酶促反應動力學 (2)-預覽頁
【正文】 min1 、 當 t=3min時，可以求得 mol/l xS=6 % mol/l ?k? ? ???S? ? ? ? 70 106%6 ????? SP （ 2）當 [S0]為 1 106mol/l時，仍可視為一級反應， ∴ t=3 min時，同樣可求得 xS=6 % mol/l mol/l ? ? ???S? ? ? ? 80 106%6 ????? SP3）據(jù) 得 mol/l如果酶的專一性不高，可催化幾種底物發(fā)生反應時， km值最小的就表示酶與這一底物的親和力最大，反之，則最小。 ⑤ Km值可以幫助推斷某一代謝反應的方向和途徑。 Vmax與 K3成線性關系，而直線的斜率為 K3。但直接應用MichaelisMenten方程求取動力學參數(shù)所遇到的主要困難在于該方程為非線性方程。 反應速率測定稍有誤差，其倒數(shù)值誤差必將擴大，特別是在低濃度基質(zhì)測定時，引起的誤差更大，這樣將影響直線斜率，影響 rmax及 Km值 的測定。 上式可改寫為 : ? ?? ?? ? ? ?MM KrtSSKSStm a x00 1l o ??????? ????MK1?MKrmax上式也是直線方程式，斜率為 ，直線交點于縱坐標 ，與橫坐標 交于 。 抑制作用分為可逆抑制與不可逆抑制兩大類 。 例如重金屬離子 Hg2+”、Pb2+”等對木瓜蛋白酶 、 菠蘿蛋白酶的抑制都是不可逆抑制 。 在琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸為延胡索酸時 ， 丙二酸是其競爭性抑制劑 。 競爭性抑制動力學的主要特點： 競爭性抑制劑的抑制程度取決于 [S]， [I]， Km和KmI，當 [I]增加，或 KI減小，都會使 KmI值增大，使酶與底物的結(jié)合能力下降，活性復合物減少，因而使底物反應速率下降。 當酶的活性部位與一個抑制劑分子相結(jié)合時， KmI與 [I]的關系為一直線，可稱為線型競爭抑制；如果酶的活性部位與兩個以上的抑制劑分子相結(jié)合，則與的關系為一拋物線，可稱為拋物線型競爭抑制。 此時抑制劑既可與游離的酶相結(jié)合 ， 也可以與復合物 ES相結(jié)合 ， 生成了底物 —酶 — 抑制劑的復合物 SEI。 非競爭性抑制的普遍機理式可表示為 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?S E IEIESEE ????0? ? ? ? ? ? 0???dtSE IddtEIddtESd? ? ? ?? ?? ?? ?? ?? ?SKSrSKKISrESkrmImIsI ???????????????? ? m a x,m a x21式中： 為非競爭性抑制時的最大反應速率 . max,Ir對非競爭性抑制，由于抑制劑的作用使最大反應速率降 低了 倍，并且增加 [I]、 KI減小都使其抑制程 度增加。 如果 SEI也能分解為產(chǎn)物 ， 同樣可整理 出形式與 類似的速率方程式 ， 所不同的只 是 rI,max所包含的參數(shù)上 。從這個意義上說，競爭性抑制作用是可逆的，非競爭性抑制作用是不可逆的。在使用時酶的失活規(guī)律對于酶催化反應過程的設計和控制都是十分重要的。 在不同溫度下反復測定，即可得到一條曲線。 這些曲線反映了酶的真正熱穩(wěn)定性。 該模型又稱為一級失活模型。 因此 ? ? ? ? ? ?DEE t ??0? ? ? ? ? ?? ?? ?tkkkkkk EE rddrrdt ????? e x p0? ? ? ? ? ?tkEE dt ?? e x p0 多數(shù)酶的熱失活服從上式 ， kd可稱為衰變常數(shù) ，單位為 。 kd、td和 之間的關系為 ? ? 1?時間21t21t212ln1ttkdd ??二、反應時酶的熱失活動力學 反應時酶的穩(wěn)定性將直接關系到酶的使用壽命 ， 因而特別重要 。這時因為當溫度升高到某一值，酶的熱失活速率也在加速，致使活性酶的量在減少，因而反應速率下降，最終為 0。 對于底物濃度的變化對酶穩(wěn)定性的影響，提出了下述
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