pcr引物設計黃金原則-預覽頁
【正文】 . 引物5′ 端和中間△G值應該相對較高，而3′ 端△G值較低。（不同位置的△G值可以用Oligo 6軟件進行分析）′端可以修飾，而3′端不可修飾。 引物的延伸是從3′ 端開始的，不能進行任何修飾。用有關軟件（比如RNAstructure）可以預測估計mRNA的穩(wěn)定二級結構，有助于選擇模板。 11. 引物應具有特異性。有的模板本身條件比較困難，例如GC含量偏高或偏低，導致找不到各種指標都十分合適的引物；用作克隆目的的PCR，因為產物序列相對固定，引物設計的選擇自由度較低。 3）GC=3080%. 4)339。 而且引物設計時應該考慮到引物要有不受基因組DNA污染影響的能力，即引物應該跨外顯子，最好是引物能跨外顯子的接頭區(qū)，這樣可以更有效的不受基因組DNA污染的影響。 關于BLAST的作用應該是通過比對，發(fā)現你所設計的這個引物，在已經發(fā)現并在GENEBANK中公開的不物種基因序列當中，除了和你的目標基因之外，還有沒有和其他物種或其他序列當中存在相同的序列，如和你的目標序列之外的序列相同的序列，則可能擴出其他序列的產物，那么這個引物的特異性就很差，從
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