【正文】 的不良趨勢(shì)，必須調(diào)查確認(rèn)潔凈室內(nèi)分離到的微生物對(duì)潔凈室內(nèi)使用的消毒劑的敏感性。許多 常見的消毒劑對(duì)孢子無效 （如70%的異丙醇對(duì)芽孢桿菌 Bacillus upp的芽孢無效）。 ?消毒劑 /消毒方法的 適應(yīng)性、有效性和局限性 都必須評(píng)詁。 ? 趨勢(shì)分析報(bào)告必須包括 每個(gè)地點(diǎn)、每個(gè)班次、每個(gè)房間、每個(gè)操作人員和其他參數(shù)產(chǎn)生 的數(shù)據(jù)。使用檢測(cè)結(jié)果的 平均值會(huì)掩蓋 不可以接受的位置的情況。可以 參考 歷史數(shù)據(jù)庫、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)、潔凈區(qū)確認(rèn)和清潔衛(wèi)生處理研究的數(shù)據(jù)來建立這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。在缺少任何不利趨勢(shì)的信息前提下，單一超出 行動(dòng)限 的情況都必須 進(jìn)行調(diào)查和評(píng)詁 ，并決定是否需要采取任何合適的 補(bǔ)救措施 。關(guān)鍵區(qū)域檢出微生物污染的結(jié)果 不一定 要 成批拒收 ，必須 立即 對(duì)操作運(yùn)行信息和數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)查，必須注意有可能存在的極低概率的 假陽性 情況發(fā)生?？梢栽谥匾牟僮骰顒?dòng)或是生產(chǎn)中產(chǎn)品暴露位置進(jìn)行 空氣和表面取樣 。取樣點(diǎn)位置必須以書面程序說明，取樣時(shí)間、頻率和位置 都必須在無菌工藝設(shè)施的監(jiān)控環(huán)境內(nèi)用科學(xué)合理的方法進(jìn)行。此程序不但為無菌工藝環(huán)境質(zhì)量提供了有意義的信息，還為相鄰的潔凈區(qū)域提供了環(huán)境變化的趨勢(shì)數(shù)據(jù)。哪些滅菌器或 SIP操作中需要人工手動(dòng)控制的閥門操作，都必須在制造規(guī)程和批記錄中記錄下來。D值測(cè)定可以使用獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)定完成。測(cè)定滅菌周期參數(shù)的設(shè)備都必須進(jìn)行日常校驗(yàn)。必須證明滅菌方法可以達(dá)到使 微生物下降至 106或是更好的情況 。 ? 熱穿透試驗(yàn)必須使用已經(jīng)建立的 負(fù)載模式 進(jìn)行 評(píng)詁 ，以確定不能有效達(dá)到滅菌致死率的熱物質(zhì)穿透難度。 ? 驗(yàn)證研究必須可以證明 滅菌周期的有效性 ，且必須進(jìn)行周期性再確認(rèn)。靠近無菌產(chǎn)品的表面，只要有理由懷疑其有潛在污染的可能，都必須保持無菌狀態(tài)。無菌過濾器必須在 每批 生產(chǎn)后更換，對(duì)那此可以重復(fù)使用的情況必須進(jìn)行合理解釋，其無菌過濾驗(yàn)證必須包括最大的 可處理的批數(shù)。 ? 可以影響過濾器性能的因素包括： ? 被過濾物質(zhì)的黏度和表面張力； ? PH值 ； ? 被過濾物質(zhì)或配方組分和過濾器的相容性； ? 過濾壓力； ? 過濾速度； ? 最大使用時(shí)間； ? 過濾溫度； ? 滲透性（重量滲透濃度表示）； ? 液壓減震效果。 因?yàn)檫^濾器膜上通常有些孔徑比一般孔徑要大，有可以使微生物通過的風(fēng)險(xiǎn)，此風(fēng)險(xiǎn)隨微生物數(shù)量的增加而增大，因此挑戰(zhàn)試驗(yàn)的微生物數(shù)量非常重要。無菌過濾驗(yàn)證中必須包括模擬最差生產(chǎn)條件下的 微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn) 和 過濾器完整性測(cè)試 。對(duì)于這樣的情況必須有支持的文件和合理的解釋。對(duì)于一條生產(chǎn)線上重復(fù)發(fā)生試驗(yàn)污染事故，無論是否符合接受標(biāo)準(zhǔn)，都是一個(gè)信號(hào)表明無菌工藝生產(chǎn)線的不好趨勢(shì)，必須確認(rèn)問題、改正和再驗(yàn)證。灌裝試驗(yàn)的總數(shù)和被污染的數(shù)目沒有直接比例關(guān)系。 ： ? 工藝模擬的運(yùn)行必須在 QC部門 的監(jiān)控下進(jìn)行，污染單元的數(shù)量必須和灌裝試驗(yàn)?zāi)M的時(shí)間和活動(dòng)相一致。千萬不要在灌裝試驗(yàn)中移出比實(shí)際生產(chǎn)中更多的單元。為方便目測(cè)觀察微生物生長情況，F(xiàn)DA建議采用的容器為透明色。 ? 培養(yǎng)基單元必須在足以檢測(cè)到最難生長的微生物條件下培養(yǎng)，根據(jù)以下思想選定培養(yǎng)條件： －－培養(yǎng)溫度必須符合生物載量和環(huán)境中菌種的生長，一般不超過 20~35℃ （通常菌種都有規(guī)定的培養(yǎng)溫度范圍），培養(yǎng)時(shí)必須維持在目標(biāo)溫度的 177。環(huán)境監(jiān)控和無菌測(cè)試的菌種必須用于促生長的挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，菌種的接種單位必須 100CFU。在 SOP允許的 “壓力條件”（如最大工人數(shù)和提高的運(yùn)行水平） 內(nèi)，灌裝試驗(yàn)涵蓋這些挑戰(zhàn)是非常重要的，也支持了這些研究的有效性，此所謂的“壓力條件”不包括人為制造的極端環(huán)境條件（如將HVAC系統(tǒng)調(diào)整為最差條件）。 ?對(duì)于凍干操作， FDA建議使用不封閉的容器暴露在部分抽空的設(shè)備內(nèi)來模擬正常工藝，不需冷凍產(chǎn)品，必須小心操作確保培養(yǎng)基處于有氧狀態(tài)，以避免抑制潛在的微生物生長。 ?以 最大批量和運(yùn)行時(shí)間 基礎(chǔ)上灌裝試驗(yàn)是 最真實(shí)的模型 ，若采用任何其他的合適模型都必須進(jìn)行合理的解釋。任何可能影響無菌工藝性能的變更或事件都必須增加額外的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)來評(píng)詁。 ?必須有完整的批記錄，環(huán)境監(jiān)控記錄等支持這樣的模擬研究，必須書面定義條件的選擇原因。這個(gè)時(shí)間限制也可以防止上游的生物載量和內(nèi)毒素載量的增加。 六、生產(chǎn)時(shí)間限制 根據(jù) ： ?無菌工藝的每步操作都最好設(shè)定時(shí)間限制； ?時(shí)間限制必須包括：大批量產(chǎn)品的配制和滅菌時(shí)間間隔、過濾工藝時(shí)間間隔、產(chǎn)品暴露在生產(chǎn)線上的時(shí)間間隔、無菌設(shè)備 /容器 /密封件的保存時(shí)間限制等。 ? 無菌級(jí)別的過濾器和濕熱滅菌不能夠有效的去除內(nèi)毒素。藥物成分、容器 /密封件、儲(chǔ)存時(shí)間限制和制造設(shè)備都在內(nèi)毒素的控制范圍內(nèi)。 ? 設(shè)備適用性問題或購入的容器 /密封件質(zhì)量缺陷都會(huì)造成容器密封系統(tǒng)的不完整，如果危害是由于沒有及時(shí)檢出而造成的完整性破壞，必須立即改善這些系統(tǒng)。 對(duì)已建立供應(yīng)商質(zhì)量審計(jì)體系（ 定期測(cè)試 ）的合同制造商可以在外觀測(cè)試和對(duì)方 COA（檢驗(yàn) 證書）的基礎(chǔ)上接受容器 /密封件。 ? 為防止微生物滋生的污染，橡膠密封件滅菌后必須 徹底干燥 ，其含水量應(yīng)符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。容器的放置必須與實(shí)際生產(chǎn)相一致。 ?無菌制劑產(chǎn)品的容器具 /密封件清洗的最后一道清洗劑必須是符合 USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注射用水。過濾的藥液再進(jìn)行灌封或無菌結(jié)晶或凍干成粉末。如果使用了一個(gè)或多個(gè)含有微生物或細(xì)菌內(nèi)毒素的組分，則產(chǎn)品會(huì)被污染，因此對(duì)這些組分中的微生物載量和內(nèi)毒素指標(biāo)的確認(rèn)及建立合適的可接受限度非常重要。 ?對(duì)無菌操作人員的監(jiān)控目標(biāo)是 始終維持 在操作過程中保持手套和衣物的無污染狀態(tài)，單單取操作前的滅菌手套是不夠的，因?yàn)樵诤罄m(xù)的操作中微生物會(huì)重新繁殖。 ?操作人員是嚴(yán)重影響無菌產(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，必須建立高度預(yù)警且靈敏的人員監(jiān)控程序。一旦發(fā)現(xiàn)著裝有破損或損壞必須立即更換。 ） ?維持無菌物品和表面無菌狀態(tài)的人員操作技術(shù)有： ? 只使用無菌器具接觸無菌物料，為防止物料間的交叉污染，應(yīng)根據(jù)需要及時(shí)更換無菌器具；在更衣后無菌手套必須經(jīng)常消毒或更換，應(yīng)避免將衣物和手套直接接觸無菌產(chǎn)品和容器； ? 人員的移動(dòng)必須緩慢，必須有目的的移動(dòng)，應(yīng)避免因漫無目的的移動(dòng)而造成的單向氣流混亂； ? 為避免無菌產(chǎn)品受污染，應(yīng)確保操作人員的身體處于單向氣流之外； ? 操作人員進(jìn)行的必需的無菌操作不得危害產(chǎn)品的無菌性，應(yīng)避免垂直操作打亂單向氣流，應(yīng)避免在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)說話；（ 通常從側(cè)面的操作可以確保無菌產(chǎn)品周期的無菌條件 ）。 ? 因非正常情況導(dǎo)致的空氣系統(tǒng)或其他設(shè)施的停機(jī)，以及建造活動(dòng)對(duì)設(shè)施的影響等必須在偏差和變更控制系統(tǒng)中加以說明解釋，必須有書面的程序說明在停機(jī)后如何恢復(fù)正常運(yùn)行。 ? 建造潔凈區(qū)的材料必須容易清洗和消毒，如無縫和弧形設(shè)計(jì)的墻角、平整堅(jiān)硬的頂棚 /墻壁 /地板、不藏塵 HEPA框架等。 ? 如果無菌工藝區(qū)或軋蓋前房間內(nèi)有帶塞小瓶（即未軋蓋的產(chǎn)品），必須有局部保護(hù)措施防止產(chǎn)品受到污染，使用儀器在線檢測(cè)裝配不適當(dāng)?shù)娜右蕴峁╊~外的質(zhì)量保證（ 待軋蓋產(chǎn)品在運(yùn)輸過程中的塞子突起 ）。 ? 無菌工藝中所用的設(shè)備必須有適當(dāng)?shù)脑O(shè)計(jì)防止人為的干擾和打斷（ 增加污染的危險(xiǎn)因素 ）。如果檢測(cè)為非單向氣流或是有副作用的氣流模式，都必須更換 HEPA。當(dāng)空氣潔凈度不合格或可能引起墻壁或屋頂結(jié)構(gòu)變化的設(shè)施翻修或培養(yǎng)基灌裝失敗或藥物無菌測(cè)試失敗時(shí)，必須 加做額外 的檢漏測(cè)試。 ? 取樣速度和距離 ： 每分鐘 1立方英尺 (－－ 中國驗(yàn)證指南的取樣速度為 3 ～ 5cm/s)，氣溶膠光度計(jì)的取樣口應(yīng)離濾器和邊框表面約 1～ 2英寸（ ～ －－ 中國驗(yàn)證指南的距離為 2 ～ 4cm ）。 HEPA的要求 ? HEPA的完整性必須維持無菌的生產(chǎn)條件，在安裝時(shí)必須做檢漏測(cè)試。 ? FDA規(guī)定對(duì)用于無菌產(chǎn)品的過濾器應(yīng)進(jìn)行 微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)、無菌過濾性能試驗(yàn)和完整性（起泡點(diǎn)）試驗(yàn)（使用前后）。 ? 對(duì)于低壓差的發(fā)生應(yīng)有報(bào)警裝置進(jìn)行監(jiān)控，任何的報(bào)警必須有記錄、任何的偏差必須調(diào)查。在高級(jí)別區(qū)和低級(jí)別區(qū)之間應(yīng)至少保持 10～ 15Pa的 正 壓差。 ? 支持區(qū)域的定義：用于制備、貯存或轉(zhuǎn)移非無菌組分、配方產(chǎn)品、中控物質(zhì)、設(shè)備、容器密封件的區(qū)域。應(yīng)控制區(qū)域中的紊流和靜置空氣的產(chǎn)生，因?yàn)樗鼈優(yōu)榭諝馕廴咎峁┝饲?。?對(duì)于 HEPA安裝在房間頂棚上的潔凈區(qū)，其塵埃粒子計(jì)數(shù)器應(yīng)放在 離地 ～ 1m處，采樣口朝上 。它們對(duì)懸浮粒子（個(gè) /m3）規(guī)定如下： 潔凈級(jí)別 靜態(tài) 動(dòng)態(tài) ≥ ≥5um ≥ ≥5um A 3500 0 3500 0 B 3500 0 350000 2023 C 350000 2023 3500000 20230 D 3500000 20230 未定義 未定義 ? 關(guān)鍵區(qū)域定義：無菌藥物和容器及密封件所暴露的環(huán)境區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必須可以維持產(chǎn)品在無菌的狀態(tài)（如無菌過濾和無菌灌封）。 ? 只有不適用終端滅菌處理的產(chǎn)品才考慮用無菌工藝過程。 ? 藥政框架－－本指南從屬于藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（ 21CFRparts210和 211）；對(duì)于生物制劑產(chǎn)品從屬于 21CFRparts600和 680的監(jiān)管，并對(duì)其無菌工藝做了增補(bǔ)的要求。無菌制劑工藝 cGMP指南 目錄 一、簡(jiǎn)介和框架 二、無菌制劑對(duì)環(huán)境、設(shè)施設(shè)備要求 三、人員要求 四、對(duì)組分和密封件要求 五、對(duì)內(nèi)毒素控制 六、對(duì)生產(chǎn)時(shí)間限制 七、對(duì)無菌工藝和滅菌方法驗(yàn)證 八、對(duì)實(shí)驗(yàn)室的控制 九、無菌測(cè)試要求 十、對(duì)批記錄的審核 十一、 附錄 附錄 （略） 附件 和封口操作前的工藝技術(shù) 十二、相關(guān)指南和術(shù)語（略） 一、簡(jiǎn)介和框架 ? 本無菌工藝 cGMP指南（ 2023－ 09）替代了 1987年的無菌工藝工業(yè)指南。 ? 本指南不具有任何的法律約束力。因此無菌工藝含有更多的工藝變量，各組成部分的滅菌方法也不盡相同，過程引入的偏差環(huán)節(jié)較多，其任何的人為操作都是潛在的污染源。 EU將潔凈區(qū)的級(jí)別劃分 為 A、 B、 C、 D四級(jí) ， 其中 A、 B為 100級(jí) （ A級(jí) 主用于 100級(jí)無菌區(qū)、 B級(jí) 主用于 100級(jí)潔凈區(qū)， C為 1萬級(jí)、 D為 10萬級(jí)。動(dòng)態(tài)檢測(cè)時(shí)的檢測(cè)距離為在氣流范圍內(nèi)離操作區(qū) ≤1英尺（ ） ? 塵埃粒子計(jì)數(shù)器的放置和采樣口的朝向必須合理，以獲得有效的樣品。 ? 應(yīng)采用能維持單向流的高效空氣清除關(guān)鍵區(qū)域的顆粒。 ? 關(guān)鍵區(qū)域的空氣監(jiān)測(cè)結(jié)果是最終沒有微生物的污染，如果發(fā)生則應(yīng)高度重視并調(diào)查。 ? 預(yù)防 污染的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于對(duì)不同操作區(qū)域間的有效隔離，應(yīng)確保潔凈區(qū)的空氣流以合適方式 從高級(jí)別區(qū) 流向相鄰的 低級(jí)別區(qū) 。如果壓差低于設(shè)定的最低限值，必須對(duì)無菌操作間的環(huán)境質(zhì)量進(jìn)行修復(fù)和再確認(rèn)。 上述材料常用作筒式過濾器的濾芯。 ? 在對(duì)無菌藥液過濾器的驗(yàn)證中除了完成上述三項(xiàng)試驗(yàn)外，還應(yīng)對(duì)過濾器的 溶出物檢查、過濾器的清潔度檢查及與藥液適應(yīng)性試驗(yàn) （具體方法參見中國 GMP驗(yàn)證指南中凍干粉針劑驗(yàn)證的有關(guān)內(nèi)容）。 ? 檢漏方法 ： DOP氣溶膠法和 PAO氣溶膠法 （ DOP－鄰苯二甲酸二辛脂、 PAO－聚 α烯烴） （ DOP法因?yàn)橛型蛔冃?，現(xiàn)國外已 w全部改用 PAO作為氣溶膠煙霧劑）。 ? 無菌工藝的 HEPA檢漏應(yīng)有適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔確認(rèn)，每年最少檢查 2次。其單向氣流速度的測(cè)定必須于距離過濾器表面約 6英寸（ ） 處進(jìn)行測(cè)試，或是在無菌操作關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)過濾器工作表面中心的確定距離內(nèi)測(cè)定。 －優(yōu)化人流物流，防止無必要的活動(dòng)發(fā)生； －設(shè)備的布局必須符合人體工程學(xué)的要求，優(yōu)化操作工的操作； －必須盡可能的減少操作工人數(shù)； －人流的設(shè)計(jì)必須盡可能限制人員進(jìn)出無菌工藝間的頻率； －必須盡量減少關(guān)鍵區(qū)域和一般潔凈區(qū)域或隔離器之間的傳遞次數(shù)； －必須限制在關(guān)鍵區(qū)域旁的活動(dòng)，以防止低質(zhì)量空氣的引入。例如：凍干工藝的半壓塞產(chǎn)品只能在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)轉(zhuǎn)移，設(shè)施設(shè)計(jì)必須確保灌裝生產(chǎn)線和凍干機(jī)在 Class100保護(hù)下，轉(zhuǎn)移和御載操作也必須受到相同級(jí)別的保護(hù)?？梢允褂秒p門或集成滅菌器確保低級(jí)別區(qū)到高級(jí)別區(qū)的正確合適的直接物流；使用氣閘室和聯(lián)鎖門控制無菌工藝設(shè)施內(nèi)空氣壓力，無菌制造區(qū)域入口處和其他無級(jí)別區(qū)的鄰近處必須設(shè)氣閘室；當(dāng)人員和物料從低級(jí)別