3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體-wenkub
2023-02-05 19:19:16 本頁面
【正文】 00℃ 2~2． 5h去除鞭毛抗原；毒素抗原則在殺菌后再加 0． 5%~1． 0%氯化鈣溶液等。 ? 掌握：抗血清的鑒定方法、抗血清的純化方法 第一節(jié) 免疫原的制備 免疫原 (immunogen)是能誘導機體產生抗體或致敏淋巴細胞，并能在體內外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的物質。 顆粒性抗原－ 細胞、細菌、寄生蟲 可溶性抗原－ 蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、核酸 細胞抗原：綿羊紅細胞 細菌抗原：菌體抗原、鞭毛抗原 寄生蟲體抗原：蟲卵 一、顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原包括人和各種動物細胞抗原以及各種細菌抗原和寄生蟲體抗原。 ? 顆?？乖蠖嘤?靜脈內注射 免疫法，較少加佐劑作皮內注射。 ? 研磨法： ? 用玻璃均漿器或乳缽研磨，經過旋轉、壓擠將組織粉碎。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細胞或培養(yǎng)細胞可溶性抗原的制備： 反復凍融法－ 20℃ 凍結，然后室溫融化 超聲破碎法－超聲波（ 1～ 20kHz） 自溶法－自身酶系 酶處理法－溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶 表面活性劑處理法－ SDS、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴 ? 反復冷凍法：將細胞或整塊組織置 20℃冰箱內凍結，然后置室溫融化，如此反復兩次，大部分組織細胞及細胞內的顆?？蓛鋈谄扑?。 ? 酶處理法：溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶等，在一定的條件下能消化細菌和組織細胞。（梯度柱）。 ? 提取丙種球蛋白 :（ IgG95%以上）將33%~50%飽和度硫酸胺沉淀物經去鹽后可直接用于抗體試劑。 ? 通過凝膠分子篩作用，大、中、 小三類分子彼此較易分開。 ? 被覆以離子化物質的細粉。 親和層析法： 利用生物大分子之間具有的專一性親和力 (1)親和層析支持物的選擇： ①非特異性吸附低； ②液體流速快； ③在各種 pH和高濃度鹽溶液中穩(wěn)定； ④有合適豐富的化學基團，與蛋白質或其它化合物結 合； ⑤有豐富的微孔，以增加結合容量。 (4)親和層析條件的選擇： ①封閉活性基團：用無關蛋白質或三乙醇胺過柱； ②除去未結合和結合不牢的蛋白：先用NaHCO3洗脫，再用解脫劑處理； 解脫劑： 3mol/L 硫氰酸鉀（或鈉）、 ? 制備菌體抗原的方法是 ? A 100℃ 加溫 2小時 B %甲醛 ? C 75%乙醇 D 1%氯化鈣 ? E 2％氯仿 ? 分離亞細胞成分最常用的方法是 ? A 凝膠過濾法 B 低速離心法 ? C 超速離心法 D 選擇性沉淀法 ? E 高速離心法 ? 配制綿羊紅細胞免疫原一般細胞濃度為 ? A 103∕ml B 104∕ml ? C 105∕ml D 106∕ml ? E 107∕ml ? 顆粒性抗原免疫接種的方法通常采用 ? A 皮下注射 B 淋巴結注射 ? C 肌肉注射 D 皮內注射 ? E 靜脈注射 免疫球蛋白片段的制備 ? 免疫球蛋白具有抗體活性，五類免疫球蛋白都能用純化的方法提取出來。 （三）純化抗原的鑒定 蛋白含量測定： 紫外吸收法、雙縮脲法、酚試劑法 分子量測定： SDSPAGE、凝膠過濾 純度鑒定： 醋酸纖維膜電泳、 SDSPAGE、毛細管電泳、等電聚焦、高效液相層析 免疫活性鑒定： 雙向免疫擴散、免疫電泳、 ELISA ? 制備人工抗原時，最常用于偶聯(lián)半抗原的載體是 ? A 牛血清白蛋白 B牛甲狀腺球球蛋白 ? C 人血清白蛋白 D 人甲狀腺球蛋白 ? E 兔血清白蛋白 第二節(jié) 免疫佐劑 免疫佐劑 ： 那些與抗原一起或先于抗原注入機體后，可增強機體對該抗原的免疫應答或改變免疫應答的類型的物質稱為免疫佐劑 ,簡稱佐劑 .
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