3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體-預(yù)覽頁
【正文】 純化 三、半抗原性免疫原的制備 第二節(jié) 免疫佐劑 一、佐劑的種類 二、佐劑的作用機(jī)制 第三節(jié) 抗血清的制備 一、免疫動(dòng)物的選擇 二、免疫程序 三、動(dòng)物采血法 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 一、抗血清的鑒定 二、抗血清的保存 第五節(jié) 抗血清的純化 一、特異性 IgG抗體 二、單價(jià)特異性抗血清 思考題 小結(jié) ? 基本要求： ? 掌握：免疫原、抗血清的制備過程。 ? 細(xì)胞抗原： （ 綿羊紅細(xì)胞 ）一般情況下經(jīng)生理鹽水洗凈，配制一定濃度的細(xì)胞懸液，即可應(yīng)用。 ? 蛋白質(zhì)、糖蛋白、細(xì)菌毒素、酶、補(bǔ)體和核酸都是良好的可溶性抗原。 ? 組織均漿液要離心沉淀，沉淀物組織和細(xì)胞碎片，上清液為提取可溶性抗原的材料。 ? 超聲破碎法：利用超聲波機(jī)械振動(dòng)的原理使細(xì)胞破碎。 ? 表面活性劑處理法：常用十二烷基硫酸鈉等表面活性劑處理。 選擇性沉淀法： 核酸去除法－氯化錳、硫酸魚精蛋白、鏈霉素 鹽析法－硫酸銨、硫酸鈉 有機(jī)溶劑沉淀法－乙醇、丙酮 聚合物沉淀法－聚乙二醇 選擇沉淀法 ? 采用各種沉淀劑或某些條件促使抗原成分沉淀的方法。 ? 抗原的濃縮：通過加入硫酸銨，將其沉淀下來，以利于進(jìn)一步純化。 離子交換層析 ? 離子交換層析是利用一些帶電離子集團(tuán)的凝膠或纖維素，吸附帶有相反電荷的蛋白質(zhì)抗原。 ? 凝膠合成的高度交聯(lián)樹脂 。 最常用的支持物是 Separose4B（瓊脂糖珠） (2)配體的選擇 條件： ①抗原或抗體必須單一特異性； ②抗原與抗體必須具有較高的親和力； ③配體必須有一個(gè)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團(tuán)。 ? 將其分解成片段，如 Fab段、 Fc段和輕鏈等作為免疫原制備抗血清，能制得分辨能力更高的特異性抗體，制備方法如下： 免疫球蛋白片段的制備： 非共價(jià)鍵解離法－改變 pH 、利用強(qiáng)變性劑 共價(jià)鍵解離法－氧化法和還原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶 酶裂解法 ? 酶對免疫球蛋白的水解有極好的專一性。 具有免疫原性的佐劑 :如卡介苗、枯草分支桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭氏陰性桿菌內(nèi)毒素（脂多糖）和細(xì)胞因子。 一、佐劑的種類 ? 增強(qiáng)免疫原性 使弱免疫原性物質(zhì)變成持久或強(qiáng)的免疫原。 刺激單核 吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)其處理和提呈抗原的能力。 ? 抗血清與粗抗原出現(xiàn)一條線，產(chǎn)生單價(jià)特異性抗體 雙向免疫擴(kuò)散對抗體特異性鑒定 雙向免疫擴(kuò)散法對抗體效價(jià)的鑒定 ? 測定抗體效價(jià)有兩種稀釋方法： ? 稀釋抗血清，倍比稀釋，分別與一個(gè)濃度的純抗原反應(yīng)。 鹽析法： 硫酸銨鹽析法、硫酸鈉鹽析法 凝膠過濾法： 常結(jié)合鹽析法 離子交換層析法： DEAE纖維素、 QAEsephadex、 QAE纖維素 親和層析法： 純化抗原或 SPA交聯(lián) Sepharose 4B制成親和層析柱 一、特異性 IgG抗體 單價(jià)特異性抗血清 ? 血清只與其特異性抗原發(fā)生反應(yīng)。半抗原是指僅有抗原性而無免疫原性的物質(zhì)，與載體結(jié)合后可具有免疫原性。 特異性 IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等；制備單價(jià)特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。 :05:0105:05Feb235Feb23 ? 1故人江海別，幾度隔山川。 。 , February 5, 2023 ? 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 :05:0105:05:01February 5, 2023 ? 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 2月 5日星期日 5時(shí) 5分 1秒 05:05:015 February 2023 ? 1空山新雨后，天氣晚來秋。 :05:0105:05Feb235Feb23 ? 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 2023年 2月 5日星期日 上午 5時(shí) 5分 1秒 05:05: ? 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于
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