電子顯微鏡生物樣品的制備與觀察-全文預(yù)覽
【正文】 結(jié)構(gòu)受到破壞，因此目前多采用蛋白質(zhì)分子膜技術(shù)來(lái)進(jìn)行核酸分子樣品的制備。④經(jīng)3~5分鐘后，用濾紙吸去余水，待樣品干燥后，置低倍光學(xué)顯微鏡下檢查，挑選膜完整、菌體分布均勻的銅網(wǎng)。（1）細(xì)菌的電鏡樣品制備①將適量無(wú)菌水加入生長(zhǎng)良好的細(xì)菌斜面內(nèi)，用吸管輕輕撥動(dòng)菌體制成菌懸液。由于這些重金屬鹽不被樣品萬(wàn)分所吸附而是沉積到樣品四周，如果樣品具有表面結(jié)構(gòu)，這種物質(zhì)還能穿透進(jìn)表面上凹陷的部分，因而在樣品四周有染液沉積的地方，散射電子的能力強(qiáng)，表現(xiàn)為暗區(qū)，而在有樣品的地方散射電子的能力弱，表現(xiàn)為亮區(qū)。 透射電鏡樣品的制備方法很多，如超薄切片法、復(fù)型法、冰凍蝕刻法、滴液法等。轉(zhuǎn)移支持膜到載網(wǎng)上，可有多種方法，常用的有如下二種：（1）將洗凈的網(wǎng)放入瓷漏斗中，漏斗下套上乳膠管，用止水夾控制水流，緩緩向漏斗內(nèi)加入無(wú)菌水，其量約高1厘米；用無(wú)菌鑷子尖輕輕排除銅網(wǎng)上的氣泡，并將其均勻地?cái)[在漏斗中心區(qū)域；按2所述方法在水面上制備支持膜，然后松開(kāi)水夾，使膜緩緩下沉，緊緊貼在銅網(wǎng)上；將一清潔的濾紙覆蓋地漏斗上防塵，自然干燥或紅外線燈下烤干。所用溶液中不能有水分及雜質(zhì)，否則形成的膜的質(zhì)量較差。常規(guī)工作條件下，用塑料膜就可以達(dá)到要求，而塑料膜中火棉膠膜的制備相對(duì)容易，但強(qiáng)度不如聚乙烯甲醛膜。如果銅網(wǎng)經(jīng)以上方法處理仍不干凈時(shí)，可用稀釋的濃硫酸（1：1）浸1~2分鐘，或在1% NaOH 溶液中煮沸數(shù)分鐘，用蒸餾水沖洗數(shù)次后，放入無(wú)水乙醇中脫水，待用。而在透射電鏡中，由于電子不能穿透玻璃，只能采用網(wǎng)狀材料作為載物，通常稱(chēng)為載網(wǎng)。二、器材 大腸桿菌（大腸埃希氏菌，Escherichia coli）斜面。電子顯微鏡生物樣品的制備與觀察一、電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的主要區(qū)別顯微鏡的分辨率取決于所用光的波長(zhǎng)，1933年開(kāi)始出現(xiàn)的電子顯微鏡正是由于使用了波長(zhǎng)比可見(jiàn)光短得多的電子束作為光源，使其所能達(dá)到的分辨率較光學(xué)顯微鏡大大提高。本實(shí)驗(yàn)主要介紹這兩種顯微鏡樣品的制備。三、操作步驟（一）透射電鏡的樣品制備及觀察光學(xué)顯微鏡的樣品是放置在載玻片上進(jìn)行觀察。本實(shí)驗(yàn)選用的是400目的銅網(wǎng)，可用如下方法進(jìn)行處理：首先用醋酸戊酯浸漂幾小時(shí)，再用蒸餾水沖洗數(shù)次，然后再將銅網(wǎng)浸漂在無(wú)水乙醇中進(jìn)行脫水。支持膜可用塑料膜（如火棉
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