥材最早記載于宋開寶 67 年，劉翰馬志等編著的《開寶本草》 [15]，五靈脂，味甘，溫，無毒。至冬毛落如雞雛，忍寒而號曰：得過且過?！?[16]李時珍已經(jīng)在《本草綱目》中把五靈脂的原動物形 態(tài)、習(xí)性、分布，以及藥材形狀、氣味、真?zhèn)蝺?yōu)劣都形象的描述的吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 6 一清二楚了，為后人提供詳盡的文獻(xiàn)記載，有重要參考價值。但由于五靈脂為動物糞便，隨意性較大，穩(wěn)定性較差， 1995版藥典又將其取消。分布于陜西、山西、湖南、湖北產(chǎn)區(qū)的五靈脂，其產(chǎn)量 占全國的 70%左右。 五靈脂一直處于“僧多粥少”情況。 2020年下半年以來，隨著供需矛盾的加劇，產(chǎn)地開始出現(xiàn)摻雜造假現(xiàn)象，使質(zhì)量大大下降。 日本學(xué) 者 Atsushi Numata（ 篤沼田 ）等發(fā)現(xiàn) [1819]，五靈脂含有托馬酸 3氧 順 對香 豆酸脂（ 3Ocispcoumaroyltormentic acid），托馬酸（ toumentic acid），托馬酸 3氧 反 對香豆酸脂（ 3Otranspcoumaroyltormentic acid），坡膜醇酸（ pomolic acid），馬斯里酸（ amslinic acid），馬斯里酸 3氧 反 對 香豆酸脂（ 3Otranspcoumaroylmaslinic acid）， 2a羥基烏蘇酸（ 2ahydroxy ursolic acid），加可酸（ jacoumaric acid），烏蘇酸（ ursolic acid），歐斯咖啡酸（ euscaphic acid）。 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 7 楊東明等人 [22]從五靈脂中分離得到：尿嘧淀（ urcil），次黃嘌呤（ hypoxanthing），尿囊素（ allantoin）， L酷氨酸（ Ltyrosine），尿素（ urea），尿酸（ uric acid）。劉文粢 [26]等人通過對五靈脂生藥 及其炮制品的微量元素含量測定，發(fā)現(xiàn)五靈脂經(jīng)過炮制后可減少鋁的溶出量，從而減少生藥的毒性。 五靈脂的藥理作用及臨床應(yīng)用研究 五靈脂的藥理作用研究 現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，五靈脂具有抗血小板凝聚、促進(jìn)纖維蛋白溶解、抗炎、抗?jié)儭⒁志?、抗病毒、提高免疫力以及清除自由基等多方面作?[30]。 ， 1987 年《新中醫(yī)》，治療 22 例，治愈 18 例，顯效 4 例。 [33]， 554 例，顯效 194 例，有效 298 例，無效 62 例?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載其具有“補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄，止驚悸，除邪氣，明目開心益智，久服輕身延年?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，人參對心血管系統(tǒng)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)，消化系統(tǒng)，免疫系統(tǒng)，內(nèi)分泌系統(tǒng)，泌尿生殖系統(tǒng)都具有廣泛作用，從而可以提高人體的智力及體力，增強(qiáng)機(jī)體對有害刺激的非特異性抵抗力。旋光度 +（ c=，甲醇）。 Rb1還可以明顯提高體外培養(yǎng)神經(jīng)元的活力，具有促進(jìn) 周圍神經(jīng)軸突生長作用 [39]。對大鼠有減慢心率和先微微升高后下降的雙向性血壓作用，還能舒張大血管，有一定的溶血作用 [40]。熔點(diǎn) 193~195℃ 。 人參皂苷 Rc 性質(zhì)： 白色粉末（乙醇 正丁醇）。 人參皂苷 Rd 性質(zhì)：白色晶體粉末（乙醇 乙酸乙酯 ）。熔點(diǎn) 201~203℃ 。 人參皂苷 Rf 性質(zhì)： 白色粉末（丙酮）。熔點(diǎn) 201~203℃ 。熔點(diǎn) 194～ ℃ ，旋光度 +32 （吡啶）。其乙酰化物為針晶，熔點(diǎn) 245℃ 。研究表明老年動物中樞吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 10 神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)過氧化水平顯著增加，自由基及脂質(zhì)過氧化在衰老過程中起著重要作用。 第二章 五靈脂、人參化學(xué)成分研究 五靈脂的 化學(xué)成分研究 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 11 五靈脂為脊索動物門，哺乳綱，鼯鼠科 （ Petauristidae） ，復(fù)齒鼯鼠 （ Trogopterus xanthipes MilneEdwards） 的干燥糞便，主產(chǎn)于山西、河北等省，及北京市郊，湖北，四川等省亦有少量飼養(yǎng)，全年均可在巖洞或石縫周圍尋找收集 [47]。 五靈脂化學(xué)成分的提取分離 從文獻(xiàn)了解到 [48]，通過對五靈脂各層粗提物的活性篩選，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部分相對于石油醚部分、氯仿部分和正丁醇部分來說，有較強(qiáng)的活性，對抑菌試驗(yàn)、對抗氧化清除 DPPH活性、 對體外抗血小板凝聚實(shí)驗(yàn)、和在鎮(zhèn)痛抗炎實(shí)驗(yàn)中，均有較好效果。提取液經(jīng)雙層白綢子過濾后，合并濾液，加熱濃縮。 乙酸乙酯部分的分離 將乙酸乙酯層提取物 A，用石油醚 乙酸乙酯系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，每 300mL 為一份，TLC 檢測各流分，合并相同的流分，分別濃縮，低溫保存。 化合物 Ⅰ β 谷甾醇 CompoundⅠ βSitosterol 化合物 Ⅱ ：白色粉末，薄層鑒定，與原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品在高效液相同等條件下，出峰時間一致，光譜圖曲線一致，且混合后熔點(diǎn)不下降，故確定化合物 Ⅱ 為原兒茶酸。 L1氫氧化 鉀 － 甲醇溶液 4mL， 混勻 ， 40℃ 恒溫水浴 30min，然后加入10mL超純 水，靜置 24h，待其完全分層后 ， 取上清液作色譜分析試樣。 min1升至 220℃ ， 220℃維持 2min， 然后以 8℃ 圖 22 五靈脂脂溶性成分總離子流色譜圖 Fig22 GCMS chromatogram of the liposoluble constituent of Faeces Trogopterori 總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)椐系統(tǒng)檢索，人工譜圖解析，按各色譜峰的質(zhì)譜裂片 圖與文獻(xiàn)核對，查對質(zhì)譜資料 [5053]，對基峰、質(zhì)荷比和相對豐度等方面進(jìn)行比較，分別對各色譜峰加以確認(rèn)，綜合各項(xiàng)分析鑒定，確定出 五靈脂脂肪酸中的化學(xué)成分，結(jié)果列于表