【正文】 帶電泳的支持介質(zhì)常用的有濾紙，醋酸纖維薄膜，凝膠等。當(dāng)電滲作用方向與電泳方向相反，電泳速度減慢，逆水行舟。 實(shí)際上是電泳材料表面的電荷引起水的定向移動(dòng)。 （二）支持介質(zhì) mol/L。 I愈大，緩沖能力越大， pH越穩(wěn)定 ，但緩沖液所載分電流增加，樣品所栽的電流減少，電泳速度減慢，導(dǎo)電能力增加，產(chǎn)熱增加。如 故電泳 2～ 4次后應(yīng)將緩沖液正極交換，減少這種影響。 pH↑負(fù)極： 2H＋ ＋ 2e→H2↑pH↓電泳過(guò)程水會(huì)發(fā)生電離。+lg([鹽 ]/[酸 ])血清蛋白醋酸纖維薄膜電暈常用 。（ 5）緩沖液的電導(dǎo)率要低， （ 3）緩沖液中正負(fù)離子應(yīng)有相近的遷移率，避免電暈出現(xiàn)正負(fù)離子分布不均。以鉑金材料最為理想，最好貫穿整個(gè)緩沖液槽。 電泳中輸出功率恒定不變。將交流電源經(jīng)整流，濾波后獲得。 自由電泳，區(qū)帶電泳。根據(jù)是否使用支持介質(zhì) 根據(jù)電泳電壓的高低 1.電泳的分類和電泳儀ddμB由于不同的帶電粒子其遷移率的不同，因此在同一電場(chǎng)中的移動(dòng)距離不同，故能將其分離，根據(jù)公式=dI/Vt（ cm2V=d/t（ cm/s） － COO－ +在酸性條件下，羧基電離受抑制，－ NH2mg/ml水平，成為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的一種重要分析技術(shù)。利用電泳現(xiàn)象對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的技術(shù)叫電泳技術(shù)。一、電泳的基本原理滯后效應(yīng) ISE分析方法的誤差分析方法的誤差電動(dòng)勢(shì)測(cè)量 ，對(duì)于 一價(jià)離子 的響應(yīng)，電勢(shì)測(cè)量每差 1mV引起濃度的相對(duì)誤差為4％ ，對(duì)于 二價(jià)離子 則為 8％ ，因此對(duì)于測(cè)量電勢(shì)的儀器精度要求達(dá)到 。2.取決于電極制作材料，結(jié)構(gòu)和使用保管情況。電極壽命 三、離子選擇電極的性能三、離子選擇電極的性能響應(yīng)范圍及檢測(cè)下限： 響應(yīng)范圍是指電極對(duì)待測(cè)離子的響應(yīng)符合 Nernst式的線性區(qū)，此范圍越寬越好，一般在 4～ 7個(gè)數(shù)量級(jí)之間，檢測(cè) F限是指能夠檢測(cè)被檢離子的最低濃度一般在 105～ 107mol/L。是基于界面化學(xué)反應(yīng)對(duì)氣體敏感的電極，它是在一般的離子選擇電極的基礎(chǔ)上，再覆蓋一層疏水的透氣膜（如聚四氟乙烯），如 CO NH3電極。（三）氣敏電極 （二）非晶體膜電極離子選擇電極晶體膜電極均相膜電極非均相膜電極剛性基質(zhì)電極流動(dòng)載體電極非晶體膜電極基本電極氣敏電極敏化電極酶電極二、離子選擇電極的分類二、離子選擇電極的分類一、一、 ISE分析法的基本原理分析法的基本原理一、一、 分析法的基本原理分析法的基本原理 膜電位的產(chǎn)生： 將電極插入待測(cè)離子溶液中時(shí)，由于離子的交換和擴(kuò)散作用，改變了兩相中原有的電荷分布，因而存在一定的電位差，因?yàn)閮?nèi)充溶液中有關(guān)離子的濃度恒定，內(nèi)參比電極的電位固定，所以 ISE的電位（ E）只隨離子活度不同而改變，其電位可用 Nernst方程式表示。測(cè)量特定離子活度 ，對(duì)臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)更有實(shí)用意義測(cè)量范圍寬 ， 4～ 5個(gè)數(shù)量級(jí)ISE）a= 按測(cè)定量的電化學(xué)參數(shù)的不同，可分為 電位法 、 電導(dǎo)法 、庫(kù)侖法、極譜法和 伏安法 等，下面主要介紹電位法中的離子選擇電極法。① 應(yīng)用范圍有一定局限性 ，因許多物質(zhì)不能產(chǎn)生熒光。不足之處：④ 樣品用量少② 特異性強(qiáng) 熒光分析優(yōu)點(diǎn)：(200～ 700nm)光電倍增管 玻璃 氙弧燈 光電倍增管 玻璃 單色器 光電熒光計(jì)的結(jié)構(gòu)與光電比色計(jì)很相似，不同之處是檢測(cè)器與光線成直角，并多一塊濾光片。作為熒光分析的儀器有光電熒光計(jì)和熒光分光光度計(jì)儀器與測(cè)定方法 （ 3）激發(fā)光和發(fā)射光 只需更換不同空心陰極燈，儀器昂貴。能測(cè)定 10－ 9～ 10－ 6g的元素。受干擾少，原子吸收是光的窄帶吸收，僅 ～ ，而分子對(duì)光的吸收是寬帶吸收，達(dá)幾個(gè) nm。在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中主要用于體液、毛發(fā)、指甲等組織鈣、鎂、鐵、鈉、鋅、鋁、汞、鉛、砷等多種元素的測(cè)定。簡(jiǎn)稱為共振線。由于生物樣品中成分復(fù)雜，定量測(cè)定中會(huì)互相干擾影響測(cè)定的準(zhǔn)確性，所以，如果以單純的被測(cè)物質(zhì)預(yù)制標(biāo)準(zhǔn)液則與血清樣品的結(jié)果相差甚遠(yuǎn)，故應(yīng)使用血清作為標(biāo)準(zhǔn)以消除影響。 （ 3） 標(biāo)準(zhǔn)品的影響因陰離子可與某些被測(cè)陽(yáng)離子在火焰溫度下形成僅能緩慢蒸發(fā)的化合物而抑制了原子激發(fā)，一般用釋放劑來(lái)消除干擾，與干擾陰離子牢固結(jié)合。由于火焰使標(biāo)本中其他元素激發(fā)，當(dāng)發(fā)射時(shí)光譜接近，甚至重疊時(shí)，可產(chǎn)生干擾，引起誤差，如鈣對(duì)鋰、鈉的測(cè)定干擾明顯。① 共存元素產(chǎn)生的輻射干擾 （ 1）共存元素的干擾a是與試樣組成，激發(fā)溫度，激發(fā)電位有關(guān)的 常數(shù) ， b為 自吸收系數(shù) ，當(dāng)濃度很低時(shí)，b≈1，所以上式可寫(xiě)成 I=a六、其它光譜分析技術(shù)六、其它光譜分析技術(shù)多組分指同一試樣中含兩種或兩種以上待測(cè)組分，測(cè)定時(shí)可根據(jù)各組分吸收光譜的重疊程度來(lái)確定定量方法。（二）多組分混合物的測(cè)定原理對(duì)于 單一組分的純物質(zhì) ，只要已知其摩爾吸光系數(shù)，測(cè)得吸光度（ A）后，可直接按下列公式計(jì)算物質(zhì)的濃度。1.其基本原理與可見(jiàn)分光光度法相同，除可采用前述的標(biāo)準(zhǔn)曲線法和對(duì)比法外，還可采用：（一）單組分測(cè)定原理標(biāo)本測(cè)定的條件應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時(shí)的條件完全一致。3.1210因測(cè)定成分相同，故 K值相同，比色時(shí)用同樣規(guī)格的比色皿故 LS=LR，所以比色分析中測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液與未知液吸光度的比值也就等于其濃度的比值，即若標(biāo)準(zhǔn)液與樣品用量不等時(shí)，則再乘 AR=KLRCR又稱標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法，通常在測(cè)定未知濃度樣品的同時(shí)，測(cè)定一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液作比較，然后分別測(cè)定兩者的吸光度。（一）對(duì)比法 一些無(wú)色物質(zhì)在一定條件下與顯色劑反應(yīng)，可生成有色物質(zhì)。2.指針式或數(shù)字式4.(比色杯 )可用濾光片、棱鏡、光柵?？梢?jiàn)光常用鎢燈，現(xiàn)用鹵鎢燈；紫外光常用氫燈。A=K當(dāng)一束強(qiáng)度為 Io的單色光透過(guò)某種吸光溶液后，若 液層厚度不變，而濃度不同時(shí)，溶液的濃度愈大，則透過(guò)光的強(qiáng)度愈弱，其定量關(guān)系 A=K當(dāng)一束強(qiáng)度為 Io的單色光透過(guò)某種吸光溶液后，由于溶液吸收了一部分光，則透過(guò)的光線為 It。其中最常用的是可見(jiàn)光分析法，也被不嚴(yán)格地稱為比色分析法，準(zhǔn)確的名稱應(yīng)是可見(jiàn)光分光光度法。因此可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析，此類技術(shù)稱為光譜分析技術(shù)。自動(dòng)生化分析電泳技術(shù)第四節(jié) 光譜分析技術(shù)第二節(jié) 技術(shù) 光譜分析技術(shù)是根據(jù)物質(zhì)吸收或發(fā)射輻射能而建立起來(lái)的一類分析方法，因不同分子的原子和原子團(tuán)，其發(fā)射光譜和吸收光譜不同，而相同的物質(zhì)在一定條件下，其發(fā)射光譜和吸收光譜的強(qiáng)度與該物質(zhì)的含量成正比關(guān)系。第一節(jié) 吸收光譜分析吸收光譜分析法包括 可見(jiàn)、紫外、紅外和原子吸收分析法?？梢?jiàn)、紫外吸收光譜用于定量分析的依據(jù)是 光吸收定律 ，即 LambertBeer定律 ，它是吸收光譜法的基本定律。Lambert定律 LambertBeer定律合并 Lambert定律與 Beer定律可得吸光系數(shù) K的物理意義是 吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸光度 ，在給定條件下（波長(zhǎng)、溶液性質(zhì)、濃度）吸光系數(shù)是物質(zhì)的特征常數(shù)， K值愈大，能測(cè)定的濃度 C愈小，則靈敏度愈高。二、比色分析儀器 即可見(jiàn)光分光光度計(jì)，各類分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)和原理基本相同，一般包括光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器和顯色器五大部分。單色器 吸收池 顯示器 靈敏度高 被測(cè)定物質(zhì)的最低濃度一般為 10－ 5～ 10－ 6mol/L。應(yīng)用范圍廣 用對(duì)比法進(jìn)行定量時(shí)，為了減少誤差，選用標(biāo)準(zhǔn)液濃度應(yīng)盡可能接近待測(cè)樣品濃度。配制一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)液，按一定操作方法顯色后，用選定的波長(zhǎng)分別測(cè)定它們的吸光度，然后以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上標(biāo)出各坐標(biāo)點(diǎn)，通過(guò)連接各點(diǎn)，使其成一直線，即 AC曲線。48測(cè)定條件發(fā)生變化時(shí)（如更換標(biāo)準(zhǔn)品和試劑等），應(yīng)重新繪制。4.五、紫外分光光度法五、紫外分光光度法各組分吸收峰相互重疊可采用解聯(lián)立方程法，等收吸雙波長(zhǎng)法、系數(shù)光譜法。某些金屬元素的基態(tài)原子受到火焰激發(fā)后，其外層電子獲得能量而從基點(diǎn)躍遷到激發(fā)態(tài)，接著它們又以發(fā)射光譜的形式釋放出所獲得的能量，而返回基態(tài)，在相同條件下，同一元素所釋放的單位能量相同，故能形成固定光譜。由于火焰供給的能量不強(qiáng)， 只能激發(fā) 堿金屬 和 堿土金屬 元素 ，生化檢驗(yàn)中常用于鉀、鈉的測(cè)定。b③ 陰離子的干擾 （ 2）火焰對(duì)測(cè)定的影響火焰是激發(fā)光源，火焰的純度和燃燒狀態(tài)，穩(wěn)定性，可直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，因此，要