微生物第七章-1-全文預(yù)覽
【正文】 滴加在蓋玻片與血球計(jì)數(shù)板平臺(tái)的結(jié)合處，使菌懸液經(jīng)毛細(xì)作用吸入計(jì)數(shù)室，靜臵，使細(xì)胞沉底； ?計(jì)數(shù)若干小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算每小格平均數(shù)，則： 菌濃（個(gè) /ml）＝ 每格平均數(shù) 400 104 稀釋倍數(shù) 17 ? 將待測(cè)菌懸液適當(dāng)稀釋后，涂布在平面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，一個(gè)菌落相當(dāng)于一個(gè)活細(xì)胞； ? 平板菌落計(jì)數(shù)屬于活菌計(jì)數(shù)法，適用于單細(xì)胞或單孢子計(jì)數(shù)，單位：菌落形成單位 /mL（ cfu/mL）（ colony forming unit， cfu) 平板菌落計(jì)數(shù)法 ?選擇生長(zhǎng) 50～ 300個(gè)單菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果準(zhǔn)確； 18 平板菌落 計(jì)數(shù) 方法 ? 10倍稀釋法制備待測(cè)菌懸液，選擇適當(dāng)?shù)南♂尪?，定量?~）取稀釋液涂布平板，或者定量（ 1mL）取稀釋液與融化后冷卻至 45℃ 的培養(yǎng)基混合倒平板； ? 培養(yǎng)后，對(duì)長(zhǎng)出的單菌落計(jì)數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)，得到原菌液的生物量： cfu/mL 通常選擇三個(gè)稀釋度涂平板，擇其合適者計(jì)數(shù)； 19 ? 單細(xì)胞或絲狀微生物的生物量均可用直接測(cè)量濕重或干重的方法測(cè)量； ? 離心收集細(xì)胞沉淀，無(wú)菌水充分洗滌后，直接分析天平稱(chēng)重 — 濕重（ mg/ml）； ? 洗滌后的細(xì)胞沉淀在 105℃ 下烘干至恒重，分析天平稱(chēng)重 — 干重（ mg/ml）； ? 培養(yǎng)液菌體濕重約 40g/L，干重約 4mg/mL； ? 濕重受培養(yǎng)基成分影響大，而不準(zhǔn)確；干重法費(fèi)時(shí)，靈敏度低，適于測(cè)定絲狀微生物： 細(xì)胞濕重和干重法 20 ? 在一定范圍內(nèi)，菌懸液的菌體濃度與一定波長(zhǎng)下的光密度值（ optical density, OD值）呈線性關(guān)系；用分光光度計(jì)，在 600nm波長(zhǎng)下，測(cè)定菌懸液的 OD600值，或吸光度值（ A600），可校正為 1 OD = n個(gè)細(xì)胞 /mL； 分光光度法 ?OD值在 ~性關(guān)系； ?適用于單細(xì)胞或單孢子懸液的生物量測(cè)定； 21 ? 在不方便使用顯微計(jì)數(shù)、平板菌落計(jì)數(shù)、細(xì)胞濕重和干重測(cè)定、分光光度測(cè)定生物量的情況下，可測(cè)定與生物量成比例關(guān)系的細(xì)胞總蛋白量，總核酸量，或者呼吸強(qiáng)度，間接測(cè)定總生物量，稱(chēng)為生理指標(biāo)法； ? 測(cè)定總蛋白：凱氏定氮法測(cè)定 ? 測(cè)總核酸：定磷法測(cè)定 ? 測(cè)呼吸強(qiáng)度： CO2產(chǎn)生量（速率） 生理指標(biāo)法 22 ? 生長(zhǎng)規(guī)律：二分裂殖的單細(xì)胞微生物在分批培養(yǎng)過(guò)程中，其生物量的增長(zhǎng)隨培養(yǎng)時(shí)間的變化規(guī)律：即生長(zhǎng)過(guò)程表現(xiàn)出延遲期、指數(shù)生長(zhǎng)期（對(duì)數(shù)期）、穩(wěn)定期、對(duì)數(shù)衰亡期（死亡期）的規(guī)律變化； ? 非二分裂殖或非單細(xì)胞的微生物在分批培養(yǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)規(guī)律類(lèi)似，但不典型； ? 一般通過(guò)繪制微生物培養(yǎng)過(guò)程的生長(zhǎng)曲線，反映其生長(zhǎng)規(guī)律和生長(zhǎng)參數(shù)； 微生物的生長(zhǎng)規(guī)律 23 微生物的生長(zhǎng)曲線 ? 生長(zhǎng)曲線：在分批培養(yǎng)中，以微生物的生物量為縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)繪制的曲線圖，反映生物量隨培養(yǎng)時(shí)間的變化； ?對(duì)于二分裂殖的單細(xì)胞微生物，用細(xì)胞數(shù)量的對(duì)數(shù)值為生長(zhǎng)曲線的縱坐標(biāo)； ?對(duì)于其它微生物可用培養(yǎng)液的OD值或者
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