【正文】 OH339。PP539。ExoIII ca3HOP539。P539。P539。HOOH339。HO339。P339。P 539。HOHO在一定條件下， ExoIII不能作用 GC富集區(qū) (來自于 cDNA加尾 )dsDNA結構 :2)堿基釋放速度： CATG外切酶活性特點3)dsDNA， pH2.kD２） 甲基化酶的用途 抑制不同種限制酶的部分活性順序邊界重疊 抑制不同種限制酶的活性II型甲基化酶對限制酶活性的影響 CGA如： M.甲基化酶的種類與識別順序1.5.4.3.酶切位點與識別位點不一致，切點常在識別位點的一側， 1具有特異型核苷酸順序識別能力，但該順序不具有對稱結構。4.DNA重組限制酶的用途GGG2）切割位點的異同 KpnI2.定義：能識別相同序列但來源不同的兩種或多種限制 （四）、異源同序酶（isoschizomer，同裂酶）CI４）非互補的粘性末端3’GGG5’CCCGGG3’在進行 DNA重組時，應用限制酶同時切割目的基因和載體 DNA，使之產生相對的粘性末端，然后再將二者連接成重組 DNA分子HOG5’3’CTTAAP２） ５ ’端突起 ，個數為２或４個核苷酸 Pst I１） ３ ’端突起 ，個數為２或４個核苷酸TT5’G２）富含ＧＣ5’ＧＧＡＴＧ (Ｎ )93’GGCCN NotPuGG(A/T)CCPy BamHI1.HindⅢ — Haemophilus　例如： HindⅢ 　　前三個字母來自于菌種名稱H. influenzae， “ ｄ ” 表示菌系為ｄ型血清型； “Ⅲ” 表示分離到的第三個限制酶。1.上述三個系統(tǒng)中，只有 II型限制酶與甲基化酶具有相當高的核苷酸識別特異性，因而被廣泛用于基因工程中。III型 ： 修飾酶與Ｉ型酶相同， hsdＭ與 hsdＳ基因產物結合成一亞單位，限制酶是獨立存在的。specificity）位于染色體上，三個基因構成一個復合體，限制酶需要 ATP、Mg2+、 SAM（５ — 腺苷甲硫氨酸），無特異切割位點。I型 ： 由三個基因構成， hsdR； hsdM； hsdS（host核酸連接酶 — 用 于 DNA和 RNA的連接 DNA甲基化酶 — 用 于 DNA分子的甲基化 中藥化學組 ：中藥有效成分包括較單一的成分和多種成分世界轉基因作物大田釋放情況()轉基因作物特性 批準項數 所占比例抗除草劑 1297 %抗蟲 1046 %提高產品質量 886 %抗病毒 436 %改善農學性狀 211 %抗真菌病 208 %其他 303 %總計 4387 100%轉基因作物種植面積生物技術與傳統(tǒng)中藥中藥現代化 —— 核心是建立與現代基因學說相應的現代中藥理論現代中藥理論的建立 —— 確立中藥與基因表達的關系種植面積迅猛發(fā)展。1960元 /ug胰島素 回報很高。每一步都可能失敗，而前功盡棄高回報 :生物制藥產業(yè)化特點高技術 ：高層次人才，高新技術手段，多學科滲透高投入 ：在國外，一個生物藥品平均要投入 1~3億美元，并隨著開發(fā)難度的增大 ,有逐步增高的趨勢長周期 ：國際上，一個新的生物藥品需要 6~8年時間高風險 :環(huán) 境生物技 術 重點用于清除危 險廢 棄物 液體發(fā)酵、固體發(fā)酵、固定化培養(yǎng)、流式發(fā)酵發(fā)酵技術設備生物技術的應用領域醫(yī)藥： 傳統(tǒng)的酶工程主要是指天然酶制劑在工業(yè)上的大規(guī)模生產與應用。蛋白質功能預測和分析蛋白質晶體結構分析 蛋白質工程主要內容主要目標從這些篩選出來的受體細胞克隆，提取出已經得到擴增的目的基因，供進一步分析研究使用。二、基因工程的主要內容或（步驟）從復雜的生物有機體基因組中，經過酶切消化或 PCR擴增等步驟，分離出帶有目的基因的 DNA片段。重組 DNA技術 (rebination分子克隆 (molecular 利用 DNA體外重組或 PCR擴增技術從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經過一系列切割，加工修飾，連接反應形成重組 DNA分子，再將其轉入適當的受體細胞，以期獲得基因表達的過程 .基因工程 (gene engineering)常和以下名稱混用遺傳工程 (geic重組體的篩選第七節(jié) 基因工程中的工具酶第三節(jié) 基因工程的概念及其主要內容第二節(jié) 基因與載體的重組與導入受體細胞第六節(jié) cloning)。manipulation)。作名詞時指含有某目的 DNA片段的重組 DNA分子或含有該重組分子的無性繁殖系 .作動詞時是指基因的分離與重組過程。從大量的細胞繁殖群體中，篩選出獲得了重組 DNA分子的受體細胞克隆。大學將人肥胖基因出售 美元 （ 1995年 3月）Amgen公司將 FKBP神經免疫因子配體轉讓達 （ 1997年）Millennium公司以 向 Bayer公司轉讓 225種基因的開發(fā)權（ 1998年 9月）蛋白質工程的概念在基因工程技術對編碼蛋白質的基因的了解基礎上，對蛋白質的氨基酸序列、結構和功能進行分析，進而通過對蛋白質的結構、氨基酸序列和翻譯后的修飾等手段改變甚至創(chuàng)造出新的和更有效的蛋白質。目標就是通過工程化技術大規(guī)模生產和轉化相應原料成為有用物質的技術。 傳統(tǒng)微生物發(fā)酵、基因工程菌發(fā)酵、動物細胞培養(yǎng)、植物細胞培養(yǎng)發(fā)酵類型：環(huán)境污染治理；廢物利用；污染物生物降解生物技術產業(yè)化生物技 術產業(yè) ： 利用 細 胞和生物分子 進 行 藥品、 農產 品生 產 開 發(fā) 和 環(huán) 境治理的 產業(yè) ，該產業(yè) 技 術 由醫(yī) 藥 生物技 術 、 農業(yè) 生物技術 和 環(huán) 境生物技 術 共同 組 成醫(yī) 藥 生物技 術 重點攻克癌癥、艾滋病、老年癡呆癥、帕金森病、心 臟 病、糖尿病等危害人 類 的 頑 疾農業(yè) 生物技 術 著眼于提高 農產 品的 產 量和質 量。一個新藥品的開發(fā)，經過一系列的程序 研發(fā)、中試、動物實驗、 I~III期臨床實驗，上市和嚴格的藥政監(jiān)督管理。開發(fā)成功一個新的生物藥品 ,1072元 /ug白細胞介素 2410元 /ug巨細胞粒細胞集落刺激因子 產品數量 遺傳疾病 9532基因治療人數情況生物技術產業(yè)化 — 農業(yè)領域已有 35個科 120多種植物獲得轉基因植物，一些重要的農作物獲得商品化的轉基因品種。植物反應器生產稀有蛋白。中藥基因組 —— 利用現代生物技術研究分析中藥對人體（細胞）基因表達（蛋白質）的影響。中藥化學組 —— 利用現代儀器分析技術分析有效成分及其藥物代謝、動力學。核酸聚合酶 — 用 于 DNA和 RNA的合成 限制酶的用途（一）、限制修飾系統(tǒng)的種類1.DNAand3.命名 ： 限制酶由三部分構成，即菌種名、菌系編號、分離順序。(II)— Streptomyces１）識別４ 8個相連的核苷酸NGATCN； AvaIINN3’ＣＣＴＡＣ (Ｎ )135’EcoRITTG5’2.5’CTGCAG3’3’GACGTC5’3’CTTAAG5’粘性末端能與另一個相同的粘連末端相連接，任何兩個具有相同識別位點的 DNA分子經限制酶切割后能夠重新連接成新的重組 DNA分子。平齊末端SmaIGGG3’ａ）切點在識別順序之外的，如： FokI Fok3’CCTAC(Ｎ )135’ｂ）能識別簡并順序的，如： AvaIAvaI5’CPyCGPuG3’CCCGAG。1