20xx年醫(yī)學(xué)專題—雙波長法快速測定蛋白質(zhì)含量-全文預(yù)覽
【正文】 和雙波長吸收度之比與蛋白質(zhì)濃度的線性關(guān)系。以稀釋的染料為待測樣本 ,繪制游離考馬斯亮蘭染料的吸收光譜 (圖 lb)。1. 4 蛋白質(zhì)測定 :方法同上 ,樣品和染料用量減少1/ 4。在 EL ISA檢測和 M T T凈試管內(nèi)加入 0. 8ml稀釋好的染料 ,再加入 0. 2ml測定中 ,常利用雙波長法來消除雜吸收的影響從而的待測樣本 ,對照品為蒸餾水 ,反應(yīng)時間至少 5min ,提高檢測的靈敏度[ 4 ]。[2 ]亮蘭染料和考馬斯亮蘭 蛋白質(zhì)結(jié)合物有不同的吸 50ml 95 %乙醇中 ,再加入 100ml的濃磷酸 ( 85 %光系數(shù)。其次 ,考馬斯亮蘭檢測的線性 1 材料和方法范圍窄 ,在 2～ 10μg/ ml之間 [ 3 ]。本實驗擬用雙波長代替單波測定法[ 1 ]。雙波長 。標(biāo)準(zhǔn)直線相關(guān)系數(shù) r2 = 0. 9965 ,表明在檢測限內(nèi) A595 / A450和蛋白質(zhì)濃度 C呈良好線形關(guān)系。蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2000 。結(jié)果 此種改進(jìn)不但提高了考馬斯亮蘭法檢測蛋白質(zhì)的靈敏度 ( 0. 127μg/ ml)和檢測范圍 ( 0. 127～31. 25μg/ ml) ,而且使大量標(biāo)本的檢測可在一次檢測過程中完成。定量 。 Coomassie brilliant blue 考馬斯亮蘭蛋白質(zhì)定量法 ,也被稱為 Bradford本 ,能減少系統(tǒng)誤差。法也有其局限性 ,首先其檢測靈敏度較低 ,只能檢測mg級水平的蛋白質(zhì) 。在酸性條件下 ,考馬斯亮蘭染料呈紅色 ,雙蒸水作為溶劑。蛋白質(zhì)的濃度 ,而忽略了游離考馬斯亮蘭染料在此 1. 3 吸收光譜測定 :將染料 1∶稀釋并過濾 ,在干波長下也有一定的吸收度。因此考馬斯1. 2 染料的配制 :將 100mg考馬斯亮蘭溶解在靈5540分光光度計廠 , 752C)在 460～ 700nm波長內(nèi) ,每10nm檢測樣品的透光率 ,換算成吸收度 ,根據(jù)吸收度 波長繪制吸收光譜圖。根據(jù)吸收度 波長繪制考馬斯亮蘭 蛋白質(zhì)結(jié)合物吸收光譜 (圖 la) 。2. 2 蛋白質(zhì)檢測的線性范圍 :為了適合酶標(biāo)儀濾光片的檢測 ,以 595nm和 450nm作為檢測波長 ,將 BSA從 1mg倍比稀釋至 240pg/ ml ,以檢測樣品在各濃度 C時的吸收度。為了明確 A595/ A450雙波長法檢測范圍 ,通過局部放大作圖 3。2. 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 :在
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