pcr臨床應用-全文預覽
【正文】 斷。 6. 新生兒產(chǎn)道感染。 ? 即使能培養(yǎng)，所需時間長 —48小時 ↑。 4. 指導用藥、考核療效。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動力下降而升高。 3. 流產(chǎn)超過 4次以上者，檢出率高達 80%。 4. 在我國，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。 b. 城市走向農(nóng)村， c. 高收入階層向低收入階層擴展 4. 人對淋球菌感染無天然抵抗力，免疫不持 久，再感染和慢性患者普遍存在。 4. 慢性丙型肝炎長期抗 HCV陽性，這時如果進行 HCVRNA 定量檢測可以鑒別活動性、復制程度。 c. 嚴格篩選獻血員 ,提高對窗口期感染者的檢出率。 HBV （二） HBVDNA與“兩對半” HBsAg(－ ) HBVDNA(＋ ) HBeAg (－ ) HBVDNA(＋ ) 4. 也可能出現(xiàn) HBsAg(＋ )， HBVDNA(－ )。 4 基因診斷 3 免疫學診斷 臨床診斷 細胞膜 細胞核 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA 翻譯 蛋白質(zhì) 1 形態(tài)學診斷 2 生化診斷 概念 基本原理 ? 以 DNA為例 ? （ 1） DNA變性 ： ? （ 2）降溫退火： ? （ 3）引物延伸 ： 原理 第一步 – 加熱變性 ? 預處理 第二步 – 引物與靶序列退火 第三步 引物延伸 第 1個 PCR 循環(huán)完成后 – 得到兩個拷貝的靶序列 30次循環(huán)后靶序列擴增的數(shù)量 No. of No. Amplicon Cycles Copies of Target 1 2 2 4 3 8 4 16 5 32 6 64 20 1,048,576 30 1,073,741,824 熒光 PCR的原理 PCR技術(shù)的特點 靈敏 度高 特異 性強 快速 簡便 應用 范圍廣 Ct值的意義 Ct值與重復性 同一樣本在相同條件下同時進行 96次擴增 FQPCR Ct值與濃度 不同的模板達到熒光域值時的 Ct值不同 ?感染性疾病的診斷 ?母嬰傳播的控制與觀察 ?遺傳疾病的診斷 ?腫瘤的診斷 ?法醫(yī)學鑒定 熒光定量 PCR的臨床應用 ?早期診斷 ?病情評估和預后判斷 ?抗病毒藥物療效的觀察、指導 ?新藥驗證 一 感染性疾病 1. 病原體含量與病情之間的關(guān)系 2. 病原體含量與用藥之間的關(guān)系 3. 藥物及療法的研究與開發(fā) 4. 新的病原體分子診斷標準 5. 新的愈后指標 6. 傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預測與預防 臨床應用 臨床應用 二 腫瘤 1. 腫瘤標志物：癌胚抗原、同功酶、抗體、激素、細胞因子、受體等 2. 腫瘤相關(guān)基因表達的檢測：包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因 三 遺傳病 1. 等位基因檢測 2. 多基因遺傳病的突變檢測 3. 基因表達異常所致遺傳病檢測 法醫(yī)鑒定 ? 免疫學診斷主要是抗原抗體反應，應用于臨床通常在體內(nèi)產(chǎn)生抗體以后，而許多病原體的免疫學檢測存在較長的 “ 窗口期 ” ，不利于對疾病的早期診斷； PCR方法直接檢測病原體的 DNA/RNA，能大大縮短 “ 窗口期 ” ，其高靈敏度的檢測顯然也有利于疾病的早期診斷 。熒光定量 PCR技術(shù)在 臨床檢測中的應用 黃少軍 市中心醫(yī)院 PCR與基因診斷技術(shù) ? 基因診斷即通過核酸的分子生物學檢測直接檢測基因的存在狀態(tài)或缺陷對疾病作出診斷的方法。 ? 九十年代中期 P
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