克隆載體與表達(dá)載體-全文預(yù)覽
【正文】 類型長度選擇標(biāo)記克隆位點(diǎn)pSC101天然質(zhì)粒，屬嚴(yán)緊型、低拷貝型 kb四環(huán)素抗性Tetr7個克隆位點(diǎn)： EcoR I、Xho I、Pvu I、Hind III、BamH I、Sal I 、Sam I主要使用EcoR IColE1天然質(zhì)粒，屬松弛型多拷貝型 kb大腸桿菌素（colicin）E1和對E1免疫的基因（immE1）EcoR I位于E1內(nèi)部，插入外源DNA會導(dǎo)致E1失活，使受體菌不能合成E1（ColE1），但仍然表現(xiàn)出對E1免疫型（ImmE1+）pBR322元件來源① 復(fù)制起點(diǎn) orip MB1系列（來源于ColE1）的高拷貝型復(fù)制起點(diǎn)② Ampr基因 pSP2124質(zhì)粒的Ampr基因③ Tetr基因 pSC101的Tetr 基因。噬菌粒載體能像質(zhì)粒那樣在受體細(xì)胞中自主復(fù)制能像M13DNA那樣體外包裝，并高效轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞 裝載量比常規(guī)的M13mp系列要大很多（10 kb通過克隆雙鏈DNA能獲得同等長度的單一單鏈DNA重組操作簡便，篩選容易 噬菌粒載體綜合了質(zhì)粒載體和M13噬菌體載體優(yōu)點(diǎn)，含有ColEl復(fù)制起始位點(diǎn)、抗生素抗性選擇標(biāo)記和絲狀體噬菌體DNA間隔區(qū)(含有噬菌體DNA復(fù)制起始、終止以及噬菌體顆粒形態(tài)發(fā)生所必需的全部順式作用元件)它具有質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)、選擇性標(biāo)記、多克隆位點(diǎn)等，方便DNA的操作，可在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在；又具有單鏈?zhǔn)删w的復(fù)制起點(diǎn)，在輔助噬菌體的存在下，可進(jìn)行噬菌體的繁殖，產(chǎn)生單鏈的子代噬菌體1. 具有較小分子量基因組DNA，可克隆10kb的外源DNA片段，并易于進(jìn)行分離與操作；2. 編碼一個ampr基因作為選擇記號，便于轉(zhuǎn)化子的選擇；3. 拷貝數(shù)含量高4. 存在著一個多克隆位點(diǎn)區(qū)，因此多種不同類型的外源DNA片段，不經(jīng)修飾便可直接插入到載體分子上；’端編碼區(qū)，可按照IPTG顯色反應(yīng)試驗篩選6. lacZ基因是置于lac啟動子的控制之下，插入的外源基因便會以融合蛋白質(zhì)的形式表達(dá)；7含有質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)，可復(fù)制形成大量的雙鏈DNA分子8. 帶有一個M13噬菌體的復(fù)制起點(diǎn)，在有輔助噬菌體感染的寄主細(xì)胞中，可以合成出單DNA拷貝，并包裝成噬菌體顆分泌到培養(yǎng)基中；9.；在pUC118和pUC119這兩個載體中，多克隆位點(diǎn)區(qū)的核苷酸序列取向是彼此相反的，于是它們當(dāng)中的一個可轉(zhuǎn)錄克隆基因的正鏈DNA，另一個則可轉(zhuǎn)錄出負(fù)鏈DNApUC118和pUC119人工染色體染色體具有復(fù)制功能，利用染色體的復(fù)制元件來驅(qū)動外源DNA片段復(fù)制的載體稱為人工染色體載體其裝載外源DNA的容量比質(zhì)粒、噬菌體和噬菌體質(zhì)粒雜合載體等有很大的拓展，甚至可以跟染色體的大小相媲美。其上的cos位點(diǎn)的一個重要作用是識別噬菌體的外殼蛋白。黏粒的組成包括質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)（colE1），抗性標(biāo)記（ampr）， cos 位點(diǎn)，因而能象質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化和增殖。 （M13噬菌體產(chǎn)生單雙鏈DNA的機(jī)制）M13mpn n代表系列數(shù)字② 對M13mp1的改進(jìn)加上常用的酶切位點(diǎn)。使克隆的DNA片段以特定單鏈的形式輸出受體細(xì)胞外，M13重組分子篩選簡便，被M13噬菌體感染的受體細(xì)胞生長緩慢，形成混濁斑，易于辨認(rèn)挑選。只感染雄性大腸桿菌基因間隔區(qū)（intergenic region, IG區(qū)） 基因II與基因IV之間存在一段507bp的基因間隔區(qū)，內(nèi)含有復(fù)制起始位點(diǎn)，是實施改造、構(gòu)建人工載體的重點(diǎn)區(qū)域。有可替代區(qū)，即非必需區(qū)?？寺≥d體基本性質(zhì)基本特征（或載體的構(gòu)建）原理機(jī)制常用的載體克隆載體質(zhì)粒載體質(zhì)粒能利用寄主細(xì)胞的DNA復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行自主復(fù)制；不相容性；可轉(zhuǎn)移性（基因工程中采用非接合性質(zhì)粒）（1）具有合適的復(fù)制起始位點(diǎn)（ORI）（2）具有合適的選擇性標(biāo)記基因（3）若干限制性內(nèi)切酶的單一位點(diǎn)（4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)。（抗菌素選擇原理）pSC101ColE1pBR322pUC18pUC19TA載體噬菌體載體λ噬菌體其DNA兩端的5′末端各帶有12個堿基的互補(bǔ)單鏈，即cos位點(diǎn)。噬菌體顆粒的大小受其D
研究報告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1