【正文】 是一種急性 時(shí)相正反應(yīng)物。ng)為 0.6－1.2g/l。i)于人類血 液、體液、分泌液中的一種具有遺傳多態(tài) 性的α1糖蛋白。)斑痕中的Gc時(shí)，最好用免疫學(xué)方 法顯示其譜帶,第八十頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。支持介質(zhì)采用濃度 為5％、交聯(lián)度為3％聚丙烯酰胺凝膠， 兩性電介質(zhì)pH為4.5－5.4，電壓為500V， 樣品加于距負(fù)極10mm處，電泳1h。ng)的目的。n yǒnɡ)法,三、等電聚焦(j249。ngh233。)為5.8％、交聯(lián)度為2.14％。nɡ suō)膠的制備,加樣,待分離樣品(y224。ngpǐn)分離成數(shù)個(gè)區(qū)帶。ngpǐn)膠pH6.7 2濃縮膠：是大孔膠，凝膠緩沖液為pH6.7的TrisHC1 3分離膠；是小孔膠，凝膠緩沖液為pH8.9 TrisHC1 4電極緩沖液是pH8.3 Tris甘氨酸緩沖液,第七十三頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,凝膠系統(tǒng)的均勻性： 連續(xù)性凝膠電泳 不連續(xù)凝膠電泳 按凝膠形狀(x237。ng)聚丙烯酰胺凝 膠作為支持物的電泳法，聚丙烯酰胺凝膠是由單 體丙稀酰胺和交聯(lián)劑甲叉雙丙稀酰胺交聯(lián)而成的 多孔網(wǎng)狀凝膠。,Gc的免疫電泳分型：以含乳酸鈉的巴比妥 作為緩沖液，離子強(qiáng)度為0.05，將血清加 在瓊脂糖凝膠板負(fù)極測(cè)，電場(chǎng)(di224。 原因有：① 抗原抗體比例不恰當(dāng)，使一些成分未出現(xiàn) 沉淀線；② 相鄰兩抗原遷移率非常接近而致沉淀線重 疊；③ 一條沉淀線分離成多條。,注意事項(xiàng),（1）澆載玻片時(shí)，玻片應(yīng)保持水平，瓊脂面要盡量(jǐnli224。,方法評(píng)價(jià) 免疫電泳分辨率高，可分出人血清中 20~30種抗原成分(ch233。,第六十三頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。經(jīng)漂洗、干燥、染色、脫色等步驟制作染色標(biāo)本，可長(zhǎng)期保存。 2. 用微量加樣器加待檢標(biāo)本于孔內(nèi)。,第六十一頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。 t243。 t243。 fēnxī)技術(shù)。nɡ)人種間 分布有區(qū)別，高加索人：Gc*1S Gc*2 Gc*1F；蒙古人種Gc*1F占 優(yōu)勢(shì)；黑種人群體中Gc*1F出現(xiàn)的頻率 很高,第五十八頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。ngj237。ngj237。i)的遺傳 多態(tài)性源自第11號(hào)外顯子第416位和 第420位兩個(gè)密碼子的變異 Gc1F Gc1S Gc2 416位 天冬氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 420位 蘇氨酸 蘇氨酸 賴氨酸,第五十四頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。Gc基因 全長(zhǎng)42.4kb，含13個(gè)外顯子，12個(gè)內(nèi) 含子。,Gc的主要(zhǔy224。h233。,八、Hp型遺傳多態(tài)性的法科學(xué)應(yīng)用 Hp在血痕中可以保存相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，但由于血痕中過(guò)多的血紅蛋白可掩蓋Hp泳譜，因而在一定程度(ch233。,原理(yu225。i)的過(guò)氧化物酶活性在過(guò)氧化氫存在時(shí) 使聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，染色,第四十六頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。 黑種人群體中Hp1－1頻率最高，其次為 Hp2－1,第四十五頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。n yǒnɡ)帶分裂為兩 條，負(fù)極側(cè)譜帶增多 HpK－1型 此型的特點(diǎn)是1－1區(qū)的電泳帶分裂為兩 條，其余區(qū)域無(wú)蛋白帶,第四十四頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。ng)貧弱，有時(shí) 易與HP21相混淆,第四十二頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,Hp0型的基因型為Hpdel/ Hpdel Hp*del為沉默基因，其編碼hpα鏈的基 因片斷(pi224。,此外，胎兒血液中不易測(cè)出Hp，部分新生 兒可測(cè)出，4個(gè)月的嬰兒Hp型別大部分可 測(cè)出，個(gè)別情況直至15歲以后才能測(cè)出。,Hp*1基因的產(chǎn)物由Hp*1F和Hp*1S兩 個(gè)基因產(chǎn)物組成(zǔ ch233。 11是HP1/HP1純合子，12是HP1/HP2雜合 子、22是HP2/HP2純合子,第三十六頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。)后，其珠蛋 白結(jié)合游離血紅蛋白的能力是下降的。n)和免疫能力發(fā)生改變。 第52位為賴氨酸即快，第53位為谷氨酸即慢,第三十二頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。)位置分別位于第四和第二內(nèi)含子，因此Hp*2基因含7個(gè)外顯子,第三十一頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,三、 Hp基因 定位于人類第六號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上。h233。nb225。11是HP1/HP1純合子，12是 HP1/HP2雜合子、22是HP2/HP2純合子,第二十八頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。nɡ),第二十七頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。α鏈有α1及α2兩種 。此外，Hp也是一種急性期蛋白，患各 種炎癥時(shí)其血漿中含量升高。,溶血性貧血患者血漿結(jié)合珠蛋白濃度下 降。ng)緊密的非共價(jià)復(fù)合物HbHp。含糖量為18.6％ 其主要功能是與游離血紅蛋白結(jié)合成穩(wěn)定的復(fù)合物，并很快被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)處理掉，阻止了血紅蛋白從腎小球?yàn)V過(guò)，避免游離血紅蛋白對(duì)腎小管的損害,第二十三頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,第二十二頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。)珠蛋白型,結(jié)合珠蛋白（haptoglobin，Hp）： 是人血清(xu232。,四、法醫(yī)學(xué)意義 自1939年發(fā)現(xiàn)血清中Hp的遺傳多態(tài)性以來(lái)，血清型因分型可靠，個(gè)體(g232。,DNA分型技術(shù)也可用于血清型分型。免疫 印跡的優(yōu)勢(shì)是能分析不能用其他的免疫化 學(xué)技術(shù)(j236。將印有蛋白質(zhì)條 帶的硝酸纖維素膜（相當(dāng)于包被了抗原的 固相載體）依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二 抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的 酶反應(yīng)底物(dǐ w249。)（1～2A），通電 45min轉(zhuǎn)移即可完成。,第十六頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,第一階段為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳 （SDSPAGE）。)至固體膜上，用非特異性，非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域 ③免疫學(xué)檢測(cè)。,電泳后的血清型譜帶的顯示可以用普通蛋白染色、免疫固定或免疫印跡法 蛋白染色操作簡(jiǎn)便，但譜帶無(wú)特異性 免疫固定后染色為特異性顯色方法，主要 是利用(l236。,第十一頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。ng)物質(zhì)，在酸性溶液中帶正 電荷，在堿性溶液中帶負(fù)電荷。,等電聚焦技術(shù)則依靠不同蛋白分子之間等 電點(diǎn)差異進(jìn)行分型，分辨率比常規(guī)凝膠電 泳高，能夠揭示(jiēsh236。ng)遺傳標(biāo)記的型 別。nb225。 如Glm抗原表示該抗原位于免疫球蛋白 IgG1γ重鏈上,第四頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。)，可采用特異性抗血清分 型。第八章 血清型,【目的要求】 掌握 HP、GC、TF的遺傳特征 熟悉(sh,二、血清型的分類與命名 根據(jù)分型原理不同，血清型可以分為兩大 類： 同種異型遺傳標(biāo)記 是指同一種屬不同個(gè)體免疫球蛋白抗 原性的差別(chābi233。i)的肽鏈名 稱加抗原編號(hào)組成。,這類血清型的命名通常是蛋白(d224。d236。o)采用凝膠電泳技術(shù)分型 其分型原理為：不同表型的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié) 構(gòu)存在差異，分子量和等電點(diǎn)不同，在電 場(chǎng)中的遷移率不同，可依據(jù)蛋白譜帶位置 進(jìn)行分型,第八頁(yè)，共一百一十七頁(yè)。,等電