《流式細(xì)胞儀培訓(xùn)》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 部結(jié)構(gòu)信息 特殊的顯微鏡 ? 高速測(cè)定細(xì)胞，大樣本計(jì)數(shù) ? 檢測(cè)稀有細(xì)胞 ? 多參數(shù)分析 ? 自動(dòng)化 ? 細(xì)胞分選 流式細(xì)胞儀的主要特點(diǎn) 二、流式細(xì)胞儀工作原理 流式細(xì)胞儀工作原理 流式細(xì)胞儀通常以激光作為激發(fā)光源，經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。 利用流式細(xì)胞儀通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞或其它顆粒性物質(zhì)（表面或胞漿或胞核）的物理、化學(xué)特性并通過(guò)這些特性對(duì)細(xì)胞或顆粒進(jìn)行定量。 二色鏡 1 2 3 帶通濾波片 光電倍增管 激光束 細(xì)胞 收集透鏡 前向散射光 側(cè)向散射光，熒光 數(shù)據(jù)處理 FSC SSC FL1 FL2 FL3 對(duì)數(shù) 線性 線性 線性 對(duì)數(shù) 脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換 光信號(hào) 電信號(hào) 記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果 （面積，峰高，寬度） 顆粒度 細(xì)胞大小 流式細(xì)胞儀產(chǎn)生的信號(hào) 非熒光信號(hào) FL1 – FITC,GFP…(PMT2) FL2 – PE (PMT3) FL3 – ECD,PI… (PMT4) FL4 – PC5,APC… (PMT5) 熒光信號(hào) ?細(xì)胞表面的抗原 (或細(xì)胞膜受體 )與相關(guān)的熒光抗體結(jié)合，形成帶有熒光的抗原抗體復(fù)合物。 TUNEL 3. 研究凋亡觸發(fā)機(jī)制：Caspase、 Fas及 FasL bcl2/bax 4. 多參數(shù) 分析凋亡是趨勢(shì) G1 S phase G2 M G1 1 2 1 DNA含量 DNA 含量 細(xì)胞周期時(shí)相 G0/1 G2/M S 細(xì)胞數(shù) 細(xì)胞周期分析 PI Ethidium Bromide Acridine Orange DAPI (UV excitable) Hoechst 33342 (viable, UV excitable) ?不能主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞，需要固定打孔 ?488nm激發(fā) ?為脂溶性，主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞 ?UV激發(fā) 常用的 DNA 染料 DNA含量及細(xì)胞周期分析 細(xì)胞周期分析 :在細(xì)胞周期 (G0， G1， S， G2 ， M)的各個(gè)時(shí)期， DNA的含量隨各時(shí)相呈現(xiàn)出周期性的變
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