基因工程制藥技術-全文預覽
【正文】 生干擾素制備工藝： Sendai病毒誘導人白細胞干擾素生產工藝路線（ 1）l1989年： IFNαn3/Alferon，批準上市l(wèi)產量低： 1g從供應量和需要量（菌體生長、質粒穩(wěn)定性、產物積累）二個方面考慮，使之需氧不超過設備的供氧能力考慮溶氧對質粒穩(wěn)定性的影響：調節(jié)攪拌轉速和通氣量四 重組人干擾素生產工藝l 概念：（ interferon， IFN）? 機體受到病毒感染時，免疫細胞產生的一組結構類似、功能接近的細胞因子l 功能：干擾病毒在細胞內的繁殖l 天然干擾素分類：? ?? I干擾素： IFNα、 IFNβ、 IFNτ、 IFNε、 IFNω? ?? II干擾素： IFNγl 上市重組干擾素 :乙酸 的產生使菌體生長速率下降，也抑制基因表達。溫度控制pH值對發(fā)酵的影響細菌喜歡偏堿性：大腸桿菌適宜 pH為 ～ ，真菌喜歡微酸性：酵母適宜 pH為 ～ 。? 甲基營養(yǎng)型酵母：加入甲醇進行誘導l溫度l溶解氧lpH大腸桿菌和釀酒酵母生長最低溫度為 10℃大腸桿菌生長最適溫度為 37℃ ，最高溫度為 45℃ 。l發(fā)酵培養(yǎng)過程中質粒容易丟失，使之成為宿主菌為了保證質粒的穩(wěn)定性，不丟失 ， 根據質粒上的營養(yǎng)缺陷或選擇性標記基因，添加或缺陷選擇劑。l不同工程菌對氮源利用能力差異很大，具有很高的選擇性。l濃度稍高后就表現(xiàn)出底物抑制作用。但這種方法能獲得相當量的重組水蛭素，所以極大地推動了水蛭素的藥理、臨床等方面研究工作的深人開展。基因工程酵母的應用? 1981年 Hitzman等：酵母表達人干擾素l激素類： 6種人胰島素及 1種突變體，尿酸水解酶和水蛭素 ； 細胞因子： GMCSF和血小板衍生生長因子l多肽類：高血糖素l2種乙肝疫苗等。? 培養(yǎng)條件簡單、大規(guī)模培養(yǎng)技術成熟。在特定條件下才產生子囊孢子。2融合蛋白、 OspA脂蛋白（疫苗）等PEG? 聚乙二醇（ PEG）是中性、無毒且具有獨特理化性質和良好的生物相容性的高分子聚合物，也是經 FDA批準的極少數(shù)能作為體內注射藥用的合成聚合物之一。裂殖。菌落原位雜交的原理 鑒定方法? 菌落 PCR： 是否 含有目標基因? 載體大小：電泳檢測? 酶切鑒定：插入 片段大小 及插入方向? 測序確證：目標基因的序列準確無誤，閱讀框架通讀二 基因工程菌的構建? 基因工程菌： 微生物為操作對象，通過基因工程技術獲得的表達外源基因或過量或抑制表達自身基因的工程生物體。 能使人工底物 Xgal變成藍色 , 產生藍色菌斑或菌落。這種載體適用于可編碼 β半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主細胞。（ 1） 遺傳學方法? A. 抗生素篩選法? a. 單抗生素篩選? 大多數(shù)克隆載體帶有抗生素抗性基因，如氨芐青霉素（ ampicillin, Amp）、 四環(huán)素 (tetracycline,Tet)、 卡那霉素 (kanamycin, Kan)抗性基因。TrisHCl,Taq聚合酶，耐高溫l緩沖溶液： 50l外源基因表達盒 (操縱子模型 )：目標基因 PCR定位克隆PCR循環(huán)PCR擴增的反應體系組成l模板 DNA：目標序列 ,100－ 10vector在質粒載體的基礎上，在多克隆位點處插入外源基因表達盒所構成。l脫氧核苷酸： 4種 dNTP,即dATP,dCTP,dGTP,dTTPlDNA聚合酶 :mM 所用的方法主要有遺傳學方法、免疫
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