pcr引物設(shè)計黃金原則-預(yù)覽頁
【正文】 . 引物5′ 端和中間△G值應(yīng)該相對較高，而3′ 端△G值較低。（不同位置的△G值可以用Oligo 6軟件進(jìn)行分析）′端可以修飾，而3′端不可修飾。 引物的延伸是從3′ 端開始的，不能進(jìn)行任何修飾。用有關(guān)軟件（比如RNAstructure）可以預(yù)測估計mRNA的穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)，有助于選擇模板。 11. 引物應(yīng)具有特異性。有的模板本身條件比較困難，例如GC含量偏高或偏低，導(dǎo)致找不到各種指標(biāo)都十分合適的引物；用作克隆目的的PCR，因為產(chǎn)物序列相對固定，引物設(shè)計的選擇自由度較低。 3）GC=3080%. 4)339。 而且引物設(shè)計時應(yīng)該考慮到引物要有不受基因組DNA污染影響的能力，即引物應(yīng)該跨外顯子，最好是引物能跨外顯子的接頭區(qū)，這樣可以更有效的不受基因組DNA污染的影響。 關(guān)于BLAST的作用應(yīng)該是通過比對，發(fā)現(xiàn)你所設(shè)計的這個引物，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并在GENEBANK中公開的不物種基因序列當(dāng)中，除了和你的目標(biāo)基因之外，還有沒有和其他物種或其他序列當(dāng)中存在相同的序列，如和你的目標(biāo)序列之外的序列相同的序列，則可能擴(kuò)出其他序列的產(chǎn)物，那么這個引物的特異性就很差，從
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1