20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—流式細(xì)胞術(shù)基本原理及應(yīng)用-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 e Instrument Controls on the Data,Instrument Controls,Detector,FSC detector 250 gain,FSC detector 350 gain,第二十七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Review Questions,Which instrument components ensure that the fluorescence signal of a specific fluorochrome is only measured by a designated detector? For example, APC is only measured by the FL4 detector.,第三十一頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。bāo)懸液的制備,細(xì)胞懸液： 分離PBMC、PRP等：操作復(fù)雜，分離、離心步驟導(dǎo)致細(xì)胞特定群體丟失，并可能引入某些誤差 直接使用外周血、骨髓：最接近生理狀況，操作簡(jiǎn)便，樣本用血量小 灌洗液、體腔積液 培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞系 實(shí)體組織(zǔzhī)： 病理組織：新鮮樣本/石蠟包埋樣本 針吸組織：新鮮樣本 鞘液、洗液等：清潔無(wú)顆粒雜質(zhì),第三十三頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Propidium Iodide,400 nm,500 nm,600 nm,700 nm,PI,DNA,Excitation,Emisson,300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm,第三十六頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,FITC和PE熒光(y237。,補(bǔ)償(bǔch225。u)二： 染色,體積 溫度(wēnd249。,間接(ji224。,示意圖,第四十七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。 d224。)設(shè)置調(diào)節(jié),1. 用未染色(rǎns232。)同型對(duì)照,例：一個(gè)雙色染色的實(shí)驗(yàn) 抗體A FITC，抗體B PE 對(duì)應(yīng)(du236。ngtǐ)結(jié)合數(shù),第五十一頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,第五十三頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,細(xì)胞結(jié)構(gòu) 細(xì)胞大小(d224。o)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選,流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞學(xué)應(yīng)用,第五十七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。 sh249。ng)與環(huán)境微生物分析 染色體分選,第五十九頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Flow Cytometry,in clinics and research,第六十一頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。bāo)周期）,細(xì)胞內(nèi)DNA含量 增殖相關(guān)基因的表達(dá)(biǎod225。xu233。,A typical DNA Histogram,G0G1,S,G2M,Fluorescence Intensity, of Events,第六十七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,第六十九頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,BrdUrd Incorporation,Bromodeoxyuridine (BrdU) 是一個(gè)胸腺核苷的類(lèi)似物 能夠在細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期狀態(tài)分析中起作用 BrdU能與正在復(fù)制周期內(nèi)的細(xì)胞相結(jié)合 使用(shǐy242。ngyu225。,Apoptotic Cell Death a genetically encoded cell death program, which is morphologically, biochemically and molecularly distinct from necrosis,第七十五頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Flow cytometry of apoptotic cell death,熒光吸收 細(xì)胞的胞膜對(duì)于(du236。ngguāng)底物 新的抗原決定基CK18,第七十九頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。使用有膜穿透性的親脂性陽(yáng)離子熒光染料，如Rh123, DiOC6, JC1,CMXRos等，可作為流式檢測(cè)的探針。,Flow cytometry of apoptotic cell death,鈣離子流和 pH值變化 胞漿內(nèi)Ca2+ 水平(shuǐp237。,第八十六頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。 duān)轉(zhuǎn)脫氧核苷酰酶(TdT)連接上dUTP。,第九十頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Flow Cytometry of Apoptotic Cells,第九十二頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,淋巴細(xì)胞亞群分析(fēnxī),根據(jù)功能，淋巴細(xì)胞主要分為 B淋巴細(xì)胞（CD19+），與體液免疫有關(guān) T淋巴細(xì)胞（CD3+），與細(xì)胞免疫有關(guān) 總T和總B可以用來(lái)判斷某些免疫缺陷和自身免疫性疾病 NK細(xì)胞（CD3CD16+56+），行使免疫監(jiān)控(jiān k242。)失調(diào)或被懷疑是免疫(miǎny236。,第九十七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。ngyu225。,MHC: Class I and Class II Gene Products,T cell受體不直接(zh237。o),第一百零三頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。h233。另外的優(yōu)點(diǎn)是用這種檢測(cè)方案分選的Treg細(xì)胞得率更高。njiū) T cell亞群對(duì)于病毒和細(xì)菌抗原的反應(yīng) 細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)機(jī)會(huì)感染的免疫反應(yīng) 藥物/疫苗的效果評(píng)價(jià) 免疫調(diào)節(jié) 移植監(jiān)控 毒理研究,第一百零七頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,Traditional Cytokine Flow Cytometry,IL2 Phycoerythrin,CD4 FITC,第一百一十一頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。細(xì)胞因子可以調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和功能(gōngn233。bāo)的細(xì)胞(x236。,Biological Variation Among CMVseropositive Donors in Response to CMV,第一百一十五頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,CFC amp。) 快速、靈敏、樣本量更少,第一百一十八頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。ngtǐ)的差異,第一百一十九頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。 Proteomics Single Cells Have Big Proteomics Story to Tell.,BD PhosFlow not only tells you activation of a single cell for one particular phospho protein and pathway, but allows you to study multiple phosphorylation events and pathways simultaniously.,第一百二十一頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。,第一百二十四頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。tǒng)你可以:,? 從單一小體積樣本中得到多項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果 ? 對(duì)所有的檢測(cè)項(xiàng)目(xi224。o)提供的檢測(cè)內(nèi)容,可溶性細(xì)胞因子 細(xì)胞(x236。nɡ w233。,9個(gè)指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)(jiǎn c232。,Monitoring the T Cell Activation Pathway by CBA (PD98059),Jurkat cells were preincubated with 200 mM PD98059 (MEK inhibitor) for 20 minutes before being activated activated with antiCD3/CD28 for 2 minutes. SDS was added to a final concentration of 1% and the material was placed in a boiling water bath for 5 minutes.,第一百三十四頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。i)檢測(cè)基因表達(dá)情況,第一百三十六頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。)的檢測(cè),端粒的長(zhǎng)度和端粒酶的活性是現(xiàn)在研究的重點(diǎn)。,流式分選應(yīng)用(y236。r225。直方圖顯示59％細(xì)胞表達(dá)該肽鏈，并顯示不同的表達(dá)水平。)細(xì)胞分選 特異性T淋巴細(xì)胞分選 白血病細(xì)胞分選,第一百四十二頁(yè)，共一百四十三頁(yè)。ngy242。病理組織：新鮮樣本/石蠟包埋樣本。一種“三明治”免疫測(cè)定法——
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