電子顯微鏡生物樣品的制備與觀察-預(yù)覽頁
【正文】 膜、聚乙烯甲醛膜等），也可以用碳膜或者金屬膜（如鈹膜等）。然后適量滴一滴火棉膠液于水面，火棉膠液滴加量的多少與形成膜的厚薄有關(guān)，待膜形成后，檢查是否有皺折，如有，則除去一直待膜制好。所使用的玻片一定要干凈，否則膜難以從上面脫落；漂浮膜時，動作要輕，手不能發(fā)抖，否則膜將發(fā)皺；同時，操作時應(yīng)注意防風(fēng)避塵，環(huán)境要干燥，所用溶劑也必需有足夠的純度，否則都將對膜的質(zhì)量產(chǎn)生不良影響。將有膜及銅網(wǎng)的一面朝上放在干凈平皿中，置40℃烘箱使干燥。例如負染色法就是用電子密度高，本身不顯示結(jié)構(gòu)且與樣品幾乎不反應(yīng)的物質(zhì)（如磷鎢酸鈉或磷鎢酸鉀）來對樣品進行“染色”。本實驗將主要介紹采用滴液法結(jié)合負染色技術(shù)觀察細菌及核酸分子的形態(tài)。③用菌毛細吸管吸取混合菌懸液滴在銅網(wǎng)膜上。然后按上述方法染色。最后將吸附有核酸分子的蛋白質(zhì)單分子膜轉(zhuǎn)移到載膜上，用負染等方法增加樣品的反差后置電鏡觀察。將一干凈載玻片斜放于平皿中，用微量注射器或移液槍吸取50μl的展開溶液，在離下相溶液表面約1cm左右的載玻片上前后擺動，滴于載玻片的表面，此時可看到滑石粉層后退，說明蛋白質(zhì)單分子膜逐漸形成，整個過程約需23min。如果面積過小，說明形成的膜并非單分子層，因而核酸就有局部或全部被膜包裹的危險，使整個核酸分子消失或反差變壞。多余的液體可用小片濾紙吸去，也可將載網(wǎng)直接漂浮于無水乙醇中1030s。（二） 掃描電鏡微生物樣品的制備及觀察掃描電鏡觀察時要求樣品必需干燥，并且表面能夠?qū)щ姟⑻幚砗玫?、干凈的蓋玻片，切割成46mm2的小塊，將待檢的較濃的大腸桿菌懸浮液滴加其上，或?qū)⒕χ苯油可?，也可用蓋玻片小塊粘貼菌落表面，自然干燥后置光學(xué)顯微鏡鏡檢，以菌體較密，但又不堆在一起為宜；標(biāo)記蓋玻片小塊有樣品的一面；將上述樣品置于1%2%戊二醛磷酸緩沖液（）中，于40度冰箱中固定過夜。其優(yōu)點是：①在固定及脫水過程中可完全避免菌體與空氣接觸，從而可最大程度地減少因自然干燥而引起的菌體變形；②可保證最后制成的樣品中有足夠的菌體濃度，因為涂在玻片上的菌體在固定及干燥過程中有時會從玻片上脫落；③確保玻片上有樣品的一面不會弄錯。目前采用最多、效果最好的方法是臨界點干燥法。將生物樣品用臨界點較低的物質(zhì)置換出內(nèi)部的脫水劑進行干燥，可以完全消除表面張力對樣品結(jié)構(gòu)的破壞。
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