生化分離工程_蘇海佳_第三章細(xì)胞破碎-全文預(yù)覽
【正文】 缺點(diǎn) 5. 胞內(nèi)產(chǎn)物的選擇性釋放 細(xì)胞完全破碎的缺點(diǎn)：所有胞內(nèi)的蛋白質(zhì)全部釋放出來，粘度增加，雜質(zhì)增加，給后面分離純化帶來困難。 特點(diǎn)： 缺點(diǎn)：存在著高鹽濃度對產(chǎn)品污染問題。 缺點(diǎn)：費(fèi)用高，時間長，多用于原生質(zhì)體 自溶作用是酶溶的另一種方式，通過調(diào)節(jié)溫度，PH或添加有機(jī)溶劑等激活劑，誘使細(xì)胞產(chǎn)生溶解自身的酶的方法，稱為自溶。 化學(xué)滲透法的優(yōu)點(diǎn)：避免大量細(xì)胞碎片，核酸留在胞內(nèi)，處理后，溶液很容易澄清，簡化后處理步驟，簡單的攪拌容器代替了機(jī)械破碎設(shè)備。如 Ecoli； 原因：二價陽離子，尤其是 Mg2＋對革蘭氏陰性菌細(xì)胞被膜以外層膜的穩(wěn)定作用是重要的， EDTA的螯合作用導(dǎo)致外層膜不穩(wěn)定或去除。 缺點(diǎn)： pH=11－ ，使蛋白酶失活，常伴隨著蛋白的變性和降解。 空化作用 機(jī)械作用 熱效應(yīng) 處理少量樣品時操作方便，液體損傷量少，破碎率高。 細(xì)胞破碎僅發(fā)生在與撞擊板撞擊的一瞬間，細(xì)胞破碎均勻，可避免細(xì)胞反復(fù)受力發(fā)生過度破碎的現(xiàn)象。 優(yōu)點(diǎn)： 撞擊破碎 原理：將細(xì)胞冷凍可使其成為剛性球體，降低破碎的難度。 可采用間歇式與連續(xù)操作。 不同菌種，不同生長期以及不同培養(yǎng)條件。 1. 高壓勻漿法（ highpressure homogenization） 原理： 利用高壓迫使細(xì)胞懸浮液通過針形閥，由于突然減壓和高速撞擊造成細(xì)胞破裂，在高壓勻漿器中，細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切、碰撞和由高壓到常壓的突變，從而造成細(xì)胞壁的破壞，細(xì)胞膜隨之破裂，胞內(nèi)產(chǎn)物得到釋放。 就是使細(xì)胞壁和細(xì)胞膜受到不同程度的破壞 (增大通透性 )或破碎，釋放其中的目標(biāo)產(chǎn)物。 例如，面包酵母的細(xì)胞壁厚約 70nm。 ?革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁比革蘭氏陰性菌堅固，較難破碎。短肽接在 N胞壁酸上，相鄰的短肽交叉相連，形成網(wǎng)狀。 目標(biāo)產(chǎn)物就是細(xì)胞本身，如面包酵母。Chapter 3 Cell Disruption 第三章 細(xì)胞破碎 微生物的代謝產(chǎn)物 多數(shù)情況下，抗生素，胞外酶，一些多糖，氨基酸等目標(biāo)產(chǎn)物存在于在發(fā)酵液中。 脂類和一些抗生素也是包含在生物體中 。1 細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成 1. 細(xì)菌的細(xì)胞壁 所有的細(xì)菌細(xì)胞壁由堅固的骨架 —— 肽聚糖組成 肽聚糖由聚糖鏈借短肽交聯(lián)而成，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞有一定的形狀和強(qiáng)度； 短肽一般由 45個氨基酸組成，常含有 D氨基酸與二氨基庚二酸； 聚糖鏈由 N乙酰葡萄糖胺和 N乙酰胞壁酸交替
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