【正文】 有死亡或死亡數(shù)不足一半，說明其累積劑量已達(dá) ，即 K＞ 5。 觀察每組雌雄合計的死亡動物數(shù)量 。 即使化學(xué)毒物以相等的時間間距恒速地吸收入血液 ， 該物質(zhì)在一定劑量范圍內(nèi)在機(jī)體的蓄積量也不呈直線無限地增加 ， 而是呈曲線形上升并有一定的極限 。 蓄積作用及其評價 二、蓄積毒性試驗方法及其評價 9/15/2020 34 一 亞慢性毒性作用： ? 亞慢性毒性的概念 ? 亞慢性毒性試驗的目的 ? 亞慢性毒性試驗的設(shè)計 二 慢性毒性作用： ? 慢性毒性的概念 ? 慢性毒性試驗的目的 ? 慢性毒性試驗設(shè)計 167。 。其主要目的是檢測那些能引起 DNA損傷的環(huán)境因素，研究其遺傳毒作用的特點及對人類的潛在危害。 9/15/2020 50 ? 致突變作用或誘變作用 (mutagenesis) 廣義概念是外來因素，特別是化學(xué)因子引起細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的能力，而且此種改變可隨同細(xì)胞分裂過程而傳遞。 9/15/2020 58 ? 一、基因突變 (gene mutation) 化學(xué)毒物致突變的類型 9/15/2020 59 化學(xué)毒物致突變的類型 ? 一、基因突變 (gene mutation) 9/15/2020 60 ? 二 、 染色體畸變 (chromosome aberration) 指染色體的結(jié)構(gòu)改變 ? 染色單體型畸變 (chromatidtype aberration) ? 染色體型畸變 (chromosome aberration) 染色體畸變 裂隙(gap) 斷裂(break) 斷片(fragment)和缺失(deletion) 微小體(minute body) 無著絲點環(huán) 環(huán)狀染色體 雙著絲點染色體 倒位(inversion) 易位(translocation) 插入(insertion)和重復(fù)(duplication) 輻射體 化學(xué)毒物致突變的類型 9/15/2020 61 染色體缺失及環(huán)狀染色體的形成圖 染色體插入和重復(fù)示意圖 9/15/2020 62 染色體的臂間倒位 染色體相互易位示意圖 9/15/2020 63 ? 二、染色體畸變 (chromosome aberration) 化學(xué)毒物致突變的類型 9/15/2020 64 ? 三 、 基因組突變 ? 1． 非整倍體 非整倍體 (aneuploid)指細(xì)胞丟失或增加一條或幾條染色體 。 ? 2． 整倍體 整倍體 (euploid)指染色體數(shù)目的異常是以染色體組為單位的增減 ， 如形成三倍體 (triploid)、 四倍體 (tetroploid)等 。 化學(xué)毒物致突變的類型 9/15/2020 65 致突變作用的機(jī)制 ? 一、 DNA損傷與突變 ? (一 )堿基損傷 ? 1. 堿基錯配 ? 2. 嵌入 DNA鏈 ? 3. 堿基類似物的取代 ? 4. 堿基的化學(xué)結(jié)構(gòu)改變或破壞 9/15/2020 66 ? 一、 DNA損傷與突變 ? （二） DNA鏈?zhǔn)軗p 1. 二聚體的形成 2. DNA加合物（ DNA adducts）形成 3. DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)物 (DNAProtein crosslinks， DPC)形成 ? 二、 引起突變的細(xì)胞分裂過程的改變 ? 三、其他的改變 對 DNA合成和修復(fù)有關(guān)的酶系統(tǒng)作用可間接導(dǎo)致 DNA損傷，誘發(fā)基因突變或染色體畸變。因此，將試驗觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件統(tǒng)稱為 遺傳學(xué)終點 (geic endpoint)。因為： ? ①化學(xué)毒物的種類和結(jié)構(gòu)多種多樣，其致突變的機(jī)制不盡相同，作用的靶細(xì)胞也不一樣，有的是體細(xì)胞，或生殖細(xì)胞，或兩者兼而有之，故在成套觀察項目中既要用體細(xì)胞檢測又要用生殖細(xì)胞；除了從分子水平還要從細(xì)胞水平來檢測化學(xué)毒物的遺傳毒性。 ? ③化學(xué)毒物的致突變性有強(qiáng)，也有弱；有的在某一檢測系統(tǒng)中是強(qiáng)致突變物，而在另一系統(tǒng)中可能是弱的致突變物。 ? ③體內(nèi)試驗與體外試驗配合。 (his) 正向突變 回復(fù)突變 代謝活化系統(tǒng) 受試物 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 75 ? 二、常用的致突變試驗 ? (二 )微核試驗 微核 (Micronucleus)的產(chǎn)生與染色體損傷有關(guān)，是染色體或染色單體的無著絲點斷片或紡錘絲受損傷而丟失的整個染色體，在細(xì)胞分裂后期遺留在細(xì)胞質(zhì)中，末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱微核。 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 76 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 (二 )微核試驗 9/15/2020 77 MN NCE 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 78 ? 二、常用的致突變試驗 ? (三 )染色體畸變分析 ? (四 )姐妹染色單體交換試驗（ SCE） 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 79 ? 二、常用的致突變試驗 ? (五 )果蠅伴性隱性致死試驗 ? (六 )顯性致死試驗 ? (七 )程序外 DNA臺成試驗 ? (八 )轉(zhuǎn)基因動物致突變試驗 ? (九 )哺乳動物細(xì)胞基因突變試驗 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 80 ? 三、致突變試驗中的一些問題 ? (一 )陰性和陽性對照的設(shè)立 ? 1．陰性對照 它是空白對照，即不加任何處理。例如， Ames試驗的陰性對照可了解所用的細(xì)菌的自發(fā)回復(fù)突變率；證實除處理因素外無任何使回復(fù)突變率增加或減少的因素。所以，當(dāng)陽性對照結(jié)果未呈陽性，其實驗組的實驗數(shù)據(jù)可靠性亦大大降低。 ? 2． S9 S9指經(jīng)酶誘導(dǎo)劑處理后制備的肝勻漿，再經(jīng) 9000g離心分離所得上清液，加上適當(dāng)?shù)木彌_液和輔助因子。 觀察化學(xué)毒物致突變作用的基本方法 9/15/2020 82 ? 三、致突變試驗中的一些問題 ? (三 )致突變試驗與致癌試驗的關(guān)系 ? ①已知大多數(shù)化學(xué)致癌物具有致突變作用，遺傳學(xué)改變在原癌基因激活和抑癌基因失活上起主要作用，致癌物誘致關(guān)鍵靶基因遺傳改變的直接作用等在哺乳動物實驗中證實。需要發(fā)展多種體內(nèi)和體外短期試驗，用于對化學(xué)物質(zhì)致癌性進(jìn)行篩檢。溶解度大、毒性低的化學(xué)物，在細(xì)菌試驗中可以 5000μ g／皿作為最高劑量。陽性結(jié)論，即表明受試物具有致突變性，而不同致突變試驗的遺傳學(xué)終點不同，其所表示的含義不一。 ? 在遺傳危害性評價時，在體外基因突變試驗中呈陽性的化學(xué)物應(yīng)進(jìn)行與哺乳類性腺DNA相互作用的試驗，包括睪丸細(xì)胞的 SCE、 UDS、染色體畸變及堿性洗脫試驗等，也可進(jìn)行顯性致死試驗，在第二階段中出現(xiàn)陽性反應(yīng)，需進(jìn)行小鼠特異座位試驗，可觀察形態(tài)改變或生化改變；在體內(nèi)骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗或微核試驗中呈陽性的化學(xué)物需進(jìn)行顯性致死試驗，在第二階段中出現(xiàn)陽性反應(yīng)，再進(jìn)行小鼠可遺傳易位試驗。但對于構(gòu)效關(guān)系顯示有可能具致癌性或致突變性，但在三項標(biāo)準(zhǔn)試驗中為陰性的化學(xué)物，還需要改進(jìn)試驗方法或再增加試驗項目。