pcr臨床應(yīng)用-全文預(yù)覽
【正文】 斷。 6. 新生兒產(chǎn)道感染。 ? 即使能培養(yǎng)，所需時(shí)間長(zhǎng) —48小時(shí) ↑。 4. 指導(dǎo)用藥、考核療效。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動(dòng)力下降而升高。 3. 流產(chǎn)超過 4次以上者，檢出率高達(dá) 80%。 4. 在我國(guó)，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。 b. 城市走向農(nóng)村， c. 高收入階層向低收入階層擴(kuò)展 4. 人對(duì)淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持 久，再感染和慢性患者普遍存在。 4. 慢性丙型肝炎長(zhǎng)期抗 HCV陽(yáng)性，這時(shí)如果進(jìn)行 HCVRNA 定量檢測(cè)可以鑒別活動(dòng)性、復(fù)制程度。 c. 嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員 ,提高對(duì)窗口期感染者的檢出率。 HBV （二） HBVDNA與“兩對(duì)半” HBsAg(－ ) HBVDNA(＋ ) HBeAg (－ ) HBVDNA(＋ ) 4. 也可能出現(xiàn) HBsAg(＋ )， HBVDNA(－ )。 4 基因診斷 3 免疫學(xué)診斷 臨床診斷 細(xì)胞膜 細(xì)胞核 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 1 形態(tài)學(xué)診斷 2 生化診斷 概念 基本原理 ? 以 DNA為例 ? （ 1） DNA變性 ： ? （ 2）降溫退火： ? （ 3）引物延伸 ： 原理 第一步 – 加熱變性 ? 預(yù)處理 第二步 – 引物與靶序列退火 第三步 引物延伸 第 1個(gè) PCR 循環(huán)完成后 – 得到兩個(gè)拷貝的靶序列 30次循環(huán)后靶序列擴(kuò)增的數(shù)量 No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824 熒光 PCR的原理 PCR技術(shù)的特點(diǎn) 靈敏 度高 特異 性強(qiáng) 快速 簡(jiǎn)便 應(yīng)用 范圍廣 Ct值的意義 Ct值與重復(fù)性 同一樣本在相同條件下同時(shí)進(jìn)行 96次擴(kuò)增 FQPCR Ct值與濃度 不同的模板達(dá)到熒光域值時(shí)的 Ct值不同 ?感染性疾病的診斷 ?母嬰傳播的控制與觀察 ?遺傳疾病的診斷 ?腫瘤的診斷 ?法醫(yī)學(xué)鑒定 熒光定量 PCR的臨床應(yīng)用 ?早期診斷 ?病情評(píng)估和預(yù)后判斷 ?抗病毒藥物療效的觀察、指導(dǎo) ?新藥驗(yàn)證 一 感染性疾病 1. 病原體含量與病情之間的關(guān)系 2. 病原體含量與用藥之間的關(guān)系 3. 藥物及療法的研究與開發(fā) 4. 新的病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn) 5. 新的愈后指標(biāo) 6. 傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預(yù)測(cè)與預(yù)防 臨床應(yīng)用 臨床應(yīng)用 二 腫瘤 1. 腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原、同功酶、抗體、激素、細(xì)胞因子、受體等 2. 腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)：包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因 三 遺傳病 1. 等位基因檢測(cè) 2. 多基因遺傳病的突變檢測(cè) 3. 基因表達(dá)異常所致遺傳病檢測(cè) 法醫(yī)鑒定 ? 免疫學(xué)診斷主要是抗原抗體反應(yīng)，應(yīng)用于臨床通常在體內(nèi)產(chǎn)生抗體以后，而許多病原體的免疫學(xué)檢測(cè)存在較長(zhǎng)的 “ 窗口期 ” ，不利于對(duì)疾病的早期診斷； PCR方法直接檢測(cè)病原體的 DNA/RNA，能大大縮短 “ 窗口期 ” ，其高靈敏度的檢測(cè)顯然也有利于疾病的早期診斷 。熒光定量 PCR技術(shù)在 臨床檢測(cè)中的應(yīng)用 黃少軍 市中心醫(yī)院 PCR與基因診斷技術(shù) ? 基因診斷即通過核酸的分子生物學(xué)檢測(cè)直接檢測(cè)基因的存在狀態(tài)或缺陷對(duì)疾病作出診斷的方法。 ? 九十年代中期 P
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