【正文】 第五年；，研究艾滋病病毒致病機理和新防治措施。；2. 得到艾滋病毒感染巨噬細胞/T細胞系統(tǒng)；3. 建立24個具有基因調(diào)控系統(tǒng)的巨噬細胞/T細胞系。 (2) Vpu介導(dǎo)的CD4和Tetherin降解途徑的關(guān)系。3）解析Vpu/Teyherin復(fù)合物結(jié)構(gòu)。2. 病毒蛋白與宿主限制因子相互作用的生物學(xué)功能。(3)鑒定病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細胞因子。(1) Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。各研究方向逐步開展工作，取得部分結(jié)果。2. 探索通過抑制APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力降低病毒變異和耐藥性發(fā)生頻率的新防治策略1) 確定以宿主因子遺傳多態(tài)性為基礎(chǔ)的HIV1易感分子標(biāo)志物。1) 明確宿主因子突變體的生物學(xué)功能及影響艾滋病易感性及病程進展的分子機制。1) 確定宿主因子的遺傳多態(tài)性。確定HIV1 Vif分子中與VifF1作用的功能區(qū)；確定VifF1分子中決定與Vif相互作用的功能區(qū)；確定SAMHD1對HIV及其它病毒的作用機理；確定Vpr分子中各個功能區(qū)的生物學(xué)功能；確定新的病毒因子的生物學(xué)功能；共完成4種以上目標(biāo)蛋白的晶體結(jié)構(gòu)研究；爭取完成12種目標(biāo)蛋白的機理研究。獲得穩(wěn)定表達VifF1 shRNA的穩(wěn)定表達細胞系，作為沉默VifF1以研究它的調(diào)節(jié)作用的重要平臺；確定VifF1對HIV1 Vif在細胞內(nèi)分布的影響；確定VifF1對HIV1 Vif和Gag和/或Cul5在細胞質(zhì)膜定位的影響；確定VifF1對HIV1 Vif與病毒基因組RNA相互作用的影響；確定Vpx蛋白抑制SAMHD1的機制；獲得一系列Vpx的突變體；獲得8種以上的目標(biāo)蛋白的表達；純化其中4種以上的目標(biāo)蛋白。3 關(guān)鍵宿主細胞因子對TNF通道的調(diào)節(jié)作用。2 關(guān)鍵宿主細胞因子對HIV1蛋白合成和降解調(diào)控機制。全基因組篩選HIV1感染潛伏期和重激活的關(guān)鍵宿主細胞因子。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所中國科學(xué)院生物物理研究所中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所課題負責(zé)人：郭 斐 研 究 員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所主要學(xué)術(shù)骨干：梁 臣 教 授 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所龔 勇 副研究員 中國科學(xué)院生物物理研究所韓燕星 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所經(jīng)費比例：%課題4 病毒感染潛伏期、重激活和病毒出芽的關(guān)鍵宿主細胞因子研究主要研究內(nèi)容：阻斷TSG101對不同HIV病毒出芽的抑制作用和機理。⑴ Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。承擔(dān)單位：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所 吉林大學(xué)課題負責(zé)人：岑 山 教 授 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所主要學(xué)術(shù)骨干：張文艷 副 教 授 吉林大學(xué)周金明 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所李曉宇 副研究員 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所經(jīng)費比例：%課題3 宿主天然防御因子的分子作用機制及結(jié)構(gòu)生物學(xué)的研究主要研究內(nèi)容： 宿主天然防御因子Tetherin的抗病毒作用機制。對HIV感染者（包括長期非進展和進展者）的CD4計數(shù)和病毒載量進行定量，以確定宿主因子遺傳多態(tài)性與艾滋病毒感染、發(fā)病及疾病進展之間的相關(guān)性。VifF1因子對Vif的正確折疊具有輔助作用，圍繞HIV1 Vif，對其形成的含有CulElonginB、ElonginC或VifFA3G的蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)生物進行重點研究，在體外共表達蛋白質(zhì)復(fù)合物，并進行純化，結(jié)晶條件篩選，獲得蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu)，最終獲得Vif結(jié)構(gòu)方面的突破性研究，并在此基礎(chǔ)上闡述結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。輔助蛋白Vpx是HIV/SIV病毒在人巨噬細胞內(nèi)復(fù)制所不可缺少的因子，有文獻證明它與宿主內(nèi)的DCAFDDBCul4A等蛋白相互作用形成E3連接酶發(fā)揮作用，最近研究證明HIV/SIV的Vpx蛋白能夠抑制宿主細胞內(nèi)的抗病毒因子SAMHD1，我們將進一步確定Vpx抑制SAMHD1的分子作用機制，Vpx的重要功能區(qū)，SMAHD1的廣譜抗病毒作用，以及不同種屬SAMHD1的抗病毒作用。2． VifF1是否調(diào)節(jié)HIV1 Vif和Gag和/或Cul5在細胞質(zhì)膜的定位。并且在分子作用機制和功能研究基礎(chǔ)上進行結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究，同時在結(jié)構(gòu)解析后進一步驗證功能。以第一作者或通訊作者發(fā)表的文章包括Science. (IF:)，Nature (IF:) 2篇，Cell (IF:)2篇，Lancet（IF：28），Genes. Dev (IF:)，PNAS (IF:)7篇，Hepatology (IF:)2篇，Neuron (IF:)，Blood (IF:)，Mol Cell Proteomics (IF:)，Mol Cell (IF:)2篇，PLoS Biol. (IF:)，Nat Struct Mol Biol. (IF:)2篇，PLoS Pathog（IF: ），在國際上相應(yīng)領(lǐng)域具有一定的學(xué)術(shù)地位，具備獲得突破性進展的能力。本項目集中了國內(nèi)最強勢的分子病毒學(xué)、分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)與細胞生物學(xué)研究隊伍，首次在國內(nèi)大規(guī)模協(xié)作、系統(tǒng)開展病毒與宿主細胞相互作用分子作用機制的基礎(chǔ)研究，由此而構(gòu)建的平臺對對提升我國重大傳染性疾病的防治和自主創(chuàng)新能力具有重要作用。1應(yīng)用分子生物學(xué)手段，基于復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)，對結(jié)合位點中重要的氨基酸進行突變，檢測對其功能的影響。4. 應(yīng)用RNA干擾、免疫印跡和限制性蛋白水解法來判斷細胞內(nèi)蛋白的折疊，確定VifF1是否能夠誘導(dǎo)HIV1 Vif構(gòu)象變化，提高與Cul5ElonginBElonginC E3連接酶的結(jié)合。通過本項目的實施，培養(yǎng)一批高質(zhì)量博士后和研究生，扶植一批在病毒與宿主蛋白相互作用機制以及病毒蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)生物學(xué)與功能相結(jié)合研究領(lǐng)域的具有國際競爭力的優(yōu)秀中青年科學(xué)家和后備人才，建立一支結(jié)構(gòu)合理，具有攻堅能力的國際先進水平的研究隊伍。⑵篩選和鑒定宿主細胞內(nèi)關(guān)鍵細胞因子。2. APOBEC3超家族成員在逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組變異和耐藥性形成中的作用。體外單獨或共表達Vpx及其形成的含有DCAF1或DDB1的蛋白質(zhì)復(fù)合物，純化，結(jié)晶條件篩選，獲得蛋白質(zhì)復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)并解析。鑒定病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細胞因子。HIV的Vpu蛋白對Tetherin具有抑制作用，我們將具體確定Tetherin在細胞膜病毒裝配和出芽過程中的作用，進一步揭示Tetherin降低病毒感染性的作用機制，Tetherin在病毒感染后影響pDC的功能中的作用。HIV1 Vpu蛋白及形成的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的分子機制。主要研究內(nèi)容： 針對上述關(guān)鍵科學(xué)問題，擬開展以下研究：（一）系列HIV病毒蛋白與宿主蛋白相互作用及其蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的分子作用機制。HIV1 Vif蛋白及其蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的分子作用機制。HIV的Vpu蛋白能夠拮抗和抑制病毒顆粒釋放的Tetherin蛋白，盡管目前有一些前期結(jié)果，但仍存在同研究結(jié)果之間仍具有矛盾的結(jié)論，將進一步的證實Vpu和Tetherin之間相互作用與拮抗機制，Vpu結(jié)合Tetherin后在細胞內(nèi)的運轉(zhuǎn)過程，以及Vpu介導(dǎo)的CD4和Tetherin降解途徑的關(guān)系。宿主天然防御因子SAMHD1的抗病毒作用機制。Tetherin自身也可以泛素化，并且TrCP在Vpu拮抗Tetherin的過程中只有部分作用，在這個過程中應(yīng)該還有另外的E3連接酶。Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。研究不同物種來源的APOBEC3超家族成員在其相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒中引入非致死性突變的能力，對病毒基因組突變頻率的影響；闡明APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力與HIV1耐藥性形成的相關(guān)性，為探索通過抑制APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力降低病毒變異和耐藥性發(fā)生頻率的新防治策略奠定理論基礎(chǔ)。采用免疫共沉淀和改良的差減雜交等技術(shù)篩選和鑒定HIV輔助蛋白Vpr宿主細胞內(nèi)相應(yīng)的抗病毒因子。以發(fā)表高水平研究論文與申請專利的形成公布研究成果。5. 應(yīng)用RNA 干擾技術(shù)、蔗糖密度梯度離心結(jié)合免疫印跡等技術(shù)確定蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合與組成情況。結(jié)合晶體學(xué)和生物化學(xué)手段研究蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系，從而進一步闡明其功能和作用機理。3. 研究內(nèi)容的可行性。（四）創(chuàng)新性本項目主要研究內(nèi)容均是在前期原創(chuàng)性成果基礎(chǔ)上，針對目前國際研究熱點和難點設(shè)計，具有獲得重大突破性科學(xué)成果的能力與潛力。四個課題即相對獨立，又相互之間緊密聯(lián)系，