【正文】 nalysis of liposoluble constituent of Faeces Trogopterori 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 16 序號 化合物名稱 分子式 分子量 相對含 量 /% 1 十二烷酸甲酯 Dodecanoic acid,methyl ester C13H26O2 214 2 十四烷酸甲酯 Methyl tetradecanoate C15H30O2 242 3 12羥基正十二烷酸甲酯 Dodecanoic acid,12hydroxy,methyl ester C13H26O3 231 4 十五烷酸甲酯 Pentadecanoic acid,methyl ester C16H32O2 256 5 棕櫚酸甲酯 Hexadecanoic acid， methyl ester C17H34O2 270 6 10羥基癸酸甲酯 10Hydroxydecanoic acid， methyl ester C11H22O3 228 7 (Z,Z)9,12十八碳二烯酸甲酯 9,12Octadecadienoic acid (Z,Z),methyl ester C19H34O2 294 8 (Z,Z,Z)9,12,15 十八碳三烯酸甲酯 9,12,15Octadecatrienoic acid,methyl ester C19H32O2 292 9 9十八烯酸甲酯 9Octadecenoic acid,methyl ester C19H36O2 296 10 11十八烯酸甲酯 11Octadecenoic acid,methyl ester C19H36O2 296 11 16甲基十八烷酸甲酯 Heptadecanoic acid,16methyl,methyl ester C19H38O2 298 12 十四碳二酸二甲酯 Dimethyl tetradecanedioate C16H30O4 286 13 7,10,13二十碳三烯酸甲酯 7,10,13Eicosatrienoic acid,methyl ester C21H36O2 320 14 二十烷酸甲酯 Eicosanoic acid,methyl ester C21H42O2 326 15 二十二烷酸甲酯 Docosanoic acid,methyl ester C23H46O2 354 如表 21所示，共鑒定出 15種脂肪酸，其中飽和脂肪酸 10種，不飽和脂肪酸 5種。 min1升至 280℃ ， 280℃ 再維持 3min； 質(zhì)譜條件 電子轟擊（ EI） 離子源 ， 電子能量 70eV； 離子源溫度 200℃ ； 接口溫度 250℃ ； 溶劑延時 4min； 倍增器電壓 ； 掃描范圍 40～ 600amu。 GCMS分析條件 氣相色譜條件 根據(jù)文獻和 氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀 摸索結(jié)果，最終確定色譜條件如下： 色譜柱： RTX5MS型彈性石英毛細管色譜柱 (30m,)； 進樣口溫度 ： 250℃ ； 載氣 ： 高純度氦氣 ； 柱 內(nèi)載氣流量 ： 化合物 Ⅱ 原兒茶酸 CompoundⅡ Protocatechuic acid 五靈脂的脂溶性成 分 GCMS分析 本論文在對五靈脂的化學(xué)成分進行研究時發(fā)現(xiàn)， 目前對于五靈脂的脂肪酸的研究尚吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 14 未報道，因此對五靈脂脂肪酸及其他脂溶性成分進行了 GCMS 分析， 經(jīng)過質(zhì)譜計算機數(shù)椐系統(tǒng)檢索，人工譜圖解析，按各色譜峰的質(zhì)譜裂片圖與文獻核對，查對質(zhì)譜資料[5053]， 以面積歸一法定量分析各成分的相對質(zhì)量分數(shù) 。 流分 A2325 合并濃縮，用石油醚 甲醇反復(fù)重結(jié)晶，得到化合物 Ⅰ 。向濃縮液中加入乙醇至其最終濃度為 80%，室溫下過夜。所以本實驗主要對乙酸乙酯部分進行了化學(xué)分離研究。五靈脂主要有效成分為 五靈脂 酸（ wulingzhic acid） ，為異海松酸的衍生物；并含有 原兒茶酸（ protocatechuic acid），焦性 兒茶 酚（ pyrocatechol），苯甲酸（ benzoic acid），間羥基苯甲酸（ mhydroxybenzoic acid），五靈脂三萜酸（ goreishic acid） Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ ， 3蒈烯 9， 10二羧酸（ 3caren9， 10dicarboxylic acid），尿嘧淀（ urcil），次黃嘌呤（ hypoxanthing），尿囊素（ allantoin）， L酷氨酸（ Ltyrosine），3O順 對 香豆酰委陵菜酸（ 3Ocispcoumaroyltormentic acid）， 3O反對 香豆酰委陵菜酸（ 3Otranspcoumaroyltormentic acid），坡模醇酸（ pomolic acid）， 2α羥基熊黑酸（ 2αhydroxyursolic acid），高加藍花楹三萜酸（ jacoumaric acid）， 3O反 對 香豆酰馬期里酸（ 3Otranspcoumaroylmaslinic acid），熊果酸（ ursolic acid），委陵菜酸（ tormentic acid），野雅椿酸（ euscaphic acid），馬斯里酸（ masolinic acid）；還含三對節(jié)萜酸（ serratagenic acid），5甲氧基 7羥基香豆素（ 5methoxy7hydroxycoumarin） 等 [48]。 人參皂苷 Rg2 藥理活性： 人參皂苷 Rg2 對急性心源性休克有保護作用，具有抗休克、抗心 衰、抗凝血、抗血栓作用。 藥理活性： 人參皂苷 Rg1 有益于增強學(xué)習(xí)和記憶能力的作用，還能調(diào)節(jié)體溫，抗 脂質(zhì)過氧化，能促進蛋白質(zhì)合成，選擇性增強大鼠的免疫功能，加強機體對有害因素的抵抗力。旋光度 [α]D+ 。旋光度 0~（ c=，甲醇）。 熔點 197～ 198℃ ，旋光度 + （ c=，甲醇）。旋光度 0~（ c=，甲醇）。熔點 206~209℃ ，旋光度 +（ c=，甲醇）。熔點 192~194℃ （分解）， 199~201℃ 。旋光度 +（ c=1，甲醇）。人參皂苷 Rb2能明顯增加大鼠骨髓細胞中 DNA 和蛋白質(zhì)的合成，并且能促進血清蛋白合成。 人參皂苷 Rb2 性質(zhì)： 白色粉末（甲醇 正丁醇）。 藥理活性： 人參皂苷 Rb1對心律失常、心肌細胞膜離子通道病變、心肌細胞受體異常、自主神經(jīng)功能紊亂、心肌細胞凋亡有較好的作用。人參的藥理活性，常常因機體機能狀態(tài)不同而產(chǎn)生雙向作用，因此說人參是具有“適應(yīng)原”作用的典型代表。 [36]”等良好作用，是一種名貴的中藥材。張春瀾 [34]等人用來治療血管 性頭痛， 34 例，且療效滿意。 ，血栓所致的偏癱， 3 日四肢轉(zhuǎn)暖， 15 日后患肢基本恢復(fù)，并能下床活動。為了進一步研究五靈脂與人參配伍的化學(xué)變化，所以 對五靈脂也進行了化學(xué)成分研究，以期從中找到有活性的天然產(chǎn)物，為其藥理研究奠定基礎(chǔ)，也為分析人參五靈脂配伍禁忌打下物質(zhì)基礎(chǔ)。 揮發(fā)性成分 魏垠等人 [27]通過研究發(fā)現(xiàn) 五靈脂中含有的揮發(fā)性成分主要為：醇類（ 10 種），酮類（ 8種），醛類（ 6 種），烯類（ 5 種），酸類（ 4 種），酚類（ 4 種）。 酚酸類化合物 酚酸類化合物在抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗血小板凝集方面，有較強活性。后又有報道 [2021]從中分離得到三對節(jié)酸（ serratagenic acid），五靈脂三萜酸（ goreishic acid） Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。 未來應(yīng)在兼顧藥用的同時，加強保護五靈脂資源的可持續(xù)利用。家籠養(yǎng)殖主要的商品是皮毛，五靈脂只不過是副產(chǎn)品，產(chǎn)量無法大增。 目前，野生品種較分散不易收集，因此能提供的量較少，且不穩(wěn)定。 五靈脂的分布及產(chǎn)量情況分析 五靈脂古代盛產(chǎn)于華北、華中和西部山區(qū)。 從宋朝起到現(xiàn)在，對五靈脂的原動物品種，眾說紛紜。其屎恒集一處，氣甚腥惡，粒大如豆，采之有如糊者，有粘塊如糖者。主療心腹冷氣，小兒五疳，辟疫，治腸風，通利氣脈，女子月閉。 五靈脂與人參兩者并用 ， 在臨床上已用于冠心病 、 胃潰瘍 、 疳積 [12]、 神經(jīng)性頭痛 、 胃癌、慢性膽囊炎、結(jié)核性胸膜炎、再生障礙性貧血、風濕性心臟病、急性風濕病等病癥 ，并且都有較好的療效。 ”[12]《張氏醫(yī)通》吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 5 中治療血蠱的琥珀人參丸： “此人參與五靈脂并用，最能浚血。 目前為止，國內(nèi)對五靈脂與人參配 伍的藥理實驗方面研究多數(shù)是針對以人參功效、主治為主的 方面進行 藥理研究 ，但 從文獻分析來看，五靈脂與人參配伍，多數(shù)是以五靈脂功效、主治為主，所以，本論文將對此進行研究。 抗應(yīng)激實驗 有報道 認為 ，五靈脂可降低人參的抗耐缺氧 作用和抗疲勞作用 [8]， 還有 報道 稱 人參 ，五靈脂及其配伍 組 ，均能明顯提高正常小鼠耐缺氧、耐疲勞、耐寒、耐高溫的能力，且上述作用在配伍組與單味藥組中均無顯著性差異 [10]。但當人參劑量大于五靈脂劑量時，可使上述指標顯著升高 [8]。例如：小鼠急性毒性實驗表明 [6]， 人參與五靈脂配伍，口服不具毒性，但腹腔注射毒性呈增加趨勢；而大鼠的亞急性毒性實驗顯示，五靈脂與人參配伍并不影響大鼠的血小板數(shù)，白細胞數(shù)量和血紅蛋白含量及體重。五靈脂的加入，可以使溶液中人參皂苷的總量趨于減少，但五靈脂加入量不同對人參中各單體皂苷的影響各不相同，五靈脂的加入，使部分人參皂苷生成沉淀。 五靈脂與人參配伍化學(xué)實驗研究進展 近年來，有很多學(xué)者從藥理、臨床方面對五靈脂與人參的配伍進行了研究，研究結(jié)果存在分歧。 ：人參 2 錢，五靈脂（微焙，研末，酒飛，去砂） 2 錢。 ：人參 2 兩，五靈脂 2 兩。處方來源 ： 《遵生八箋》卷十八。處方來源 ： 《活人方》卷二。處方來源 ： 《中國醫(yī)學(xué)大辭典》引彭祖方。處方來源：《醫(yī)方類聚》卷一五三引《經(jīng)驗秘方》。處方來源 ： 《幼幼集成》卷三。處方來源 ： 《古今醫(yī)鑒》卷十三。處方來源 ： 《普濟方》卷三九一。處方來源 ： 《楊氏家藏方》卷一。 處方來源 ： 《辨證錄》卷三。 處方來源 ： 《圣濟總錄》卷六。 處方來源 ： 《簡明醫(yī)彀》卷七。 處方來源 ： 《全國中藥成藥處方集》（天津方）。 處方來源 ： 《全國中藥成藥處方集》（南京方）。 處方來源 ： 《普濟方》卷九十三。 處方來源 ： 《寧坤秘籍》卷上。 處方來源 ： 《秘傳外科方》。 處方來源 ： 《誠書》卷八。 處方來源 ： 《女科玉尺》卷四。 處方來源 ： 《圣濟總錄》卷十一。 處方來源 ： 《醫(yī)碥》卷六。 處方來源 ： 《中國藥典》（ 2020 年版）。而本文研究的五靈脂與人參正是中藥十九畏中臨床應(yīng)用較多的一對配伍，對其進行實驗研究，可為臨床合理配伍提供科學(xué)有效的重要依據(jù)。 DPPH 活性 .......................................... 28 表格清單 表 21 五靈脂脂肪酸成分組分及相對含量 ...................................... 15 表 22 五靈 脂非脂肪酸成分組分及相對含量 ................................... 16 表 31 樣品稱量 ............................................................. 2 表 32 五靈脂、五靈脂和人參配伍的總黃酮含量 ................................. 4 表 33 樣品稱量 ............................................................. 5 表 34 原兒茶酸標準曲線數(shù)據(jù) ................................................. 6 表 35 對照品的精密度（ n=3） ................................................ 7 表 36 重現(xiàn)性實驗結(jié)果 ....................................................... 7 表 37 穩(wěn)定性實驗結(jié)果 ....................................................... 8 表 38 加樣回收率測定結(jié)果 ................................................... 8 表 39 含量測定結(jié)果 ........................................................ 10 表