【正文】 phis paniculta lactone。以穿心蓮內(nèi)酯對照品制備標準液，計算回歸方程為：Y=，R2=。以穿心蓮莖干粉末為原料，改變超聲振蕩功率、時間、料液比、不同溶劑、反應(yīng)溫度等單因素變量，提取液經(jīng)配制后測量吸光度值，選定三水平后進行正交試驗。 超聲波。 absorbance目 錄1 引 言 1 1 12 實驗材料與儀器 2 2 2 3 33 實驗方法 4 4 5 標準曲線的繪制4 結(jié)果與討論 8 8 135 總結(jié)與展望 14 14 14參考文獻 15致 謝 17湖州師范學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文1. 引言 穿心蓮簡介 穿心蓮穿心蓮Andrograph is paniculata (B urm. f.) Nees為穿心蓮屬植物,別名一見喜、斬蛇草、苦草、四方草、印度草[1],主要產(chǎn)于廣東、福建等地。 穿心蓮內(nèi)酯的藥理活性穿心蓮內(nèi)酯又稱為穿心蓮乙素，化學(xué)式為C20H30O5，是穿心蓮中的主要有效成分之一[4],在穿心蓮葉中含量高達1. 84%[5]。Kapil等[8]發(fā)現(xiàn), 給小鼠腹腔注射穿心蓮內(nèi)酯,可對抗CCltBHP引起的肝毒性作用, 顯著抑制丙二醛形成,具有明顯的保肝利膽效果。穿心蓮內(nèi)酯具有抗心肌缺血和抗缺血再灌注損傷、保護血管內(nèi)皮細胞、抗血小板聚集、調(diào)脂、降血壓、抗動脈粥樣硬化、預(yù)防血管形成術(shù)后再狹窄和改善血液流變性等作用。所以穿心蓮內(nèi)酯使用也要慎重，穿心蓮內(nèi)酯注射液屬于低毒藥品[14], 短期大劑量給藥對動物的肝、腎可造成一定程度的損傷，長期毒性試驗可以驗證穿心蓮內(nèi)酯可致腎小管損傷。超聲協(xié)助浸取的三大理論依據(jù)是超聲波熱學(xué)機理、超聲波機械機制和空化作用。這相當于將金屬熔漿放入液氮中的急劇冷卻速度。 超聲波協(xié)助萃取的特點：① 無需高溫，在40℃～50℃水溫超聲波萃取，不會破壞中藥材中某些熱不穩(wěn)定、易水解的有效成分。⑤ 能耗低。提取槽是盛放提取物系的容器，一般由不銹鋼制成，其內(nèi)安裝有加熱及控溫裝置，底部粘接超聲波換能器。 2. 實驗材料與儀器 實驗材料風干的穿心蓮莖干：實驗所用的穿心蓮來自于杭州市中藥飲片廠。⑷ 75%的乙醇溶液：取實驗室的無水乙醇75 mL，放入100 mL容量瓶中，向容量瓶中加水至刻度線，搖勻后備用。但是采用這種方式進行試驗是，當因素與位級增加時，試驗次數(shù)急劇增加。23型全面試驗，即因素為A、B、C各取2水平，共需進行23=8次 ，如表31所示。利用這一特性可以對無機化合物、有機化合物及生物大分子進行定性和定量分析，繼而出出現(xiàn)了紫外可見分光光度計。但是為了提高測定的靈敏度，需要準確控制顯色時間和顯色劑用量[16]。~3%（w/v），脫色時間一般為30~60min，使用溫度在75~80℃比較好。結(jié)果見圖31。⑵ 測量：精密量取標準液0、,分別加入10mL容量瓶中，依次標號7。 單因素試驗 取穿心蓮的干燥莖干為原料，挑去雜質(zhì)，粉碎后備用。震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性炭30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。計算穿心蓮內(nèi)酯的相對含量。⑸ 以反應(yīng)溫度為單因素變量精確稱取5g穿心蓮粉6份，分別加入250mL錐形瓶，再加入50mL 75%乙醇，設(shè)置超聲功率100瓦，溫度設(shè)置為450、560、65℃，置于超聲波清洗器中震蕩20min，震蕩結(jié)束后依次抽濾，再加入活性碳30℃水浴10min脫色，抽濾，取濾液標號，將所有濾液用75%乙醇定容至250mL。表32 正交試驗因子水平表因素Factors水平A超聲震蕩時間/minB超聲功率/wC料液比/mLD提取溶劑1401001:2075%乙醇2601201:25乙酸乙酯3801401:30石油醚 驗證實驗精確稱取5g穿心蓮粉3份，分別加入250mL錐形瓶，設(shè)置溫度為60℃，超聲功率140w，超聲震蕩60min，依次用真空抽濾，再加入活性炭，30℃水浴10min脫色，抽濾，將濾液標號并用75%乙醇定容至250mL。⑶顯色反應(yīng)：① 亞硝酰鐵氰化鈉堿液反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許放在放在比色板上（白色具穴磁板）上，%亞硝酰鐵氰化鈉溶液2滴，10%氫氧化鈉溶液2滴。見圖41。 以不同溶劑為單因素變量表45 不同溶劑對穿心蓮內(nèi)酯提取的影響不同溶劑水75%乙醇乙酸乙酯石油醚吸光值(Abs) 圖45 不同溶劑對穿心蓮內(nèi)酯提取的影響由表格和圖片可知，用乙酸乙酯提取時穿心蓮內(nèi)酯濃度最高，75%乙醇和石油醚次之。表48 驗證試驗結(jié)果吸光值(Abs)平均吸光值(Abs)123 實驗結(jié)果討論 單因素實驗結(jié)果討論⑴ 超聲振蕩時間的不同在其他條件相同的情況下，改變超聲振蕩的時間，設(shè)置6個變量，分別是60、80、100、120min，提取液抽濾后經(jīng)配制，測得不同吸光值。通過圖43和表43可以看出在80～140w這一區(qū)域中，吸光度一直是上升趨勢，在140w處達到最高后吸光度下降得非常快，從數(shù)據(jù)可以看出。選擇了料液比分別為1:1:1:11:1:21:30，其他條件不變，超聲振蕩后提取液抽濾后經(jīng)配制，測得不同吸光值，結(jié)果可見表44和圖44。⑷ 不同溶劑 在其他條件相同的情況下，改變提取溶劑，分別采用了水、75%乙醇、乙酸乙酯和石油醚來提取穿心蓮內(nèi)酯。⑸ 反應(yīng)溫度不同 在其他條件相同的情況下，改變反應(yīng)溫度，分別設(shè)置450、560、65℃，反應(yīng)結(jié)束后提取液經(jīng)配制測得相應(yīng)吸光度值，結(jié)果見表46和圖46。極差R大，意味著它的三個水平對于實驗結(jié)果造成的影響越大，從而可按極差的大小決定因素的主次順序：D B A C。經(jīng)過驗證實驗。同時，對超聲振蕩時間的試驗中，選定了60、80min作為正交的三個水平；對超聲功率的試驗中，選定了100、1140w作為參考；在料液比的試驗中，選定了1:20,、1:21:30作為參考；在不同溶劑的單因素試驗中，選中了75%乙醇、乙酸乙酯、石油醚作為提取溶劑。近年來，對穿心蓮的藥用價值的研究日益增多，在臨床方面的研究進展迅速。穿心蓮內(nèi)酯具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤作用和免疫作用、保肝利丹、解熱抗炎等作用。利用Michael 加成、羥基上的反應(yīng)、分子內(nèi)環(huán)化、分子內(nèi)酯環(huán)化等反應(yīng)進行結(jié)構(gòu)修飾取得了新的研究進展[23]。還有感謝和我一起做實驗的李鉷育同學(xué)對我的支持和幫助！在此，謹向所有指導(dǎo)和幫助過我的老師、同學(xué)表示衷心的感謝，他們的支持與鼓勵是我前進的動力！方梅芬2012年5月于湖州師范學(xué)院18