【正文】 是一種急性 時相正反應物。ng)為 0.6－1.2g/l。i)于人類血 液、體液、分泌液中的一種具有遺傳多態(tài) 性的α1糖蛋白。)斑痕中的Gc時，最好用免疫學方 法顯示其譜帶,第八十頁，共一百一十七頁。支持介質采用濃度 為5％、交聯(lián)度為3％聚丙烯酰胺凝膠， 兩性電介質pH為4.5－5.4，電壓為500V， 樣品加于距負極10mm處，電泳1h。ng)的目的。n yǒnɡ)法,三、等電聚焦(j249。ngh233。)為5.8％、交聯(lián)度為2.14％。nɡ suō)膠的制備,加樣,待分離樣品(y224。ngpǐn)分離成數(shù)個區(qū)帶。ngpǐn)膠pH6.7 2濃縮膠：是大孔膠，凝膠緩沖液為pH6.7的TrisHC1 3分離膠；是小孔膠，凝膠緩沖液為pH8.9 TrisHC1 4電極緩沖液是pH8.3 Tris甘氨酸緩沖液,第七十三頁，共一百一十七頁。,凝膠系統(tǒng)的均勻性： 連續(xù)性凝膠電泳 不連續(xù)凝膠電泳 按凝膠形狀(x237。ng)聚丙烯酰胺凝 膠作為支持物的電泳法，聚丙烯酰胺凝膠是由單 體丙稀酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙稀酰胺交聯(lián)而成的 多孔網(wǎng)狀凝膠。,Gc的免疫電泳分型：以含乳酸鈉的巴比妥 作為緩沖液，離子強度為0.05，將血清加 在瓊脂糖凝膠板負極測，電場(di224。 原因有：① 抗原抗體比例不恰當，使一些成分未出現(xiàn) 沉淀線；② 相鄰兩抗原遷移率非常接近而致沉淀線重 疊；③ 一條沉淀線分離成多條。,注意事項,（1）澆載玻片時，玻片應保持水平，瓊脂面要盡量(jǐnli224。,方法評價 免疫電泳分辨率高，可分出人血清中 20~30種抗原成分(ch233。,第六十三頁，共一百一十七頁。經(jīng)漂洗、干燥、染色、脫色等步驟制作染色標本，可長期保存。 2. 用微量加樣器加待檢標本于孔內。,第六十一頁，共一百一十七頁。 t243。 t243。 fēnxī)技術。nɡ)人種間 分布有區(qū)別，高加索人：Gc*1S Gc*2 Gc*1F；蒙古人種Gc*1F占 優(yōu)勢；黑種人群體中Gc*1F出現(xiàn)的頻率 很高,第五十八頁，共一百一十七頁。ngj237。ngj237。i)的遺傳 多態(tài)性源自第11號外顯子第416位和 第420位兩個密碼子的變異 Gc1F Gc1S Gc2 416位 天冬氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 420位 蘇氨酸 蘇氨酸 賴氨酸,第五十四頁，共一百一十七頁。Gc基因 全長42.4kb，含13個外顯子，12個內 含子。,Gc的主要(zhǔy224。h233。,八、Hp型遺傳多態(tài)性的法科學應用 Hp在血痕中可以保存相當長的時間，但由于血痕中過多的血紅蛋白可掩蓋Hp泳譜，因而在一定程度(ch233。,原理(yu225。i)的過氧化物酶活性在過氧化氫存在時 使聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍，染色,第四十六頁，共一百一十七頁。 黑種人群體中Hp1－1頻率最高，其次為 Hp2－1,第四十五頁，共一百一十七頁。n yǒnɡ)帶分裂為兩 條，負極側譜帶增多 HpK－1型 此型的特點是1－1區(qū)的電泳帶分裂為兩 條，其余區(qū)域無蛋白帶,第四十四頁，共一百一十七頁。ng)貧弱，有時 易與HP21相混淆,第四十二頁，共一百一十七頁。,Hp0型的基因型為Hpdel/ Hpdel Hp*del為沉默基因，其編碼hpα鏈的基 因片斷(pi224。,此外，胎兒血液中不易測出Hp，部分新生 兒可測出，4個月的嬰兒Hp型別大部分可 測出，個別情況直至15歲以后才能測出。,Hp*1基因的產(chǎn)物由Hp*1F和Hp*1S兩 個基因產(chǎn)物組成(zǔ ch233。 11是HP1/HP1純合子，12是HP1/HP2雜合 子、22是HP2/HP2純合子,第三十六頁，共一百一十七頁。)后，其珠蛋 白結合游離血紅蛋白的能力是下降的。n)和免疫能力發(fā)生改變。 第52位為賴氨酸即快，第53位為谷氨酸即慢,第三十二頁，共一百一十七頁。)位置分別位于第四和第二內含子，因此Hp*2基因含7個外顯子,第三十一頁，共一百一十七頁。,三、 Hp基因 定位于人類第六號染色體的長臂上。h233。nb225。11是HP1/HP1純合子，12是 HP1/HP2雜合子、22是HP2/HP2純合子,第二十八頁，共一百一十七頁。nɡ),第二十七頁，共一百一十七頁。α鏈有α1及α2兩種 。此外，Hp也是一種急性期蛋白，患各 種炎癥時其血漿中含量升高。,溶血性貧血患者血漿結合珠蛋白濃度下 降。ng)緊密的非共價復合物HbHp。含糖量為18.6％ 其主要功能是與游離血紅蛋白結合成穩(wěn)定的復合物，并很快被單核巨噬細胞系統(tǒng)處理掉，阻止了血紅蛋白從腎小球濾過，避免游離血紅蛋白對腎小管的損害,第二十三頁，共一百一十七頁。,第二十二頁，共一百一十七頁。)珠蛋白型,結合珠蛋白（haptoglobin，Hp）： 是人血清(xu232。,四、法醫(yī)學意義 自1939年發(fā)現(xiàn)血清中Hp的遺傳多態(tài)性以來，血清型因分型可靠，個體(g232。,DNA分型技術也可用于血清型分型。免疫 印跡的優(yōu)勢是能分析不能用其他的免疫化 學技術(j236。將印有蛋白質條 帶的硝酸纖維素膜（相當于包被了抗原的 固相載體）依次與特異性抗體和酶標第二 抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的 酶反應底物(dǐ w249。)（1～2A），通電 45min轉移即可完成。,第十六頁，共一百一十七頁。,第一階段為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳 （SDSPAGE）。)至固體膜上，用非特異性，非反應活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質區(qū)域 ③免疫學檢測。,電泳后的血清型譜帶的顯示可以用普通蛋白染色、免疫固定或免疫印跡法 蛋白染色操作簡便，但譜帶無特異性 免疫固定后染色為特異性顯色方法，主要 是利用(l236。,第十一頁，共一百一十七頁。ng)物質，在酸性溶液中帶正 電荷，在堿性溶液中帶負電荷。,等電聚焦技術則依靠不同蛋白分子之間等 電點差異進行分型，分辨率比常規(guī)凝膠電 泳高，能夠揭示(jiēsh236。ng)遺傳標記的型 別。nb225。 如Glm抗原表示該抗原位于免疫球蛋白 IgG1γ重鏈上,第四頁，共一百一十七頁。)，可采用特異性抗血清分 型。第八章 血清型,【目的要求】 掌握 HP、GC、TF的遺傳特征 熟悉(sh,二、血清型的分類與命名 根據(jù)分型原理不同，血清型可以分為兩大 類： 同種異型遺傳標記 是指同一種屬不同個體免疫球蛋白抗 原性的差別(chābi233。i)的肽鏈名 稱加抗原編號組成。,這類血清型的命名通常是蛋白(d224。d236。o)采用凝膠電泳技術分型 其分型原理為：不同表型的蛋白質一級結 構存在差異，分子量和等電點不同，在電 場中的遷移率不同，可依據(jù)蛋白譜帶位置 進行分型,第八頁，共一百一十七頁。,等電