【正文】 證費(fèi)時(shí)費(fèi)力，部分責(zé)任心不強(qiáng)的人員不能真正嚴(yán)格按要求實(shí)施； ④藥品監(jiān)管部門對(duì)清潔驗(yàn)證重視度和檢查力度不夠，不能夠給企業(yè)很好的指導(dǎo)，各個(gè)企業(yè)只是“摸著石頭過河”，企業(yè)在 GMP認(rèn)證或檢查時(shí)，容易蒙混過關(guān)。 清潔驗(yàn)證是針對(duì)清潔規(guī)程進(jìn)行驗(yàn)證，通過科學(xué)的方法采集足夠的數(shù)據(jù)，證明 按清潔規(guī)程清潔的設(shè)備，能始終如一地達(dá)到預(yù)定的清潔標(biāo)準(zhǔn)。少量有機(jī)物殘留及水分 能促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，可能經(jīng)一段時(shí)問后產(chǎn)品才產(chǎn)生有害的降解產(chǎn)物，因此，還應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔后監(jiān)測(cè)清潔驗(yàn)證的效果，以確定清潔后清潔狀態(tài)可以保持的最長(zhǎng)時(shí)間。 4 2 清潔驗(yàn)證 清洗規(guī)程草案 的制定 清洗規(guī)程草案 的 內(nèi) 容 清洗規(guī)程草案應(yīng)包括以下內(nèi)容 :清潔目的、 清潔劑 、 設(shè)備的拆卸、設(shè)備的清洗、設(shè)備的消毒與滅菌、清潔后檢查的要求，干燥與儲(chǔ)存條件、清潔有效期等 [1]。 選擇 清潔 溶劑 為了選擇合適的清潔溶劑，在這里我們先要了解影響清潔效果的幾大因素 [3]： 1） 殘留物的性質(zhì) 殘留物一般情況下都是潛在的污染物，它通常是最終產(chǎn)品、活性成分或在生產(chǎn)中產(chǎn)生的其他物質(zhì)（如中間 產(chǎn)物、副產(chǎn)物或已知物質(zhì)的降解產(chǎn)物等）。 3） 待清潔設(shè)備表面的材質(zhì) 在選擇清潔溶劑時(shí)必須考慮清潔溶劑及其揮發(fā)氣體將于哪些材質(zhì)直接接觸，確認(rèn)清潔溶劑和它的揮發(fā)氣體不會(huì)與待清潔設(shè)備和設(shè)備部件（如密封圈、管口和泵等） 的材質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，以及清潔溶劑的揮發(fā)氣體對(duì)可能接觸的材質(zhì)的影響。 6） 清潔劑對(duì)環(huán)境的影響 為了減少對(duì)環(huán)境的污染，通常應(yīng)選用磷含量低、中性或弱酸性或弱堿性的清5 潔溶劑。 2） 設(shè)備的拆卸 拆裝不僅增加了修理的工作量，而且對(duì)零件的壽命也是有很大的影響。拆卸時(shí)應(yīng)記住各零件的順序，以便于裝配（拆卸的順序大體上和裝配的順序相反，先裝的后拆）。對(duì)于細(xì)長(zhǎng)零件要懸掛，如平放，要用多個(gè)支撐點(diǎn)，以避免腐蝕和變形；⑦對(duì)液壓元件、潤(rùn)滑油孔應(yīng)加以堵塞保護(hù)，以免掉進(jìn)污物或塵屑；⑧各部件應(yīng)分箱放置，避免丟失和混淆。 ② 不明物質(zhì)或成份污染， 制藥設(shè)備使用、維護(hù)、清洗過程中所采用的潤(rùn)滑油、化學(xué)清洗劑或清洗所用的工具如刷子、碎布等 ,均提供了潛在污染的機(jī)會(huì)。半自動(dòng)清洗是指超聲波清洗。 3）清潔時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng) （ 1） 零件經(jīng)洗滌后應(yīng)立即用熱水沖洗，以防堿性溶液腐蝕零件表面 ； 6 （ 2） 零件經(jīng)洗滌，必須待干燥后涂以機(jī)油，以防生銹； （ 3） 在洗滌及運(yùn)送過程中，注意不要碰傷零件的已加工表面。滅菌是指殺死或去除物質(zhì)中的全部微生物，具有絕對(duì)意義。 （一） 常用的消毒方法有：紫外線照射消毒、消毒劑消毒、 氣體消毒 （ 1） 紫外線照射消毒是電磁輻射法的一種。環(huán)境溫度在 200C、相對(duì)濕度為 40%～ 60%的條件下，紫外燈的滅菌效果最好。 ③ 燈的壽命。常用的消毒劑有新潔爾滅、戊二烷， 75%異丙醇、 75%乙醇等 。在應(yīng)用消毒劑消毒潔凈室時(shí)需注意： ?為了避免細(xì)菌對(duì)某一種消毒劑產(chǎn)生耐藥性，消毒劑使用一段時(shí)間后應(yīng)進(jìn)行更換 。其中： ?甲醛消毒是當(dāng)前潔凈室常用的一種消毒方式。目前臭氧消毒已被越來越廣泛的應(yīng)用于潔凈室的消毒。由于不存在任何有毒殘留物，因此被稱為無污染消毒劑。由于其安全方便和消毒效果好的特點(diǎn)，臭氧消毒越來越被制藥企業(yè)所廣泛使用。 （ 2）高壓蒸氣滅菌法 用高溫加高壓滅菌，不僅可殺死一般的細(xì)菌，對(duì)細(xì)菌芽胞也有殺滅效果 ，是最可靠、應(yīng)用最普遍的物理滅菌法。滅菌條件要求：蒸氣壓力 （ ／ cm2），溫度達(dá) l32℃以上并維持 l0分鐘，即可殺死包括具有頑強(qiáng)抵抗力的細(xì)菌芽胞在內(nèi)的一切微生物。亦可用于粉末注射劑，但不適合于對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有損害的場(chǎng)合。 （ 5） 干熱滅菌法 本法系指物品于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中、利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。對(duì)生產(chǎn)結(jié)束到開始清潔的最長(zhǎng)時(shí)間、連續(xù)生產(chǎn)的最長(zhǎng)時(shí)間、已清潔設(shè)備用于下次生產(chǎn)前的最長(zhǎng)存放時(shí)間等都要做出規(guī)定。因?yàn)楦稍锏臍埩粑飳?duì)清潔效果影響最大；在沖洗較長(zhǎng)的輸送管道時(shí)，應(yīng)對(duì)沖洗液的流速及時(shí)間有明確規(guī)定。此外還應(yīng)制作詳細(xì)的、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮饕?guī)程，以減少人為操作偏差；設(shè)備清潔后，必須干燥，不能存水，否則易染菌或是生菌等 [1] 9 3 驗(yàn)證清洗規(guī)程草案 制定驗(yàn)證方案 根據(jù)設(shè)備評(píng)估選擇清潔標(biāo)記物 由于設(shè)備可能生產(chǎn)多個(gè)品種，先要掌握每個(gè)品種活性成分的理化性質(zhì)等信息，如，溶解度、活性或毒性、粘度、吸附性、活性成分的濃度、日劑量范圍、生產(chǎn)批量、輔料對(duì)清潔設(shè)備的影響等。應(yīng)包括接觸藥品多的高濃度區(qū)，如攪拌槳；結(jié)構(gòu)復(fù)雜難以清洗區(qū)，如觀察口、閥門、管路接口處等；以及沖洗液不易到達(dá)的區(qū)域，如設(shè)備投料口等都應(yīng)定為擦拭取樣點(diǎn)。 2）取樣方法的選擇 取樣方法一般分為兩種， 一是擦拭取樣法，二是沖洗取樣法 （ 1） 擦拭取樣方法通常使用棉簽，按《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》中的擦拭取樣方法。因?yàn)槲廴疚锟赡苁遣灰浊鍧嵉奈镔Y或者吸藏在設(shè)備的縫隙中。在光滑平面 ,人的目測(cè)潔凈限度可達(dá) 到 1~4μ g 3） 原料藥 :總殘留物在更換后的產(chǎn)品中應(yīng)小于 1/1000。萬級(jí) :雜菌總數(shù)小于 1CFU/25cm2(擦拭法 ),雜菌總數(shù)小于 10CFU 25FU而有效、穩(wěn)定的清洗方法能有效防止藥品生產(chǎn)的交叉污染。選擇較難取樣的部位(角落、縫隙等 ),這些部位也較難清洗 ,所以能夠?qū)υO(shè)備的整體清潔水平進(jìn)行評(píng)價(jià) ,但定量困難。 空白品生產(chǎn) ： 設(shè)備清洗后 ,加工一批空白物料 ,檢測(cè)空白品中的殘余物含量。 外觀檢查法 ： 方法簡(jiǎn)便 ,但標(biāo)準(zhǔn)不易掌握。選擇與設(shè)備相同的板材，在數(shù)塊規(guī)定大小相同的區(qū)域內(nèi)，分別均勻噴灑已知 濃度、不同體積的標(biāo)記物對(duì)照品溶液，并使 標(biāo)記物對(duì)照品表面濃度范圍能涵蓋實(shí)際殘留濃度。 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證 被清潔驗(yàn)證所采用 的分析方法，應(yīng)該在清潔驗(yàn)證開始之前，就完成它自身的方法驗(yàn)證。11 舉個(gè)例子：某企業(yè)生產(chǎn)高活性的藥物 A，同一套設(shè)備也用于生產(chǎn)藥物 B，通過相關(guān)的計(jì)算得出，設(shè)備清潔后藥物 A的殘留限度為 10ppm。本章節(jié)通過制定驗(yàn)證方案，對(duì)方法的專屬性、靈敏度、線性和范圍、 精密度、定量限、準(zhǔn)確度等 [9]一一進(jìn)行驗(yàn)證。 1) 檢驗(yàn)方法的專屬性 專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在的情況下，采用的分析方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定被測(cè)物的特性的能力。范圍系指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測(cè)試方法適用的試樣中被測(cè)物的高、低限濃度或量。不同的分析方法，要求不同。截距是反映偏差的很好的指標(biāo)。這個(gè)濃度應(yīng)予以去除，因?yàn)槿绻嗽擖c(diǎn)， R2為 ，去除該點(diǎn)后， R2為 ，滿足了事先設(shè)定的要求，并且截距顯著降低。可將各響應(yīng)值與其濃度的比值對(duì)濃度作圖，理想的曲線是一條平行于 X軸的直線。精密度一般以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的百分?jǐn)?shù)來表示，對(duì)雜質(zhì)定量的系統(tǒng)精密度一般要求 RSD不大于 5%。 中間精密度系指在同一實(shí)驗(yàn)室改變其內(nèi)部條件所測(cè)得的測(cè)定結(jié)果的精密度。如果用的是色譜方法，也可以換一根柱子，最好是不同的批號(hào)甚至是不同供應(yīng)商的。在大多數(shù)情況下 ，因?yàn)樵O(shè)備材料和清潔步驟廠和廠之間是不一樣的，需要方法轉(zhuǎn)移的可能性比較小，如果集團(tuán)內(nèi)部的另外一個(gè)廠所擁有的設(shè)備和清潔步驟并不完全一樣，重現(xiàn)性就無關(guān)緊要?？傆袡C(jī)碳測(cè)定法 (TOC,Total Organic Carbon)（見表 3）具有靈敏度高 (1ppb),測(cè)試快速等優(yōu)點(diǎn)。取等量試液加入 40mL低 TOC水，然后檢測(cè) 擦拭回收率為 %～%,RSD=%～ 5) 檢測(cè)限 (LOD)和定量限 (LOQ) 在常規(guī)的原料藥或者制劑的分析中， LOD和 LOQ值一般并不重要，因?yàn)楸粶y(cè)物的量一般要遠(yuǎn)大于 LOQ。 LOD一般是噪音的三倍量， LOQ一般是十倍量。 ICHQ2B對(duì)σ的確定推薦了兩種方法，一種是做多次空白，各次的響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為σ；另外一種方法是做多條校正曲線，各曲線的 Y軸截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差為σ [12]。定量限一般要求 RSD不大于 10%。對(duì)于清潔驗(yàn)證來說，在某些情況下，回收率需要盡可能地接近100%，但是有的情況下，回收率低至如 50%也是可以接受的。這些濃度應(yīng)該包括被測(cè)物合格標(biāo)準(zhǔn)濃度，一般是 25%到 150%的被測(cè)物的殘留限度，也曾有人用 10%到 500%。 用于清潔驗(yàn)證的分析方法應(yīng)該有多少回收率，一直爭(zhēng)議頗多。常做的實(shí)驗(yàn)是將原噴灑到模擬表面的溶液直接滴到棉簽上，全部吸收后再浸入提取溶劑中。被測(cè)物的揮發(fā)性也可能會(huì)造成回收率偏低，特別是當(dāng)揮干步驟中有使用加熱的或抽真空的烘箱。 100cm2 75000cm2247。 A產(chǎn)品的殘留 100%轉(zhuǎn)移到隨后生產(chǎn)的 B產(chǎn)品中。舉例檢測(cè)的殘留量為 2020mg,符合最低限度要求?；瘜W(xué)物質(zhì)毒性一般用“最低中毒劑 量 (TDLO)”和“半數(shù)致死量 (LD50)”來表示 ,兩者之間可用 Layton[13]經(jīng)驗(yàn)常數(shù)換算 ,即 TDLO= LD50 0毒性數(shù)據(jù) LD50= 80mg kg1 0 d1。 8mg 103 40kg/200mg=560mg。容器具、設(shè)備等的清潔效果與清潔周期均需經(jīng)驗(yàn)證后確定。 目前只有對(duì)清潔后的 容器具微生物指標(biāo)作限定 [12]并無 清潔周期驗(yàn)證的微生物指標(biāo)的確定應(yīng)依據(jù)不同生產(chǎn)品種的工藝要求制定，以滿足產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境和衛(wèi)生需求為依據(jù)。由于對(duì)指定殘留物的定量分析通常較繁瑣，可開發(fā)某些有足夠靈敏度且快速的非專屬性檢驗(yàn)方法，如測(cè)定總有機(jī)碳。(3)設(shè)備有重大變更 。 但是 ， 目前仍然 有許多問題需要注意和解決。② 選擇的擦拭溶媒不好 。⑥ 標(biāo)記物是否穩(wěn)定等。 16 參考 文獻(xiàn) [1] 程艷 .制藥企業(yè)工藝設(shè)備的清潔規(guī)程及清潔驗(yàn)證 .中國(guó)藥業(yè)， 2020,15(9):1920. 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