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基因工程制藥-全文預(yù)覽

2025-01-19 13:33 上一頁面

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【正文】 子總數(shù) (二)重組特性: 粘性末端的重組率 大大高于 平末端。 ? 八十年代中期 PCR技術(shù)發(fā)明 ? 1985年 第一批轉(zhuǎn)基因家畜(兔、豬和羊)培育成功。 目前,我國已經(jīng)批準(zhǔn)了 12種基因工程藥物和疫苗上市。 ( 3)利用基因工程技術(shù)可以發(fā)掘出更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)。 ( 3)激素 胰島素、生長激素、心鈉素、人腦激素。 ④分子量小,拷貝數(shù)高。 表達(dá)載體 (expression vector) 使插入的外源 DNA序列轉(zhuǎn)錄翻譯 , 表達(dá)出多肽鏈 , 這樣的載體稱為 表達(dá)載體 。 應(yīng)用 ① 探針標(biāo)記 G32G32G32G32 G32G32G32G32 ② 在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾 , 以便于進(jìn)行連接 3180。 用途 ⒈ 制備載體 時,用堿性磷酸酶處理去除載體分子 5’-端磷酸基后,可 防止載體自身環(huán)化 連接,提高重組效率。339。539。539。539。 5. DNA聚合酶 Ⅰ 大片段 ——Klenow片段 Klenow片段用途 ⑴ 補(bǔ)齊雙鏈 DNA的 3ˊ末端; ⑵ 用標(biāo)記堿基補(bǔ) 齊 3ˊ末端 ; 聚合酶K l e n o w D N A [ 32P ] d N T Pα雙鏈 DNA粘端5 39。 539。 539。 539。 539。 339。 這兩個相同的粘性末端稱為配伍未端 (patible end)。 (2) 分類、作用 ?Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ (基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型) 第一個字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名第一個字母 , 用大寫 ; 第二、第三個字母是該細(xì)菌種名的前兩個字母,用小寫 ; 第四個字母代表菌株類型 ; 如果菌株有幾種酶,在代表菌株的字母后用羅馬數(shù)字表示??沙洚?dāng)克隆載體的 DNA分子有質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA和病毒 DNA。 (一)、基因工程的相關(guān)概念 有時應(yīng)用重組 DNA技術(shù)的分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列,有時是為獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物 蛋白質(zhì)。 基因工程 ( geic engineering)是指在基因水平上,采用與工程設(shè)計(jì)十分類似的方法,按照人類的需要進(jìn)行設(shè)計(jì),然后按設(shè)計(jì)方案創(chuàng)建出具有某種新的性狀的生物新品系,并能使之穩(wěn)定地遺傳給后代。 1973年, 科恩( Cohen)等人用 EcoR I內(nèi)切酶處理大腸桿菌的抗四環(huán)素和抗青霉素及磺胺的質(zhì)粒,并連接成一個新的重組質(zhì)粒。 為了使 DNA片段能在宿主細(xì)胞中得以擴(kuò)增,須將其接到一個特定能夠進(jìn)行自我復(fù)制的載體分子上。 1966年,發(fā)現(xiàn) DNA連接酶。這一重大發(fā)現(xiàn)大大地促進(jìn)了現(xiàn)代生物科學(xué)的發(fā)展。 (二)、技術(shù)上三個重要成果 1972年,美國斯坦福大學(xué) Berg研究小組利用限制性內(nèi)切酶EcoR I 和 T4 DNA連接酶成功地進(jìn)行了首例體外基因重組實(shí)驗(yàn)。這些工作為基因工程載體系統(tǒng)的建立打下基礎(chǔ)。 重組子轉(zhuǎn)化的成功標(biāo)志著基因工程的誕生 。 在體外外來遺傳物質(zhì)與載體 DNA結(jié)合成具自我復(fù)制的 DNA分子,通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出轉(zhuǎn)化子細(xì)胞,再擴(kuò)增提取獲得大量同一 DNA分子,即 DNA克隆又稱重組 DNA。其中,為使插入的外源 DNA序列可轉(zhuǎn)錄、進(jìn)而翻譯成多肽鏈而設(shè)計(jì)的克隆載體又稱表達(dá)載體。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ ?與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的 限制 修飾系統(tǒng) :限制外源 DNA, 保護(hù)自身 DNA, 穩(wěn)定細(xì)菌遺傳性狀 。 Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 同尾酶 有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同 , 但切割 DNA后 , 產(chǎn)生相同的粘性末端 ,稱為同尾酶 。 E. coli DNA pol. Ⅰ 催化缺口平移 * T * T * T * T Mg 2+ D N a s e I 539。 339。 339。 339。 339。 逆轉(zhuǎn)錄酶的應(yīng)用: ⑴ 將 mRNA逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA,構(gòu)建 cDNA文庫 ; ⑵ 補(bǔ)平和標(biāo)記 5ˊ 末端突出的 DNA片段; ⑶ 代替 Klenow酶用于 DNA序列分析; ⑷ 制備雜交探針等。339。339。539。339。 DNA連接酶的用途 ( 1) 兩個雙鏈 DNA片段連接起來 5ˊ ACG AATTCGT3ˊ T4DNA連接酶 5ˊ
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