【正文】 3. 明確在針刺的雙向調(diào)節(jié)效應中的相關生物活性物質(zhì)的變化和相關的分子生物學基礎。 5. 完成傷害性感受器與針刺雙向調(diào)節(jié)作用的關系研究、電針雙向調(diào)節(jié)中傷害性感 受器功能狀態(tài)與初級中樞關系的研究。 2． 開展內(nèi)臟病變和穴位敏化相關的脊髓機制。 5． 補充整體研究計劃所未完成的所有內(nèi)容，整理全部的研究數(shù)據(jù)，提煉和整合研究結(jié)果，闡明針灸雙向調(diào)節(jié)的規(guī)律及生物學基礎。 2． 揭 示功能性腸病疾病動物模型穴位敏化的中樞敏化機制。 5． 完成數(shù)據(jù)匯總 、項目驗收結(jié)題工作 一、研究內(nèi)容 我們提出的研究假說是：針灸具有“調(diào)和陰陽”的雙向調(diào)節(jié)效應。機體和靶器官狀態(tài) 是選穴的重要依據(jù)，穴位的組合和刺激方法是決定療效的關鍵因素。 主要研究以下 3 方面的內(nèi)容。也說明穴位的功能和機體的機能狀態(tài)密切相關。在此基礎上，用蛇毒選擇性破壞坐骨神經(jīng)的 A類纖維，或用辣椒素選擇性破壞坐骨神經(jīng)的 C類纖維 （或用 新生大鼠辣椒素處理 ） ，觀察腿部Evans blue 滲出反應的變化，并與健側(cè)作對照。 2． 針刺對功能性腸病雙向調(diào)節(jié)的療效與 效應規(guī)律 研究 采用多中心隨機對照臨床研究方法，觀察不同穴位配伍方案針刺治療功能性腸病 （功能性便秘和功能性腹瀉） 的臨床療效。 （ 7） 探討 相同的針刺方法刺激不同的穴位是否對腹瀉和便秘兩種不同機能狀態(tài)均可產(chǎn)生調(diào)節(jié)效應（雙向調(diào)節(jié)），以闡明穴位固有特性在決定和影響針刺雙向調(diào)節(jié)效應中的作用及其規(guī)律；以闡明機體機能狀態(tài)不同、穴位不同在決定和影響針刺雙向調(diào)節(jié)效應中的作用及其普適性規(guī)律。在實驗動物分別研究針刺功能性集元穴位（曲池、上巨虛）對腸道運動的促進作用，與不同劑量的乙酰膽堿促進腸道運動的效應作比較，量化針刺強度等同于多大的藥物劑量。根據(jù)經(jīng)脈 臟腑相關聯(lián)系原則選穴，并以異經(jīng)穴位、同神經(jīng)節(jié)段穴位、異神經(jīng)節(jié)段穴位作比較。 （ 12） 系統(tǒng)研究 針刺 的雙向調(diào)節(jié)效應，明確是否同一穴位對不同生理病理狀態(tài)下的內(nèi)臟器官有雙向調(diào)節(jié)效應，或者是不同穴位才能表現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)效應。 （ 14）系統(tǒng)觀察針刺這些促進和抑制降腸道運動穴位對孤束核 ―增強 ‖和 ―抑制 ‖神經(jīng)元活動的調(diào)節(jié)效應，以闡明穴位雙向調(diào)節(jié)作用及調(diào)節(jié)機制。 （ 17）觀察不同穴位的組合（① 天樞、大腸俞； ②曲池 、上巨虛； ③ 天樞、大腸俞、 曲池 、上巨虛 ）對胃腸順應性、感覺和胃腸運動的變化 影響，研究不同穴位組合刺激對胃腸感覺和運動調(diào)節(jié)的協(xié)同性和拮抗性。然后進一步研究拮抗穴位所產(chǎn)生的效應有何變化？是否具有局部的優(yōu)勢原則？并進一步探討穴位的協(xié)同和拮抗作用的機制和生物學原理。由于功能性單元穴位對腸道運動起抑制作用是通過交感神經(jīng)系統(tǒng)發(fā) 揮其特異效應的，在交感神經(jīng)腎上腺素能β2 受體特異性基因敲除的動物模型這部分功能將不會出現(xiàn)或明顯減弱。由于功能性集元穴位對腸道運動起促進作用是通過副交感神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮其特異效應的，在副交感神經(jīng)毒蕈堿乙酰膽堿能 M2M3 受體特異性基因敲除的動物模型這部分功能將不會出現(xiàn)或明顯減弱。 （ 23）敲除傷害感受器基因（ Trpv1）后，研究不同穴位對腸道運動的調(diào)節(jié)作用。 本項目建立針刺雙向調(diào)節(jié)效應數(shù)據(jù)采集與分析系統(tǒng) , 具備遠程協(xié)同工作功能。研究腸道疾病體表反應點與常用治療腸道疾病穴位之間的關系。根據(jù)針灸治療原則確定的穴位配伍方案研究不 同配穴方案 針刺 臨床療效的差異，對于明確腧穴在 針刺 雙向調(diào)節(jié)中的決定性作用具有重要意義，是本項研究的核心內(nèi)容。 課題 5：穴位 配伍對功能性腸病調(diào)節(jié)的協(xié)同與拮抗作用規(guī)律及機制 ， 與其他課題的關系及與總體目標的關系 : 在已經(jīng)獲得不同穴位對腸道運動有不同的促進或抑制功能的基礎上，探討不同穴位所存在的協(xié)同作用或拮抗作用；從而得出在研究基礎上的 針刺 協(xié)同作用穴位組方，避免拮抗作用的穴位組合。 最終目標是通過中藥 ―十八反 ‖配伍關系及其科學實質(zhì)的系統(tǒng)研究，形成一個有結(jié)論性的、能夠指導臨床實踐的、具有理論性的研究成果。 ―十八反 ‖是有條件的、動態(tài)的配伍禁忌，這是有別于西藥禁忌的一個重要特點，即在特定的病理條件、特定的配伍關系和特定的給藥方式下， ―十八反 ‖中藥能有限利用。從而對科學假說進行驗證，揭示其科學內(nèi)涵，提煉形成創(chuàng)新知識和豐富發(fā)展中藥配伍禁忌理論。 技術方法可行 本項目集成藥物安全性評價、毒理毒代、毒效物質(zhì)、藥物相互作用等現(xiàn)代研究方法，創(chuàng)建客觀表征中藥配伍禁忌量 毒 時 效關系的研究模式，以揭示 ―十八反 ‖配伍毒效表征及其機理，闡明其科學內(nèi)涵。 創(chuàng)新點 在中醫(yī)藥理 論指導下，基于前期研究工作積累，采用多學科交叉技術和手段，開展 ―十八反 ‖的系統(tǒng)研究，揭示其科學實質(zhì)，促進中藥配伍理論的豐富與發(fā)展。 技術路線 互為補充 相互驗證 基于“ 十八反 ”的 中藥配伍禁忌 理論基礎研究 安全 性評價 1. 單次給藥毒性評價 2. 多 次給藥毒性評價 3. 安全藥理評價 快速篩查毒性 評價 1. 高內(nèi)涵評價 2. 高通量篩選 3. 模式生物評價 客觀界定 中藥“十八反” 反藥配伍組合 “ 反 ” 與 “ 不反 ” 客觀評價 反藥 配伍組合 致毒 /增毒 特點 及其毒性程度 揭示 中藥“十八反” 配伍 致毒 /增毒 的作用 機理 闡明中藥“十八反”妨害治療 的效應機制 與理論基礎 闡釋含有“十八反”的代表性方劑 宜忌條件與配伍關系 物質(zhì)基礎 研究 1. 毒效物質(zhì)基礎研究 2. 化學物質(zhì)庫的建立 妨害治療基礎 研究 1. 妨害作用的藥效學評價 2. 妨害作用的化學實質(zhì)研究 3. 妨害作用的生物學基礎研 究 “ 十八反 ” 反 藥配伍前后毒效評價 回答 ☆ “十八反 ”藥對反與不反？ ☆ 配伍致毒 /增毒 /減效程度與特點？ 量 毒 效關系 研究 1. 量 毒 關系 研究 2. 量 效關系 研究 毒效機制 研究 1. 體內(nèi)過程 研究 2. 藥物相互作用研究 反藥配伍的宜忌條件 研究 1. 臨床文獻回顧性調(diào)查 2. 適宜病證效應評價 3. 宜忌條件與配伍關系揭示 課題一 基于 “十八反 ”的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)挖掘與知識發(fā)現(xiàn)研究 主要研究內(nèi)容 圍繞 ―十八反 ‖中藥配伍禁忌理論基礎研究的總體目標，立足于中醫(yī)藥配伍理論和豐富的歷史經(jīng)驗，開展基于 ―十八反 ‖的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)挖掘與知識發(fā)現(xiàn)研究，通過 ―十八反 ‖中藥文獻數(shù)據(jù)的收集考證，規(guī)范文獻信息，建立基于 ―十八反 ‖配伍禁忌相關數(shù)據(jù)庫；整合多種數(shù)據(jù)挖掘技術，建立適宜有效的數(shù)據(jù)挖掘平臺，進行 ―十八反 ‖中 藥配伍關系的數(shù)據(jù)挖掘研究，尋求其潛在規(guī)律；通過 ―十八反 ‖同方配伍的方劑分析，探討配伍禁忌的轉(zhuǎn)化條件和應用特點；建立研究數(shù)據(jù)匯交管理平臺，使各課題之間形成有機整體，并為整合文獻和實驗信息、形成知識發(fā)現(xiàn)體系、豐富中藥配伍禁忌理論提供支撐。 （ 2）通過規(guī)范文獻信息，建立基于 ―十八反 ‖的中藥配伍禁忌數(shù)據(jù)庫，主要包含 ―十八反 ‖中藥相關的歷史文獻、中藥和方劑資料、臨床案例，以及現(xiàn)代研究獲得的物質(zhì)基礎、毒效等生物學信息相關數(shù)據(jù)。 “十八反 ”同方配伍的特征條件和應用特點 ―十八反 ‖中藥的臨床應用主要表現(xiàn)為在方劑中與其他藥物配伍共同發(fā)揮功效。 承擔單位： 南京中醫(yī)藥大學 負 責 人： 范欣生 研究員 科研骨干： 錢大瑋 研究員 尚爾鑫 助理研究員 郭建明 助理研究員 經(jīng)費比例： 8 % 課題二 “半蔞貝蘞及攻烏 ”配伍關系與毒效表征的基礎研究 主要研究內(nèi)容 圍繞 ―十八反 ‖中藥配伍禁忌理論研究的總體目標，針對 ―半蔞貝蘞及 ‖與烏頭反藥配伍組合的藥性與功效特點，開展 ―半蔞貝蘞及攻烏 ‖配伍關系與毒效表征的基礎研究。 “半蔞貝蘞及攻烏 ”致毒 /增毒物質(zhì)基礎研究 采用體外化學組與藥物代謝物組學等方法，研究 ―半蔞貝蘞及攻烏 ‖配伍致毒/增毒的化學實質(zhì)；明確藥物配伍在體外發(fā)生的化學成分變化，發(fā)現(xiàn)藥物進入 體內(nèi)后藥物發(fā)生的代謝物變化。計算 藥物配伍前后的中毒劑量、有效量和安全范圍，結(jié)合各毒效相關成分的含量變化，對其量 毒 效數(shù)據(jù)進行非線性模擬建模，考察和評價反藥配伍前后在體內(nèi)致毒物質(zhì)的代謝速率、累積規(guī)律和蓄積致毒的時空關系，揭示其量 毒 時 效關系及其變化規(guī)律。 “藻戟遂芫 ”與甘草配伍毒性評價體系的建立及其配伍毒性評價研究 建立由經(jīng)典毒理學、系統(tǒng)毒理學、毒性快速篩查技術和安全藥理學方法組成的、適宜于中藥 ―十八反 ‖反藥配伍組合毒性研究的評價體系，依據(jù)《中華人民共和國藥典》所規(guī)定的劑量范圍，通過對 ―藻戟遂芫 ‖與甘草反藥配伍組合在整體、器官、細胞和分子水平進行系統(tǒng)地毒理學研究和安全性評價，揭示 ―藻戟遂芫 ‖與甘草配伍前后的毒性變化及其規(guī)律。計算藥物配伍前后的中毒劑量、有效量和安全范圍，結(jié)合各毒效相關成分的含量變化，對其量 毒 效數(shù)據(jù)進行非線性模擬建模，考察和評價反藥配伍前后在體內(nèi)致毒物質(zhì)的代謝速率、累積規(guī)律和蓄積致毒的時空關系，揭示其量 毒 時 效關系及其變化 規(guī)律。 “藻戟遂芫 ”與甘草各反藥配伍組合致毒 /增毒的分子機制研究 采用細胞、分子生物學技術，研究該組反藥配伍組合對腸上皮細胞、肝細胞功能損 傷和凋亡誘導的毒性作用。培養(yǎng)高層次青年人才 2–4 名。 “諸參辛芍 ”與藜蘆配伍的毒性評價研究 以中醫(yī)藥理論為指導，參照《中藥、天然藥物急性毒性 研究技術指導原則》，采用傳統(tǒng)毒理學、毒性快速篩查技術、潛在毒性發(fā)現(xiàn)技術等相結(jié)合，進行 ―諸參辛芍叛藜蘆 ‖配伍毒性評價研究，確認已知毒性，發(fā)現(xiàn)潛在毒性。 “諸參辛芍 ”與藜蘆配伍的致毒 /增毒物質(zhì)生物學機制研究 采用分子生物學、蛋 白質(zhì)組學、現(xiàn)代色譜分析和液質(zhì)聯(lián)用技術，對藜蘆中典型毒性成分的代謝特征進行動態(tài)性觀察，找到受調(diào)控的 P450 酶及對藜蘆有毒中藥成分代謝影響及其與毒性效應的機制；利用蛋白質(zhì)組學技術尋找并確定 ―諸參辛芍叛藜蘆 ‖中反藥組合相互作用后與藥物毒性成分發(fā)揮作用相關的肝臟代謝、信號通路及轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡中蛋白質(zhì)組的動態(tài)變化過程，尋找配伍藥物毒效成分的體內(nèi)作用靶點及診斷標志物，從分子水平揭示藜蘆配伍致毒規(guī)律，進而系統(tǒng)揭示―諸參辛芍叛藜蘆 ‖配伍藥物相互作用可能機制。 闡明 ―諸參辛芍叛藜蘆 ‖配伍組合的相互作用和分子機制。以此闡述 ―兩藥 配伍使用時 既使 不發(fā)生毒 性 增強現(xiàn)象也不等于安全有效，妨害治療的藥物也不適宜相互配合使用 ‖的學術觀點，為十八反配伍禁忌 新涵義的認識提供科學依據(jù)，最終從妨害治療角度揭示中 藥 ―十八反 ‖反與不反、如何反以及為什么反的科學內(nèi)涵。 “十八反 ”配伍妨害治療作用的生物學基礎研究 根據(jù)上述研究結(jié)果或結(jié)論選擇相應的動物模型和細胞模型，結(jié)合形態(tài)和功能，從 整體、器官、細胞、分子和基因等不同層次考察配伍藥物或相關成分產(chǎn)生妨害治療作用的 主要 藥理機理和部分生物學機制。 從 臨床研究文獻的角度， 探討 ―十八反 ‖反藥 配伍 組合 的臨床使用 情況 ， 分析―十八反 ‖配伍組合 、劑量及其方劑的臨床應用范圍（病證及分布趨勢）、特定適用對象及使用條件。 從實驗研究方面，以相關疾病模型為載體 ， 研究中藥 “十八反 ”配伍應用的宜忌條件 （ 1）以古方海藻玉壺湯為切入點 ，基于臨床用藥特點，設計特定的病理模型， 探討不同給藥劑量、配伍比例等因素對方中 ―十八反 ‖配伍組合 （海藻與甘草）生物效應的影響，探索其用藥特點及規(guī)律。主要對 ―十八反 ‖中藥古今文獻 信息進行收集與考證； 啟動建立融數(shù)據(jù)存貯、展示、匯交、 共享、分析、管理等功能為一體的管 理平臺； 建立中藥 ―十八反 ‖毒性評價體系，開展烏頭組、甘草組、藜蘆組各反藥 配伍組合的毒性評價研究； 初步建立中藥 ―十八反 ‖藥味與反藥配 伍組合樣品制備及化學物質(zhì)庫； 啟動中藥 ―十八反 ‖代表性反藥配伍 組合及方劑妨害治療效應基礎研究； 從臨床文獻分析角度，考察分析中藥 十八反配伍應用的宜忌條件。 研究內(nèi)容 預期目標 第 三 年 以文獻資料結(jié)合實驗數(shù)據(jù)，針對不同病證發(fā)現(xiàn)反藥配伍特征性關聯(lián)關系； 采用整體、器官組織等評價指標，對反藥配伍組合致毒 /增毒 /減效的作用機理進行研究； 中藥 ―十八反 ‖配伍前后毒效化學成分群研究； 采用多因素非線性回歸、人工神經(jīng)網(wǎng)絡、智能機器學習等方法，對中藥十八反配伍前后化學物質(zhì)變化與毒效作用進行關聯(lián)研究； 中藥 ―十八反 ‖體內(nèi)相互作用研究； ―十八反 ‖妨害治療代表性反藥配伍組合體內(nèi)過程研究； 含有反藥配伍的代表性方劑甘遂半夏湯的宜忌條件和配伍關系研究。 研究內(nèi)容 預期目標 第 五 年 豐富完善在線的項目研究數(shù)據(jù)匯交管理平臺； 建立