3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體-wenkub
2023-02-05 19:19:16 本頁面
【正文】 00℃ 2~2． 5h去除鞭毛抗原；毒素抗原則在殺菌后再加 0． 5%~1． 0%氯化鈣溶液等。 ? 掌握：抗血清的鑒定方法、抗血清的純化方法 第一節(jié) 免疫原的制備 免疫原 (immunogen)是能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。 顆粒性抗原－ 細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲 可溶性抗原－ 蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸 細(xì)胞抗原：綿羊紅細(xì)胞 細(xì)菌抗原：菌體抗原、鞭毛抗原 寄生蟲體抗原：蟲卵 一、顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原的制備 顆粒性抗原包括人和各種動物細(xì)胞抗原以及各種細(xì)菌抗原和寄生蟲體抗原。 ? 顆?？乖蠖嘤?靜脈內(nèi)注射 免疫法，較少加佐劑作皮內(nèi)注射。 ? 研磨法： ? 用玻璃均漿器或乳缽研磨，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)、壓擠將組織粉碎。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備： 反復(fù)凍融法－ 20℃ 凍結(jié)，然后室溫融化 超聲破碎法－超聲波（ 1～ 20kHz） 自溶法－自身酶系 酶處理法－溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶 表面活性劑處理法－ SDS、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴 ? 反復(fù)冷凍法：將細(xì)胞或整塊組織置 20℃冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后置室溫融化，如此反復(fù)兩次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？蓛鋈谄扑椤? ? 酶處理法：溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶等，在一定的條件下能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。（梯度柱）。 ? 提取丙種球蛋白 :（ IgG95%以上）將33%~50%飽和度硫酸胺沉淀物經(jīng)去鹽后可直接用于抗體試劑。 ? 通過凝膠分子篩作用，大、中、 小三類分子彼此較易分開。 ? 被覆以離子化物質(zhì)的細(xì)粉。 親和層析法： 利用生物大分子之間具有的專一性親和力 (1)親和層析支持物的選擇： ①非特異性吸附低； ②液體流速快； ③在各種 pH和高濃度鹽溶液中穩(wěn)定； ④有合適豐富的化學(xué)基團，與蛋白質(zhì)或其它化合物結(jié) 合； ⑤有豐富的微孔，以增加結(jié)合容量。 (4)親和層析條件的選擇： ①封閉活性基團：用無關(guān)蛋白質(zhì)或三乙醇胺過柱； ②除去未結(jié)合和結(jié)合不牢的蛋白：先用NaHCO3洗脫，再用解脫劑處理； 解脫劑： 3mol/L 硫氰酸鉀（或鈉）、 ? 制備菌體抗原的方法是 ? A 100℃ 加溫 2小時 B %甲醛 ? C 75%乙醇 D 1%氯化鈣 ? E 2％氯仿 ? 分離亞細(xì)胞成分最常用的方法是 ? A 凝膠過濾法 B 低速離心法 ? C 超速離心法 D 選擇性沉淀法 ? E 高速離心法 ? 配制綿羊紅細(xì)胞免疫原一般細(xì)胞濃度為 ? A 103∕ml B 104∕ml ? C 105∕ml D 106∕ml ? E 107∕ml ? 顆粒性抗原免疫接種的方法通常采用 ? A 皮下注射 B 淋巴結(jié)注射 ? C 肌肉注射 D 皮內(nèi)注射 ? E 靜脈注射 免疫球蛋白片段的制備 ? 免疫球蛋白具有抗體活性，五類免疫球蛋白都能用純化的方法提取出來。 （三）純化抗原的鑒定 蛋白含量測定： 紫外吸收法、雙縮脲法、酚試劑法 分子量測定： SDSPAGE、凝膠過濾 純度鑒定： 醋酸纖維膜電泳、 SDSPAGE、毛細(xì)管電泳、等電聚焦、高效液相層析 免疫活性鑒定： 雙向免疫擴散、免疫電泳、 ELISA ? 制備人工抗原時，最常用于偶聯(lián)半抗原的載體是 ? A 牛血清白蛋白 B牛甲狀腺球球蛋白 ? C 人血清白蛋白 D 人甲狀腺球蛋白 ? E 兔血清白蛋白 第二節(jié) 免疫佐劑 免疫佐劑 ： 那些與抗原一起或先于抗原注入機體后，可增強機體對該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答的類型的物質(zhì)稱為免疫佐劑 ,簡稱佐劑 .
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