【正文】 ．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 22 4 設(shè)備選型 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 23 5 主要經(jīng)濟技術(shù)指標(biāo) ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 25 6 建設(shè)地點 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 26 7 建設(shè)工期及進度安排 ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 29 8 建設(shè)期管理 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 30 四 項目投資 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 32 1 項目總投資估算依據(jù) ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 33 2 投資估算 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 33 3 投資 使用 方案 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 34 4 資金籌措方案 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 34 5 項目資本金構(gòu)成比例 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 35 3 6 項目資金落實情況 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 35 7 已完成建設(shè)資金的投入 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 36 8 申請國債資金理由、額度及資金使用方案 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 36 9 貸款償還計劃 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 39 五 環(huán)境保護、資源利用、節(jié)能與原材料供應(yīng)及外部配套條件落實情況 ．．．．．．．．．．．． 39 1 環(huán)境保護 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 39 2 資源綜合利用 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 41 3 節(jié)能措施 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 41 4 勞動安全、衛(wèi)生與消防 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 42 5 原材料供應(yīng)及外部配套條件落實情況 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 45 六 項目法人基本情況 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 47 七 項目財務(wù)分析、經(jīng)濟分析及主要指標(biāo) ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．． 50 1 經(jīng)濟分析及主要指標(biāo) ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 51 2 風(fēng)險分析 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 55 3 社會效益 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 56 4 結(jié)論與建議 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 57 八 項目招標(biāo)內(nèi)容 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． 58 九 附件 省農(nóng)發(fā)行 5000 萬元貸款批復(fù)文件；吉林銀行貸款合同；交行貸款合同； 近三年財務(wù)報表（ 06 年 08 年）； 審計報告、驗資報告； 科技成果鑒定證書、檢測報告、省科技廳重大、重點項目合同、專利專有技術(shù)使用許可合同、關(guān)于酶制劑研發(fā)項目的合作協(xié)議、技術(shù)合同； 環(huán)境影響報 告書的批復(fù) 建設(shè)工程規(guī)劃許可證；建筑工程施工許可證 國有土地使用證； 纖維素酶項目備案批復(fù)；項目可研報告批復(fù) 生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展“十一五”規(guī)劃 關(guān)于召開“十一五”國家科技支撐計劃的通知 1關(guān)于公布農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化市級重點龍頭企業(yè)名單的通知 12 、產(chǎn)品購銷合同及包銷承諾書 1用戶使用報告書 1工程進度圖片 十 真實性聲明 農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化龍頭企業(yè) 吉林市科大實用技術(shù)開發(fā)有限公司 年產(chǎn) 15000噸基因重組纖維素酶系列產(chǎn)品項目 4 項目 資金申請報告 基因重組纖維素酶系列產(chǎn)品項目是吉林市政府、吉林高新 技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)重點招商引資項目。 一 、項目建設(shè)的意義 和必要性 國內(nèi)外現(xiàn)狀及技術(shù)發(fā)展趨勢 20世紀(jì) 70年代以來，市場這只“看不見的手” 使 傳統(tǒng)的工業(yè)文明達(dá)到了鼎盛時期。運用生物工程技術(shù)，將使經(jīng)濟發(fā)展投入的資源少，利用率高，產(chǎn)出的產(chǎn)品或服務(wù)多，廢棄物少，因此，人類將對生物工程技 術(shù)產(chǎn)品的需求也將不斷增加，生物技術(shù)在產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中的作用也將不斷提高，生物工程技術(shù)創(chuàng)新將日益被重視，生物技術(shù)產(chǎn)品的市場將越來越廣闊。 提高 用戶 產(chǎn)品質(zhì)量、降低生產(chǎn)成本 采用該項目產(chǎn) 品，對提高我國紡織行業(yè)、飼料行業(yè)、中藥行業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本，增強產(chǎn)品的市場競爭能力具有重要作用。 因此，該項目對地方農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整，加快社會主義新農(nóng)村建設(shè)，拉動農(nóng)民致富，加快農(nóng)村小康社會進程具有積極意義。 有利于資源再利用 、 發(fā)展循環(huán)經(jīng)濟 、提高資源經(jīng)濟價值 玉米及其它糧食秸稈多年以來一直作為廢棄物或燃料，其經(jīng)濟價值幾乎趨于零。 據(jù) 不完全 統(tǒng)計 ，國內(nèi)市場纖維素酶年需求大約 12 萬噸以上， 05年至 06 年該類產(chǎn)品年需求增幅為 38％；國際市場年需求大約 40 萬 8 噸，主要集中在歐美地區(qū)，占國際市場總消耗量的 70％，而且需求量正在以每年 8％的速度增長。 啤酒行業(yè)： 我國年產(chǎn)啤酒 3500萬噸左右，需大麥或小麥 160萬噸，按每噸添加 ，啤酒復(fù)合酶年用量 萬噸左右，其中纖維素酶添加量為 2萬噸左右。 產(chǎn)品銷售 酶制劑生產(chǎn)廠家一般不直接面對終端用戶，只面對銷售代理商。 二、項目技術(shù)基礎(chǔ) 項目成果來源及知識產(chǎn)權(quán)情況 科大公司與中國科技大學(xué)易元生物技術(shù)有限公司合作，取得了基因重組纖維素酶原始菌株構(gòu)建技術(shù)和菌株的使用權(quán)（詳見附件《專利的專有技術(shù)使用合同》）。 中試及小規(guī)模生產(chǎn)樣品已交付用戶 使 用，用戶已出具使用報告（詳見《 寧夏夏盛果汁果酒酶有限公司傳真函 》） 。配套設(shè)備及 GMP 裝飾工程完工后即可投入生產(chǎn)。 技術(shù)或工藝特點以及與現(xiàn)有技術(shù)或工藝比較所具有的優(yōu)勢 技術(shù) 原理 纖維素酶 11 自然界中纖維素的降解需要內(nèi)切 葡聚糖酶和外切葡聚糖酶共同作用。協(xié)同作用其作用順序不是絕對按各酶的功能也不是簡單固定的。這一新興技術(shù) 已 被證明為目前能精確的修飾基因組的最有效方法，從理論上講它將使人類能按設(shè)計對極其復(fù)雜的細(xì)胞基因組結(jié)構(gòu)進行定點、定量的改變，從而定向的改變細(xì)胞的遺傳結(jié)構(gòu)和 特征。但是這一體系表達(dá)率低，產(chǎn)生的酶多數(shù)不能分泌到胞外。據(jù)報道 ( Seiboth et )，當(dāng) CBH II 基因缺失時，會影響纖維素酶系其它酶的表達(dá)，而缺失 CBH I， EG III 等基因時，只影響自身的表達(dá)。 由于木霉 菌 屬于半知菌，缺乏有性階段，對其雜交育種有一定困難。 本成果采用先進的分子生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建成功高活力纖維素酶工程菌體，超過國內(nèi)目前使用的生產(chǎn)菌體的產(chǎn)酶能力，達(dá)到 了 國際先進水平。 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 麥芽汁液體培 養(yǎng)基 pH ， 30℃，220r/min 培養(yǎng) 24h。 PCR循環(huán)條件：預(yù)變性 94℃ 3min， 94℃ 變性 50s， 51℃ 復(fù)性 50s，72℃ 延伸 1min20s， 35 個循環(huán)后再延伸 8min。 16 重組質(zhì)粒載體 pUTCE 的構(gòu)建 將 pUTCBH 質(zhì)粒載體在用 EcoR V 限制性內(nèi)切酶消化，產(chǎn)生的 3’粘性突 出末端用 Klenow酶補平并將其回收純化，與 PKI A 片段以合適的比例建立反應(yīng)體系，轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5a，獲得具有 PKI A 啟動子的重組質(zhì)粒載體 pUTCE。基因重組纖維素酶菌株構(gòu)建是 863計劃蛋白質(zhì)基因重組技術(shù)的延續(xù)。 美國杰能克公司產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性在 55℃以下，該 公司產(chǎn)品的熱穩(wěn)定性可達(dá) 85℃。 該項目是我國第一個采用有自主知識產(chǎn)權(quán)的基因重組工程菌株進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的項目，對提升我國 19 酶制劑行業(yè)總體水平，提高我國酶制劑行業(yè)和國外企業(yè)的競爭能力具有積極的意義。 建設(shè)的主要內(nèi)容 項目 建設(shè) 組成表 序號 建（構(gòu)）筑物名稱 建筑面積 (m2) 層數(shù) 備注 1 原料處理間 592 4 2 層 2 生產(chǎn)綜合樓 3749 4 新建 制種間 發(fā)酵車間 干躁車間 提取精制 車間 3 包裝車間 906 4 34 層 4 成品庫 906 4 12 層 5 機 (電、儀 )修車間 150 1 新建 6 污水處理站 60 1 新建 7 鍋 爐房 400 1 新建 8 車庫 300 1 新建 9 原輔材料庫 592 1 2 層 10 地中衡 66 1 新建 20 11 蓄水池 800m3 新建 12 水處理站 100m3 新建 13 變電室 200m3 新建 14 綜合辦公樓 3254 4 12 層 15 研發(fā)中心 5500 4 34 層 16 中試中心 1184 4 34 層 17 收發(fā)室 20 1 新建 18 廠區(qū)道路 1150 1 新建 19 廠區(qū)圍墻 700m 1 新建 20 電動大門 2 扇 1 新建 21 廠 區(qū)綠化 2200 1 新建 產(chǎn)品方案 序 號 名 稱 規(guī) 格 年 產(chǎn) 量 備 注 1 纖維素酶粉 噸 10000 2 纖維素酶液 噸 5000 產(chǎn)品規(guī)格及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 纖維素酶產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)表 項目 液體劑型 固體劑型 食品級 工業(yè)級 b 食品級 工業(yè)級 b 總酶活力u/g 或u/mL FPA 300 CMCADNS 20xx CMCAVIS 500 pH (25℃ ) ^ a 食品級產(chǎn)品也可用作飼料添加劑 .用作飼料添加劑的纖維素酶制劑還應(yīng)符 合其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)的要求 b工業(yè)級產(chǎn)品不得用于食品工業(yè)及飼料添加劑 (食用酒精和蒸餾酒類除外 ). c可根據(jù)需要任意標(biāo)注一種酶活 . 21 衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 纖維素酶的衛(wèi)生指標(biāo) 項目 液體劑型 固體劑型 重金屬 (PA Pb 計 ),mg/kg ≤ 食品級 工業(yè)級 食品級 . 工業(yè)級 鉛 ,mg/kg ≤ 30 30 砷 ,mg/kg ≤ 5 5 菌落總數(shù) ,cfu/g ≤ 5 104 5 104 大腸菌群 ,MPN/t ≤ 3 103 3 103 沙門氏菌 (25g 樣 ) 不得檢出 不得檢出 a 食品級產(chǎn)品也可用作飼料添加劑 .用作飼料添加劑的纖維素酶制劑還應(yīng)符合其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)的要求 b工業(yè)級產(chǎn)品不得用于食品工業(yè)及飼料添加劑 (食用酒精和蒸餾酒類除外 ). c可根據(jù)需要任意標(biāo)注一種酶活 . 采用的工藝技術(shù)路線與技術(shù)特點 工藝流程簡圖 種子制備 → 一級種子培養(yǎng) → 二級種子培養(yǎng) 原 料 處 理 → 發(fā) 酵 → 過 濾 → 濃 縮 → 配 制 → 包 裝 → 入庫 氣流 干燥 噴霧造粒 流化床干燥 粉