【正文】 胞生物學(xué)研究隊伍，首次在國內(nèi)大規(guī)模協(xié)作、系統(tǒng)開展病毒與宿主細(xì)胞相互作用分子作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究，由此而構(gòu)建的平臺對對提升我國重大傳染性疾病的防治和自主創(chuàng)新能力具有重要作用。4. 人才上的可行性。以第一作者或通訊作者發(fā)表的文章包括Science. (IF:)，Nature (IF:) 2篇，Cell (IF:)2篇，Lancet（IF：28），Genes. Dev (IF:)，PNAS (IF:)7篇，Hepatology (IF:)2篇，Neuron (IF:)，Blood (IF:)，Mol Cell Proteomics (IF:)，Mol Cell (IF:)2篇，PLoS Biol. (IF:)，Nat Struct Mol Biol. (IF:)2篇，PLoS Pathog（IF: ），在國際上相應(yīng)領(lǐng)域具有一定的學(xué)術(shù)地位，具備獲得突破性進(jìn)展的能力。應(yīng)用以PCR為基礎(chǔ)的cDNA差減實驗和隨機(jī)基因敲除調(diào)控技術(shù)平臺（美國專利）篩選和定義新的宿主細(xì)胞因子。并且在分子作用機(jī)制和功能研究基礎(chǔ)上進(jìn)行結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究，同時在結(jié)構(gòu)解析后進(jìn)一步驗證功能。主要研究內(nèi)容：HIV1 輔助蛋白Vif與宿主蛋白相互作用及其蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)功能的研究。2． VifF1是否調(diào)節(jié)HIV1 Vif和Gag和/或Cul5在細(xì)胞質(zhì)膜的定位。⑹. VifF1是否是VifCul5ElonginBElonginC E3連接酶中獨一無二的和重要的組分。輔助蛋白Vpx是HIV/SIV病毒在人巨噬細(xì)胞內(nèi)復(fù)制所不可缺少的因子，有文獻(xiàn)證明它與宿主內(nèi)的DCAFDDBCul4A等蛋白相互作用形成E3連接酶發(fā)揮作用，最近研究證明HIV/SIV的Vpx蛋白能夠抑制宿主細(xì)胞內(nèi)的抗病毒因子SAMHD1，我們將進(jìn)一步確定Vpx抑制SAMHD1的分子作用機(jī)制，Vpx的重要功能區(qū)，SMAHD1的廣譜抗病毒作用，以及不同種屬SAMHD1的抗病毒作用。鑒定HIV輔助蛋白Vpr的靶向分子。VifF1因子對Vif的正確折疊具有輔助作用，圍繞HIV1 Vif，對其形成的含有CulElonginB、ElonginC或VifFA3G的蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)生物進(jìn)行重點研究，在體外共表達(dá)蛋白質(zhì)復(fù)合物，并進(jìn)行純化，結(jié)晶條件篩選，獲得蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu)，最終獲得Vif結(jié)構(gòu)方面的突破性研究，并在此基礎(chǔ)上闡述結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。承擔(dān)單位：吉林大學(xué) 清華大學(xué)課題負(fù)責(zé)人：于曉方 教授 吉林大學(xué)主要學(xué)術(shù)骨干：王冠軍 教授 吉林大學(xué) 楊茂君 教授 清華大學(xué) 崔久嵬 教授 吉林大學(xué)經(jīng)費比例：%課題2 宿主因子在艾滋病易感性、病程進(jìn)展及耐藥性發(fā)生中的作用。對HIV感染者（包括長期非進(jìn)展和進(jìn)展者）的CD4計數(shù)和病毒載量進(jìn)行定量，以確定宿主因子遺傳多態(tài)性與艾滋病毒感染、發(fā)病及疾病進(jìn)展之間的相關(guān)性。研究不同物種來源的APOBEC3超家族成員在其相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒中引入非致死性突變的能力，對病毒基因組突變頻率的影響；闡明APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力與HIV1耐藥性形成的相關(guān)性，為探索通過抑制APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力降低病毒變異和耐藥性發(fā)生頻率的新防治策略奠定理論基礎(chǔ)。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所 吉林大學(xué)課題負(fù)責(zé)人：岑 山 教 授 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所主要學(xué)術(shù)骨干：張文艷 副 教 授 吉林大學(xué)周金明 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所李曉宇 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所經(jīng)費比例：%課題3 宿主天然防御因子的分子作用機(jī)制及結(jié)構(gòu)生物學(xué)的研究主要研究內(nèi)容： 宿主天然防御因子Tetherin的抗病毒作用機(jī)制。鑒定病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細(xì)胞因子。⑴ Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。病毒蛋白與宿主天然防御因子相互作用的生物學(xué)功能。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所中國科學(xué)院生物物理研究所中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所課題負(fù)責(zé)人：郭 斐 研 究 員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所主要學(xué)術(shù)骨干：梁 臣 教 授 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所龔 勇 副研究員 中國科學(xué)院生物物理研究所韓燕星 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所經(jīng)費比例：%課題4 病毒感染潛伏期、重激活和病毒出芽的關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子研究主要研究內(nèi)容：阻斷TSG101對不同HIV病毒出芽的抑制作用和機(jī)理。TSG101與ESCRT復(fù)合物相互作用對細(xì)胞生理活動的影響。全基因組篩選HIV1感染潛伏期和重激活的關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子。7 篩選HIV1感染潛伏期和重激活的關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子。2 關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子對HIV1蛋白合成和降解調(diào)控機(jī)制。2 HIV1 蛋白與關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)。3 關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子對TNF通道的調(diào)節(jié)作用。課題目標(biāo)：1） 通過研究艾滋病毒與宿主細(xì)胞因子蛋白相互作用的機(jī)制研究，系統(tǒng)地篩選和鑒定在艾滋病毒感染潛伏期和重激活的關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子；2） 確定艾滋病毒與關(guān)鍵宿主細(xì)胞因子相互作用的功能和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)；3） 初步確認(rèn)宿主細(xì)胞因子蛋白質(zhì)在艾滋病毒感染潛伏期和重激活的分子機(jī)理和臨床特征；4） 為艾滋病感染潛伏期和重激活的新防治措施提供理論基礎(chǔ)；5） 通過本項目的實施，建立完善的病毒與宿主細(xì)胞相互作用的實驗研究體系。獲得穩(wěn)定表達(dá)VifF1 shRNA的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系，作為沉默VifF1以研究它的調(diào)節(jié)作用的重要平臺；確定VifF1對HIV1 Vif在細(xì)胞內(nèi)分布的影響；確定VifF1對HIV1 Vif和Gag和/或Cul5在細(xì)胞質(zhì)膜定位的影響；確定VifF1對HIV1 Vif與病毒基因組RNA相互作用的影響；確定Vpx蛋白抑制SAMHD1的機(jī)制；獲得一系列Vpx的突變體；獲得8種以上的目標(biāo)蛋白的表達(dá)；純化其中4種以上的目標(biāo)蛋白。第三年研究VifF1對VifCul5EloB/C E3連接酶裝配的調(diào)節(jié)；研究SAMHD1中決定其抗病毒作用的功能區(qū)；繼續(xù)研究Vpx與SAMHD1的相互作用機(jī)制；開展SAMHD1廣譜抗病毒作用的研究；繼續(xù)研究Vpr分子中行使不同功能的功能區(qū)；對與Vpr特異性結(jié)合的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；繼續(xù)開展晶體優(yōu)化工作，并對于已經(jīng)獲得晶體的蛋白開展結(jié)構(gòu)解析工作。確定HIV1 Vif分子中與VifF1作用的功能區(qū)；確定VifF1分子中決定與Vif相互作用的功能區(qū)；確定SAMHD1對HIV及其它病毒的作用機(jī)理；確定Vpr分子中各個功能區(qū)的生物學(xué)功能；確定新的病毒因子的生物學(xué)功能；共完成4種以上目標(biāo)蛋白的晶體結(jié)構(gòu)研究；爭取完成12種目標(biāo)蛋白的機(jī)理研究。年度課題二 研究內(nèi)容課題二 預(yù)期目標(biāo)第一年1. 宿主因子遺傳多態(tài)性的研究。1) 確定宿主因子的遺傳多態(tài)性。1) 確定宿主因子遺傳多態(tài)性與艾滋病易感性及病程進(jìn)展性的關(guān)系。1) 明確宿主因子突變體的生物學(xué)功能及影響艾滋病易感性及病程進(jìn)展的分子機(jī)制。3. 研究APOBEC3G活性抑制劑對HIV1的突變能力和耐藥性發(fā)生的影響。2. 探索通過抑制APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力降低病毒變異和耐藥性發(fā)生頻率的新防治策略1) 確定以宿主因子遺傳多態(tài)性為基礎(chǔ)的HIV1易感分子標(biāo)志物。2. 病毒蛋白與宿主限制因子相互作用的生物學(xué)功能。各研究方向逐步開展工作，取得部分結(jié)果。2. 病毒蛋白與宿主限制因子相互作用的生物學(xué)功能。(1) Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。(2) Tetherin抑制HIV1病毒顆粒的細(xì)胞間傳播機(jī)制。(3)鑒定病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細(xì)胞因子。1） 初步明確宿主限制因子Tetherin抗病毒機(jī)制。2. 病毒蛋白與宿主限制因子相互作用的生物學(xué)功能。(1) Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。3）解析Vpu/Teyherin復(fù)合物結(jié)構(gòu)。(2) Tetherin抑制HIV1病毒顆粒的細(xì)胞間傳播機(jī)制。 (2) Vpu介導(dǎo)的CD4和Tetherin降解途徑的關(guān)系。(2) A3G及其復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析。；2. 得到艾滋病毒感染巨噬細(xì)胞/T細(xì)胞系統(tǒng)；3. 建立24個具有基因調(diào)控系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞/T細(xì)胞系。第五年；，研究艾滋病病毒致病機(jī)理和新防