【正文】 PP5? 3?N N N N NP5? 3?+AdPP +[?AAAADNA)。transcriptase)chain切口平移反應(yīng)，制備高比活探針； 5′→3′DNA 聚合酶活性216。DNA聚合酶167。polymerases）能合成 DNA的酶稱 DNA聚合酶。甲基化酶與相關(guān)的 II型限制性內(nèi)切酶組成，它們識別相同序列，發(fā)揮不同功能。構(gòu)建基因組圖譜和文庫限制與修飾系統(tǒng)（ pGCT5′II型限制性內(nèi)切酶的用途：I3′AGC5′TCGp5′TCG以 Nru　 PstI為例：IG5′OHAATTC3′AATTC3′３ ’－突出粘性末端限制性核酸內(nèi)切酶三種切口 ?產(chǎn)生 5′突出粘性末端（ stickyend三種不同的切口：平末 (blunt識別序列４～６個(gè)堿基， 4個(gè)核苷酸序列，則每４ ４ （２５６）個(gè)堿基出現(xiàn)一個(gè)靶序列； 6個(gè)核苷酸序列出現(xiàn)的間隔是 4kb, 第二、三字母（小寫，斜體），示該酶微生物種 名；216。bp)、甲基化、 ATP酶和 DNA解旋；vIII型：內(nèi)切 (識別位點(diǎn)周圍 2530endonuclease）以 RNA為模板合成互補(bǔ)的 cDNA鏈催化形成磷酸二酯鍵連接成一個(gè)整體(alkalineterminal(reverseDNA聚合酶 I限制性內(nèi)切核酸酶 基因結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)功能及調(diào)控研究的基礎(chǔ)；167。（二）重組 DNA技術(shù)的意義167。technology)： 是指實(shí)現(xiàn)基因（或 DNA）克隆所采用的方法及技術(shù)路線等。cloning)，基因克?。?gene獲取這一群體的過程稱為 克隆化（cloning）DNA克隆 (DNA有人提出人基因組編碼的約 6萬種蛋白質(zhì)是從幾千個(gè)獨(dú)立的外顯子混編而來。Exon轉(zhuǎn)座子組成： 反向重復(fù)序列轉(zhuǎn)座酶編碼基因抗生素抗性等有用的基因IR IRTransposase結(jié)構(gòu)外，還帶有抗性或其他標(biāo)記基因。由轉(zhuǎn)座酶（ transposase）、一個(gè)分離的反向重復(fù)序（invertedsequence， IS轉(zhuǎn)座重組分類：167。 由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移或重排。signal12/23間隔序列 RAG1CACAGTG此重排的重組酶基因 ragACAAAAACCCACAGTGspacerheptamernonamer,areelementsimmunoglobulintovariableregionaboveConsensusforofareTherightisoftheongermlinesegments.ofVLV hin h2 阻遏基因 rh1H片段倒位（二）細(xì)菌的特異位點(diǎn)重組沙門氏菌 H片段 特異位點(diǎn)重組 (倒位 )決定鞭毛相轉(zhuǎn)變DNAH片段216。BOP180。factor,integrase,attPattBE. coli DNAInt, IHF Int, IHF , Xis? DNA噬菌體 DNA的整合和切除att: terminal拼接重組體 位點(diǎn)特異性重組： 由整合酶催化，在兩個(gè)DNA位點(diǎn)特異的短序列之間發(fā)生的切割和連接反應(yīng) :l?5180。3180。3180。5180。（見模型圖 右 邊產(chǎn)物）： 片段重組體Holliday模型同源重組步驟① 兩個(gè)同源染色體 DNA排列整齊② 一個(gè) DNA的一條鏈斷裂、并與另一個(gè) DNA對應(yīng)的鏈連接，形成 Holliday中間體③ 通過分支移動產(chǎn)生異源雙鏈 DNA④ Holliday中間體切開并修復(fù)，形成兩個(gè)雙鏈重組體 DNA，分別為：片段重組體 (patch3180。DNA連接酶5180。3180。5180。3180。 5180。3180。5180。3180。 5180。5180。Holiday中間體5180。E.5180。連接酶Holiday中間體5180。3180。5180。3180。5180。3180。3180。 3180。3180。 3180。3180。3180。junction.viewprotein.rebinasejunctionstructureJunctionof細(xì)菌如果通過接合或轉(zhuǎn)化獲得的外源DNA與宿主 DNA充分同源，那末外源DNA就可以整合進(jìn)宿主的染色體。不需要特異 DNA序列，而是依賴兩分子之間序列的相同或相似性而進(jìn)行的重組。結(jié)合協(xié)同cI基因 cro基因溶原狀態(tài)cI基因 cro基因溶菌狀態(tài)思考： 當(dāng)含噬菌體的細(xì)菌用紫外線輕度照射后， cI蛋白被降解 ,接下去會發(fā)生什么？停止照射后會怎樣？為什么會進(jìn)化成這種機(jī)制？結(jié)合協(xié)同 二、同源重組（ homologouscro染細(xì) 溶 感受態(tài)細(xì)胞（ petent肺炎球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（二）轉(zhuǎn)化（ transformation） 相關(guān)概念：216。）細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組一、細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)移與重組 接合 (conjugation)轉(zhuǎn)化(tranformation)基因移動和重組是生物界普遍現(xiàn)象，是生物進(jìn)化的動力， DNA重組具有重要的生物學(xué)意義DNA重組概念第一節(jié) 不同 DNA之間發(fā)生共價(jià)連接形成新的 DNADNA重組 ?216。適應(yīng)環(huán)境了解中心法則 對天然的 DNA進(jìn)行改造為人類服務(wù)基因工程 即 DNA重組技術(shù)。第十四章 基因重組與基因工程姚真真生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室Gene 基因工程蘇云金芽胞桿菌（蘇云金芽胞桿菌（ BT）） 毒素蛋白基因毒素蛋白基因 熒光蛋白酶基因轉(zhuǎn)胃安素番茄轉(zhuǎn)胃安素番茄 高鋅西洋番茄高鋅西洋番茄轉(zhuǎn)蝦青素胡蘿卜轉(zhuǎn)蝦青素胡蘿卜痢疾疫苗土豆痢疾疫苗土豆乳汁中分泌人凝血因子的轉(zhuǎn)基因山羊 乳汁中 分泌 人蛋白 因子的 轉(zhuǎn)基因 豬主要內(nèi)容216。216。rebination）接合 (conjugation)rebination接合 轉(zhuǎn)移F因子染色體 DNA 性鞭毛Griffith216。 轉(zhuǎn)化過程：DNA片斷細(xì)菌攝取 DNA片斷 重組細(xì)菌性狀改變（三）轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction）通過病毒（噬菌體）介導(dǎo)發(fā)生在供體細(xì)胞與受體細(xì)胞之間的 DNA轉(zhuǎn)移和重組過程。組感 表達(dá)；溶菌狀態(tài)， cI和 cro兩個(gè)基因編碼調(diào)控蛋白是互為阻遏蛋白。 216。micrographJunctionHollidayTheHollidayCrebacteriophageschematicHolliday5180。5180。(recA)5180。5180。(recBCD)5180。5180。 5180。5180。內(nèi)切酶(recBCD)5180。DNA侵?jǐn)_(recA)3180。5180。 3180。3180。 3180。3180。5180。3180。 5180。3180。3180。3180。DNA連接酶3180。5180。拼接重組體5180。3180。片段重組體 5180。3180。 5180。3180。反轉(zhuǎn)錄病毒整合酶可特異地識別、整合反轉(zhuǎn)錄病毒 cDNA的 長末端重復(fù)序列 (long Int:hostBOB180。 hix為反向重復(fù)序列，它們之間的 H片段可在 Hin控制下進(jìn)行特異位點(diǎn)重組 (倒位 )。 rH1為 H1的阻遏蛋白基因。hin h2 阻遏基因 rh1啟動序列hin mRNAP Phix hixmRNA H1hin PP沙門氏菌 H片段 特異