基因工程原理第七章-全文預覽
【正文】 擇標記附近的序列重復，可能會導致再次的同源重組而回復野生型 ? 替換載體更普及 篩選策略 ? 標記基因篩選：對于插入載體，標記基因可位于載體骨架內(nèi)任何地方；對于替換載體，標記基因必須在同源區(qū)內(nèi)。因為它們失去的功能需要通過共轉(zhuǎn)入攜帶有載體所缺失基因的輔助病毒來提供。 顯性選擇標記 ? 顯性選擇標記：往往來自于細菌 (外源 )，因此其所提供的表型對于細胞來說是全新的，可用于任何細胞。 轉(zhuǎn)染技術(shù) ? 化學轉(zhuǎn)染技術(shù) (利用胞吞作用 ) 1) DNA/磷酸鈣共沉淀法 適用于單層生長細胞，不適用于懸浮或成團生長的細胞 對某些細胞有毒性，難以轉(zhuǎn)染 2) 二乙氨乙基葡聚糖 (DEAEdextran) 可溶性聚陽離子制劑，不能用于形成穩(wěn)定的細胞系 ? 脂質(zhì)體 (利用胞吞作用 ) 低毒性，易操作，效率高，適用細胞類型多，甚至可轉(zhuǎn)染活體細胞 ? 電穿孔 (利用電脈沖在細胞膜上形成瞬時的納米大小的孔） 轉(zhuǎn)移后 DNA的命運 ? 具備在宿主細胞內(nèi)發(fā)揮功能的復制起始子，可以穩(wěn)定復制 (穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 ) ? 可以整合到基因組 DNA上，穩(wěn)定復制 (穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 ) ? 不具備在宿主細胞內(nèi)發(fā)揮功能，也沒有整合到基因組 DNA上，瞬時保留 (瞬時轉(zhuǎn)染） ? DNA轉(zhuǎn)入細胞的效率遠高于 DNA整合的效率 ? 兩個物理上不相連的基因可以發(fā)生共轉(zhuǎn)染，甚至可以都整合到基因組 DNA上 第二節(jié) 動物細胞載體 動物細胞載體 ? 非復制型載體 瞬時轉(zhuǎn)染的載體 (啟動子功能分析的載體 ) 選擇標記 DNA ? 帶有病毒復制子的質(zhì)粒 SV BPV、 EBV ? 病毒轉(zhuǎn)導載體 腺病毒
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