20xx年醫(yī)學專題—第五章-抗-體-制-藥-全文預(yù)覽
【正文】 rn或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。,第三十三頁，共六十九頁。,第三十頁，共六十九頁。hler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體為代表； ③以1994年Winter 以基因工程方法制備抗體為代表。)90年代發(fā)展的研究領(lǐng)域。是一種非天然性抗體，其結(jié)合抗原的兩個臂具有不同的特異性。這種改型抗體也稱CDR移植抗體 (CDR grafting antibody)。)替換人 Ig分子中的CDR序列(x249。,第二十七頁，共六十九頁。,第二十三頁，共六十九頁。,二、鼠源性單克隆抗體的改造 目的(m249。IgG類與蛋白A的結(jié)合與pH 有密切的關(guān)系。在pH7.4條件下，IgG1和IgG2能結(jié)合在DEAE填料上，其中IgG2a可在較低離子強度下洗脫下來，其純度很高。nɡ w224。m微孔(wēi kǒnɡ)濾膜過濾，去除細菌、支原體 d.飽和硫酸銨沉淀抗體（50%飽和硫酸銨能回收90%以上的抗體）。ngtǐ)的純化 根據(jù)Ig的類和亞類以及用途選擇不同的純化方法。 優(yōu)點：操作簡便，比較經(jīng)濟，所得單克隆抗體量多且效價高，還可有效地保存雜交瘤細胞株和分離已污染雜菌的雜交瘤細胞株。d233。g/ml。 改良的方法有：無血清培養(yǎng)法、懸浮培養(yǎng)法、微載體懸浮培養(yǎng)法。g/ml以上，給純化(ch,單克隆抗體的大量制備 （1）體外培養(yǎng)法：可獲得10181。 小鼠骨髓瘤細胞染色體：SP2/0細胞為62~68，NS1為54~64，大多數(shù)為非整倍性，有中部和亞中部著絲點。,第十六頁，共六十九頁。第一次克隆化時也要應(yīng)用HT培養(yǎng)液，以后的克隆化可用不含HT的RPMI 1640培養(yǎng)液。,第十三頁，共六十九頁。 （1）細胞融合液中的細胞類型：4或5種。相對分子質(zhì)量在400~6000，濃度在10%~60%范圍內(nèi)的PEG都能使細胞發(fā)生融合。,用于細胞融和的骨髓瘤細胞應(yīng)具備融和率高，自身不分泌抗體，所產(chǎn)生的雜交瘤細胞分泌抗體的能力強且長期穩(wěn)定等特點。,。)一個抗原決定族的抗體，又是單一的B淋巴細胞克隆產(chǎn)生的，故稱為單克隆抗體。,第四頁，共六十九頁。,McAb 在免疫導向療法中存在的問題（障礙）： A、McAb均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（HAMA），加速了排斥反應(yīng)(fǎny236。易出現(xiàn)非特異性交叉反應(yīng)。 Ig是化學結(jié)構(gòu)的概念，而抗體是生物學功能的概念，所有抗體是Ig，但并非所有Ig分子都有抗體活性。,第二頁，共六十九頁。第五章 抗 體 制 藥,第一頁，共六十九頁。 1937年Tiselius等人用電泳法將血清分為白蛋白、甲種（α）球蛋白、乙種（ β ）球蛋白、丙種（ γ ）球蛋白，并證明抗體活性主要存在于丙種球蛋白組分。 病人血清中具有抗體活性及化學結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白，稱為免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig）。ng)族的抗原物質(zhì)，因此制的這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱為多克隆抗體。,第三頁，共六十九頁。 解決問題的方法或途徑—基因工程技術(shù) 1984年報道了人—鼠嵌合抗體，之后制備出了改型抗體、單鏈抗體、單域抗體、最小識別單位等多種類型，基本上消除了抗體的鼠源性（免疫源性），相對分子質(zhì)量只有完整抗體分子的1/80~1/3。由于這種抗體是針對(zhēndu236。,第七頁，共六十九頁。,第九頁，共六十九頁。常用濃度為40%~50%，相對分子質(zhì)量4000為佳。但必須嚴格限制接觸時間。,第十二頁，共六十九頁。)細胞。,第十五頁，共六十九頁。ng)—染色體分析 正常鼠的脾細胞染色體數(shù)：40，全部為端著絲粒。,第十七頁，共六十九頁。但由于培養(yǎng)液中含有血清成分，總蛋白量可達100 181。加入小牛血清又是發(fā)生支原體污染的原因，而且批間質(zhì)量差異太大，直接影響雜交瘤細胞的生長。 懸浮培養(yǎng)法：連續(xù)懸浮培養(yǎng)的細胞密度可達2107/ml, 收集的單克隆抗體可達400 181。,（2）動物體內(nèi)誘生法：可獲得(hu242。常用 基本程序：接種前1~2周，小鼠腹腔注射0.5ml Pristane（降植烷）或用液體石蠟，然后注射1*106雜交瘤細胞，7~12d便有腹水生成，待生成腹水后再提取，離心去細胞沉淀，取上清
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