【正文】 .. 27 參考文獻 ………………………………………………………….…………………………………... 28 . xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 1 頁 第 1 章 緒論 厚樸的研究概述 形態(tài)及習(xí)性 厚樸 拉丁名為 Magnolia officinalis Wils，中文名厚樸，拉丁科名為Magnoliaceae， 中文科名為木蘭科，其實物如圖 11 所示。 本論文以 正交試驗設(shè)計為工具，以浸膏得率作為質(zhì)量指標，考察 醇法提取 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的提取工藝條件，著重 探討 乙醇濃度、回流時間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對浸膏得率的影響， 結(jié)果表明其 較優(yōu)的提取工藝條件為提取時間120min，乙醇濃度 70%， 乙醇 用量 6 倍，提取次數(shù) 3 次，浸膏得率可達到 %， 同時 借助極差分析、方差分析等實驗數(shù)據(jù)分析手段，得到 各因素的主次關(guān)系為 乙醇濃度 ﹥ 提取次數(shù) ﹥ 乙醇用量 ﹥ 提取時間 。 （ 2 周 ） 第四部分 實 驗過程，進行實驗 。 學(xué)生應(yīng)完成的任務(wù) （ 1）查閱文獻資料，撰寫綜述部分； （ 2）列出實驗方案及所需的藥品，試劑并擬定實驗方案； ____（ 3）進行實驗，記錄實驗數(shù)據(jù)； ____（ 4）翻譯一篇與實驗內(nèi)容相關(guān)的英文文獻； ____（ 5）結(jié)果分析，撰寫論文。本論文以 正交試驗設(shè)計為工具，以浸膏得率作為質(zhì)量指標，考察 醇法提取 厚樸中厚樸酚與和厚樸酚的提取工藝條件，著重研究乙醇濃度、回流時間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對浸膏得率的影響，得到其較優(yōu)的提取工藝條件，為工業(yè)化提取工藝的設(shè)計提供理論依據(jù)。 （ 1 周 ） 第三部分 準 備實驗儀器設(shè)備，藥材，試劑，藥品 。 提取中藥中有效成分的傳統(tǒng)方法主要有 堿提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法， 堿提樹脂工藝，超臨界 CO2 萃取等，其中乙醇提取法由于價廉、污染小、適合工業(yè)生產(chǎn)等特點而被廣泛使用。 關(guān)鍵詞： 厚樸酚，提取工藝；正交試驗法；醇提法?；ㄅc葉同時開放，單生枝頂，白色，芳香，直徑 1520 厘米；花被片 912，厚肉質(zhì)，外輪長圓狀倒卵形，長 810 厘米，內(nèi)兩輪匙形，長 厘米；，雄蕊多數(shù)，花絲紅色；心皮多數(shù)。果期 910 月，聚合果長橢圓狀卵形，長912 厘米，直徑 厘米，心皮排列緊密，成熟時木質(zhì)，頂端有彎尖頭；種子三角狀倒卵形，外種皮紅色。喜光且喜涼爽、濕潤、多云霧、相對濕度大的氣候環(huán)境。 分布區(qū)年平均溫 1420℃ ， 1 月平均溫 39℃ ，年降水量 8001400 毫米。根系發(fā)達，生長快，萌生力強。厚樸是木蘭屬中分布較廣、而且較原始的種類，對研究東亞和北美的植物區(qū)系及木蘭科分類有科學(xué)意義。 性狀鑒別 及顯微鑒別 1． 形狀鑒別 厚樸外形為干皮，呈卷筒狀或皮塊狀 ，如圖 所示， 長約 1030 cm，厚 cm，根皮呈單筒狀或不規(guī)則塊片，枝皮呈單筒狀，厚 cm，表面粗糙，顏色外表面灰棕色或灰褐色，表面較平滑。外表面灰棕色或灰褐色，粗糙，有時呈鱗片狀，較易剝落，有明顯橢圓形皮孔和縱皺紋，刮去粗皮者顯黃棕色。根皮（根樸）呈單筒狀或不規(guī)則塊片；有的彎曲似雞腸，習(xí)稱 “雞腸樸 ”。 2． 顯微鑒別 厚樸橫切面為落皮層黃棕色，由外向內(nèi)分別是老的木栓層、木栓形成層、栓內(nèi)層（石細胞環(huán)）和皮層薄壁細胞及皮層石細胞；有時新周皮于栓內(nèi)層（石細胞環(huán)）發(fā)生，無老皮層。薄壁細胞含草酸鈣棒狀小結(jié)晶或方晶。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，厚樸有中樞鎮(zhèn)靜、抗痙攣及抗鏈球菌等多方面藥理作用，并證明 這些作用的有效成分為厚樸酚和 β桉油醇。草酸鈣方晶較少，直徑 ，棒狀結(jié)晶較多，長 .。同時他們發(fā)現(xiàn)同一厚樸株，枝皮的揮發(fā)油含量最高，枝、干、根皮依次降低；不同樹齡問，五年生與二十年生厚樸的揮發(fā)油含量較高，十年生與十五年生的含量較低。厚樸酚與和厚樸 酚是一對同分異構(gòu)體，由兩分子苯丙素通過 33’碳原子相連，主要從厚樸的樹皮、根皮中得到，也有從葉中獲得的 [13]，還有厚樸酚與和厚樸酚結(jié)構(gòu)類似的化合物及二聚體，如厚樸三醇 B（ Magnatriol B）、厚樸醛 B， D（ Magnoldehyde B， D）、單菇木脂素、木蘭醌、 4Omethylhonokiol， 3Omethylmagnolol、 magnaldehyde B、magnolignan A 和 magnolignan C等 [14]。其余生物堿類成分主要為厚樸堿（ Mcurarine），此外還有木蘭花堿（ Salicifoline）、武當木蘭堿（ magnosprengerine）、白蘭花堿（ michelarbine）、木蘭箭毒堿（ magnocurarine）等 [12， 14]。厚樸活性成分厚樸酚有顯著抑制胃酸分泌和抗?jié)冏饔谩：駱阋掖继崛∥?5 g／ kg、 15 g／ kg均有明顯鎮(zhèn)痛作用，明顯減少乙酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性升高，并明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫及角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹。另外，抑制溶酶體酶的釋放也可能是厚樸酚抗炎作用機制之一。和厚樸酚具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮作用。在解除結(jié)扎后的 10分鐘再灌注，室性心律失常的發(fā)生也大為減少。 厚樸酚與和厚樸 酚具有明顯抗真菌作用。在藥物、對致齲菌產(chǎn)酸能力的影響研究中發(fā)現(xiàn)，厚樸酚及和厚樸 酚對致齲菌產(chǎn)酸均有一定的抑制作用，且隨著藥物濃度增加，抑制作用增強 [24] 。 6． 抗腫瘤作用 厚樸酚與和厚樸酚在體內(nèi)和體外均被發(fā)現(xiàn)可以抑制新生血管及腫瘤生長，并且在有效劑量范圍內(nèi)能夠被宿主很好的耐受，其作用機制是在人的內(nèi)皮細胞通過干擾血管內(nèi)皮生長因子受體 2（ VEGFR2）的磷酸化來抑制血管生成 [27,28]。 Fong等通過在體外使用人早幼粒白血病細胞系 HL60進行實驗觀察到和厚樸酚在小劑量的 l， 25二羥維生素 D3和全反式維甲酸的協(xié)同下可以作為細胞分化的強化因子，增強人早幼粒白血病細胞系HL60細胞的分化作用 [29] 。特別是變形鏈球菌有更加顯著的抗菌作用，其抗菌活性強于典型的抗菌生物堿，而且 [6]。 3． 厚樸治慢性咽炎 健脾行氣，化痰散結(jié)，養(yǎng)陰利咽。 4． 厚樸湯治療頸淋巴結(jié)腫大 頸淋巴結(jié)腫大，多由氣、郁、痰、火互結(jié)所致。結(jié)果為治療組平均排氣時間為（ 177。） h、（ 177。 6． 厚樸三物湯治療腸粘連 腸粘連是腹部手術(shù)后的常見并發(fā)癥，中醫(yī)把腸粘連歸入腹痛腹脹范疇，病機為 腑氣不通，氣血阻滯。如此則腑易通，氣乃順，血得和而諸癥愈。加入 HCl 溶液調(diào)至 pH23，靜置，收集析出的沉淀，用蒸餾水洗滌沉淀物至 pH67。近年來，物理方法，如色譜、逆流分溶進展很快，縮短了對中藥有效成分研究的周期。 1． 溶劑提取法的原理 中藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。生物堿是親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加大了極性，就變成了親水性化合物。但有時又可能相互生成難溶性化合物，改變了欲提 取成分的溶解性能而提取不出。 （ 1） 浸漬法 浸漬法是將處理過的藥材，用適當?shù)娜軇┰诔鼗驕責幔?6080℃ ）的情況下浸漬一溶出七種成分。當溶劑滲進要分溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶劑或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴散能較好地進行，故浸出效率較高，浸出液較澄清，但溶劑消耗量大、費時長、操作仍嫌麻煩。但受熱易破壞的成分不宜用此法，且溶劑消耗量仍大，操作亦麻煩。 3． 水提取法 取厚樸粗粉，加 510倍量的水，揮發(fā)揮發(fā)油后用 NaOH調(diào)成 mol結(jié)果表明此方法厚樸酚含量高，厚樸浸膏收率高，是傳統(tǒng)的工業(yè)提取方法 [18]。L1HCl溶液調(diào) pH 至 7。一定時間后，有效成分通過分離柱降壓解析，得淡黃色膏狀物，總厚樸酚提取率為80%。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 14 頁 研究意義 中藥厚樸為木蘭科木蘭屬喬木 (Magnolia officinalis Rehd． et Wils)凹葉厚樸 (Magnolia officinalis Rehd． et Wils． var． biloba Rehd． et Wil)的干燥樹皮、根皮以及枝皮， 具有行氣燥濕、降逆平喘之功效，用于脘腹脹痛、宿食不消、嘔吐瀉痢、氣逆喘咳等功效。并且 可為深入研究厚樸的藥理活性提供物質(zhì)基礎(chǔ)， 對于厚樸藥材有效成分的提取和進一步深入研究具有一定的指導(dǎo)意義。經(jīng)過 80 目篩， 40 目篩， 20 目篩篩選。先加入 95%乙醇xml，再加 入蒸餾水至刻度線，混合均勻。 加 熱回流 m 次，每次 n h，合并提取液。 表 因 素水平表 水平 因素 A 提取時間（ min） B 乙醇濃度（ %） C 乙醇用量（倍） D 提取次數(shù) 1 60 65 6 1 2 120 70 8 2 3 180 75 10 3 表 厚樸 正交實驗設(shè)計 實驗號 因素 A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 鑒定 薄層層析過程如下，結(jié)晶品的甲醉液在硅膠 G 板上點樣，分別用苯 甲醇（ 27： 1）和石泊醚 乙酸乙酯（ 9： l）展開，碘液顯色。 結(jié)果與討論 實驗 結(jié)果 正交實驗結(jié)果如表 所示 。 ki=Ki／ s，其中 s 為任一列上各水平出現(xiàn)的次數(shù)，所以 ki 表示任一列上因素取水平 i時所得試驗結(jié)果的算術(shù)平均值。例如，在第一列上，最大的 ki 為 k2（ ），最小的 ki為 k1（ ），所以 R==，或 R==。各因素優(yōu)水平的確定與試驗指標有關(guān)，若指標越大越好，則應(yīng)選取指標較大的水平，即各列 Ki 中最大的那個值對應(yīng)的水平；反之，若指標越小越好，則應(yīng)選取使指標小的那個水平。例如，本實驗的 A 因素（提取時間）的重要性排在末尾，則可以考慮采用水平 1 的提取時間， xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 20 頁 即 60 分鐘，縮短了提取時間降低了能耗，即方案組合為 A1B2C1D3，可以做實驗驗證其浸膏得率，確定是否為較優(yōu)方案。 表 驗證試驗設(shè)計表 實驗號 因素 實驗結(jié)果 A B C D 浸膏得率（ %） 1 2 3 1 2 2 2 2 1 3 3 1 2 1 3 通過實驗結(jié)果可以得到，如預(yù)期分析的一樣， A2B2C1D3 為最優(yōu)方案， A1B2C1D3為較優(yōu)方案。 浸膏得率對乙醇濃度做趨勢圖，如圖 所示。 xxxxxx 大學(xué)本科 畢業(yè)論文 第 22 頁 浸膏得率對提取次數(shù)做趨勢圖，如圖 所示?？紤]降低過篩目數(shù)是否可以解決這一問題，于是設(shè)計實驗，用同一厚樸原料分別過 20 目、 40 目、 80 目的篩，選正交設(shè)計表中 1 號試驗的實驗方案進行對比試驗，如表 所示。植物的許多部位都含有葉綠素，葉綠素在醇提過程中，會被大量的提取出來，使抽濾液變?yōu)榫G色干擾試驗，并且會使實驗結(jié)果不準確。尤其在需要回流多次的時候，在第二次回流時，由于是使用前一次的濾渣進行回流，因此藥材很粘稠，需要加沸石。 4． 抽濾過后的濾液由于時間不足，有需要過夜才旋蒸的，在旋蒸前要加熱下錐形瓶，使其中由于溫度降低析出的厚樸酚重新溶解，再轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中進行旋蒸，避免浸膏的損失。因此，需要尋找和擴大新的藥用資源。厚樸是我國特有的珍貴中藥材，對其栽培技術(shù)研究很少，為了保護和發(fā)展厚樸資源，建議要把厚樸的科學(xué)研究作為中藥資源開發(fā)工作的一項重要措施來抓，近期內(nèi)加強厚樸生產(chǎn)技術(shù)研究，加強厚樸種源保護和收集，加強以利用為主的綜合開發(fā)研究以發(fā)揮厚樸的多種經(jīng)濟效益。 醇提取厚樸中的厚樸酚與和厚樸酚，工藝簡單，價廉， 可 作為 厚樸有效成分工業(yè)化提取 的提取方法。 用于提取傳統(tǒng)中藥厚樸中厚樸酚與和厚樸酚，有多種方法，如 堿 提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法， 堿提樹脂工藝，超臨界 CO2 萃取等