抗抑郁藥r-托莫西汀中間體s-3-氯-1-苯丙醇的生物合成-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 tion rate(mmol/(L.h))Yield or e.e.(%)Sub st ra t e co n ce n t ra t i o n (m m o l / L ) Y i e l d e . e .0 .02 .04 .06 .08 .01 0 .01 2 .0 I n i t i a l re a ct i o n ra t e F i n a l p ro d u ct co n ce n t ra t i o n 單一水相體系中的不對(duì)稱還原 圖 5 細(xì)胞濃度對(duì)不對(duì)稱還原的影響 圖 6 不對(duì)稱還原的時(shí)間進(jìn)程 產(chǎn)率維持恒定的原因：（ 1）反應(yīng)達(dá)到平衡；（ 2）體系中細(xì)胞死亡，反應(yīng)不再進(jìn)行；（ 3）底物或產(chǎn)物的毒性導(dǎo)致細(xì)胞失去催化能力；（ 4）體系中存在產(chǎn)物抑制。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 菌株的篩選與鑒定 單一水相體系中的不對(duì)稱還原 水 /有機(jī)溶劑兩相體系中的不對(duì)稱還原 菌株的篩選與鑒定 ?菌株的篩選 菌株 產(chǎn)率 (%) . (%) 優(yōu)勢(shì)產(chǎn)物 漢遜德巴利酵母 S Sigma面包酵母 S 畢赤酵母 NA NA 酵母 FU5 S 高活性干酵母 S 釀酒高活性干酵母 S 表 1 不對(duì)稱還原酵母菌株的篩選 由表 1可知，同等條件下，酵母 FU5菌株對(duì)底物 3氯 1苯丙酮具有最佳的還原產(chǎn)率和對(duì)映體過(guò)量率。 因此，利用生物法進(jìn)行 (S)3氯 1苯丙醇的制備，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。而且使用微生物全細(xì)胞作為催化劑還可省去酶純化與輔酶添加費(fèi)用。 論文創(chuàng)新點(diǎn) ?篩選出一株催化性能優(yōu)異的酵母，與其它相關(guān)研究進(jìn)行比較，本研究可以在實(shí)現(xiàn)同等對(duì)映體過(guò)量率的情況下，得到更高的時(shí)空產(chǎn)率； ?在水 /有機(jī)溶劑體系和含離子液體的水 /有機(jī)溶劑體系中不對(duì)稱還原得到 (S)3氯 1苯丙醇，未見(jiàn)報(bào)道； ?研究了單一水相體系和兩相體系不同條件對(duì)還原過(guò)程中細(xì)胞膜流動(dòng)性、完整性等的影響，初步探索了細(xì)胞生物學(xué)特性與不對(duì)稱還原反應(yīng)的關(guān)系。 圖 1 酵母基因組電泳圖 圖 2 酵母 ITS序列電泳圖 菌株的篩選與鑒定 ?構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) 進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建以剛果錐蟲(chóng)（ Trypanosoma congolense） ITS序列作為外類群，以擔(dān)子 酵母（ Basidiomycete yeast ） ITS序列作為參照，使用 NJ算法，并對(duì)進(jìn)化樹(shù)進(jìn)行 1000次可信度檢驗(yàn)。 0 3 6 9 12 150 .02 0 .04 0 .06 0 .08 0 .01 0 0 .0Yield (%)Prod u ct co n ce n t ra t i o n (m m o l / L ) Y i e l d0 .01 .02 .03 .04 .05 .06 .07 .0 I n i t i a l re a ct i o n ra t eInitial reaction rate(mmol/(L.h))單一水相體系中的不對(duì)稱還原 ?在體系中加入環(huán)糊精、表面活性劑等添加物降低體系中的產(chǎn)物濃度，并考察加入這些物質(zhì)對(duì)反應(yīng)的影響。 水 /有機(jī)溶劑兩相體系中的不對(duì)稱還原 ? PI對(duì)酵母細(xì)胞染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯強(qiáng)熒光和弱熒光的酵母?jìng)€(gè)數(shù)，衡量酵母細(xì)胞膜完整性。但離子液體會(huì)對(duì)還原產(chǎn)率產(chǎn)生不利影響。 ?在水相體系中，適當(dāng)濃度的添加物（ Tween 80和 β環(huán)糊精）可提高產(chǎn)率：當(dāng)反應(yīng)體系中 Tween 80濃度為 mmol/L， β環(huán)糊精濃度為 mmol/L時(shí)，產(chǎn)率從對(duì)照組的 %分別提高到 %和 %。相比于單一水相體系，兩相體系可使底物濃度和產(chǎn)率得到大幅提
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