生化分離工程_蘇海佳_第三章細胞破碎-免費閱讀
【正文】 原因：例如利用珠磨法破碎酵母細胞時，各種酶的釋放速度不同，靠近細胞膜和細胞壁的酶先釋放，細胞內(nèi)部或細胞器內(nèi)后釋放。 適用于易破碎的細胞，和細胞壁預(yù)先受到酶處理的細胞，及合成受抑制而強度減弱的細胞，如動物細胞和革蘭氏陰性菌。如： SDS等 作用是溶解蛋白質(zhì)和擾亂蛋白－脂界面。 pH= 20－ 30min可導(dǎo)致細胞溶解。將凍結(jié)的微粒子送入破碎室，高速撞擊撞擊板，使凍結(jié)的細胞發(fā)生破碎。 原理：細胞懸浮液與玻璃珠（或石英砂，或氧化鋁）一起高速攪拌，研磨使細胞達到某種程度破碎， 2. 珠磨法（ Bead milling） 作用力：剪切力層之間的碰撞和磨料的滾動 WSK臥式高效全能珠磨機 ZM系列臥式密閉珠 (砂 )磨機 兩種情況下，細胞破碎動力學(xué)可近似表示為： tkl Sn ???1 1QVt ?t： 為細胞懸浮液在破碎室內(nèi)的平均停留時間 其中 V 為懸浮液體積 m3， Q為懸浮液流量 m3/S， S為破碎率， k為破碎速率常數(shù)，與許多因素有關(guān)。 機械法破碎特點 機械破碎主要的方法有珠磨法、高壓勻漿法、撞擊破碎法和超聲波等方法。 酵母的細胞壁 組成：由葡聚糖、甘露聚糖和蛋白質(zhì)構(gòu)成，比革蘭氏陽性菌的細胞壁厚，更難破碎。1 細胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成 1. 細菌的細胞壁 所有的細菌細胞壁由堅固的骨架 —— 肽聚糖組成 肽聚糖由聚糖鏈借短肽交聯(lián)而成，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使細胞有一定的形狀和強度； 短肽一般由 45個氨基酸組成，常含有 D氨基酸與二氨基庚二酸； 聚糖鏈由 N乙酰葡萄糖胺和 N乙酰胞壁酸交替通過 ?（ 14）糖苷健連接而成。Chapter 3 Cell Disruption 第三章 細胞破碎 微生物的代謝產(chǎn)物 多數(shù)情況下，抗生素，胞外酶，一些多糖，氨基酸等目標產(chǎn)物存在于在發(fā)酵液中。短肽接在 N胞壁酸上，相鄰的短肽交叉相連，形成網(wǎng)狀。 例如，面包酵母的細胞壁厚約 70nm。 1. 高壓勻漿法（ highpressure homogenization） 原理： 利用高壓迫使細胞懸浮液通過針形閥，由于突然減壓和高速撞擊造成細胞破裂，在高壓勻漿器中，細胞經(jīng)歷了高速造成的剪切、碰撞和由高壓到常壓的突變，從而造成細胞壁的破壞，細胞膜隨之破裂，胞內(nèi)產(chǎn)物得到釋放。 可采用間歇式與連續(xù)操作。 細胞破碎僅發(fā)生在與撞擊板撞擊的一瞬間，細胞破碎均勻，可避免細胞反復(fù)受力發(fā)生過度破碎的現(xiàn)象。 缺點： pH=11－ ，使蛋白酶
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