細胞培養(yǎng)準備工作-預覽頁
【正文】 2． 合成培養(yǎng)基：M199培養(yǎng)基或DMEM培養(yǎng)基（Gibico公司 一袋1000ml ,Hepes 25g ）DMEM 一袋，Hepes ,NaHCO3 ,三蒸水1000ml，青霉素100u/ml,鏈霉素100ug/ml ph=~3． FBS胎牛血清（原代培養(yǎng)20％傳代培養(yǎng)10％）(100ml )四：組織塊的分離方法：1． 剪切分離法：~2mm2內，大小影響不大（可調整翻瓶時間以保證組織塊貼壁），關鍵在于組織塊邊緣整齊，光滑，要求取材迅速，動作輕柔，剝除外膜時用力適中避免機械損傷，將鑷子夾過處剪去，血管縱向剖開后平鋪于平皿上，手術刀片無菌，潔凈，鋒利，垂直下刀，力求一次切斷，不要離開培養(yǎng)液操作，保持邊緣濕潤。6小時后輕輕翻轉培養(yǎng)瓶，靜置培養(yǎng)。110mg/l丙酮酸鈉，100U/ml青霉素，100ug/ml鏈霉素） 貼塊法具有獲得平滑肌細胞純度高，量多，操作簡便的優(yōu)點。細胞計數(shù)（0。3． 貼塊＋酶解法：對未消化完全的組織塊采用貼塊法接種瓶壁，先置培養(yǎng)箱2h使組織塊干固，然后補加培養(yǎng)液，37℃靜置培養(yǎng)，3d后換液。消化法傳代。透射電子顯微鏡下觀察：貼塊法，細胞多為合成型，肌絲減少，胞體縮小，細胞胞質內粗面內質網(wǎng)、游離核糖體、線粒體等亞細胞器逐漸增多。在生化性質方面，收縮型細胞比合成型細胞的β極密度脂蛋白（βVLDL）對其受體結合能力強，低密度脂蛋白（LDL）分解降低，即脂質容易在
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