【正文】 各個(gè)樣品類型的選擇在show sample type窗口中顯示/隱藏，激活或停止各個(gè)樣品類型。為方便給樣品分配熒光曲線，熒光曲線的顏色也在該表中顯示出來(lái)。隨著多plex檢測(cè)項(xiàng)目的測(cè)量數(shù)據(jù)的獲得，通過(guò)選擇相應(yīng)的復(fù)選框，在show dyes面板中，可以選擇某染料。然后，程序還是運(yùn)行，通過(guò)改變模式到monitoring，可以觀察到在線數(shù)據(jù)的獲?。ǎＨ绻诎宀季种幸呀?jīng)明確了背景板，那么在復(fù)選框內(nèi)將自動(dòng)顯示出來(lái)。注意：在啟動(dòng)程序之前，確保儀器預(yù)熱了至少15分鐘。在檢測(cè)項(xiàng)目開(kāi)頭輸入試管和樣品體積。注意：在程序開(kāi)始時(shí)，各自程序的設(shè)置都有優(yōu)先級(jí)別。也應(yīng)該將試管放置在模塊的幾個(gè)角上。禁止使用耐熱程度不達(dá)標(biāo)的試管（約120℃）。在使用試管時(shí)，為了保證加熱蓋的均勻受壓，建議在熱模塊的每個(gè)角放置一個(gè)試管。保存后，程序可以不經(jīng)過(guò)對(duì)參數(shù)的再次優(yōu)化，在mastercycler ep realplex中開(kāi)啟。Simulate mastercycler gradient當(dāng)溫度性能發(fā)生改變時(shí)，采用其他循環(huán)的pcr程序可能需要進(jìn)行重新優(yōu)化，并且可能會(huì)影響到pcr結(jié)果。如果模塊溫度在37℃以下持續(xù)了多于5分鐘，那么加熱蓋將被自動(dòng)關(guān)閉。：作為該試管類型的功能，熱模塊的溫度被調(diào)節(jié)到試管和樣品的溫度。它們都具有默認(rèn)設(shè)置。加熱蓋溫度：加熱蓋溫度被預(yù)設(shè)為105℃，并且不能更改。注意：在設(shè)置測(cè)量點(diǎn)時(shí)，應(yīng)確定時(shí)間步的持續(xù)時(shí)間是足夠長(zhǎng)的。并不是由軟件直接設(shè)置的。 程序的刪除首先選中某個(gè)溫度步，然后點(diǎn)擊delete step圖標(biāo)來(lái)刪除該溫度步。就可以很輕松的通過(guò)單擊圖中的數(shù)值來(lái)編輯溫度和持續(xù)時(shí)間的數(shù)據(jù)。容許值為5－30分鐘；輸入步為1秒；連續(xù)測(cè)量熒光數(shù)據(jù)。默認(rèn)值：9容許值：1到9（信號(hào)發(fā)出次數(shù)）輸入步：1 熔解曲線insert step對(duì)話框中的melting curve選項(xiàng)被自動(dòng)嵌入四個(gè)程序步中。默認(rèn)值：40容許值：1到99輸入步：1 保溫程序保持溫度值為輸入溫度，一直到pcr程序結(jié)束。對(duì)于每個(gè)濾光片一種染料，獲取數(shù)據(jù)所需的時(shí)間為8秒，而對(duì)于每個(gè)濾光片兩種染料，獲取數(shù)據(jù)所需的時(shí)間就要增加到16秒。注意：在pcr循環(huán)中，只有在溫度步中才可以獲取數(shù)據(jù)。設(shè)置測(cè)量點(diǎn)：在相關(guān)溫度步對(duì)話框中，選中復(fù)選框set measuring point來(lái)明確測(cè)量點(diǎn)。默認(rèn)設(shè)置： 00：00容許值：00：00到01：00輸入步：1秒時(shí)間增：+時(shí)間減：在pcr程序的步中，增量被標(biāo)上一個(gè)星號(hào)：Ramp為制熱和制冷率：代表了溫度達(dá)到設(shè)置值的速率。此外，梯度溫度也可以在這里輸入。如果發(fā)現(xiàn)復(fù)選框上有記號(hào)，則可以用光標(biāo)激活該復(fù)選框。 溫度溫度步可以在程序的任何位置插入。當(dāng)程序步被選中后，它將在光部分的左邊被插入。 不用模板程序建立pcr程序 不用模板程序建立pcr程序，首先通過(guò)點(diǎn)擊clear pcr program圖標(biāo)刪除整個(gè)程序，然后再通過(guò)插入程序步來(lái)建立一個(gè)新的程序。另外edit step對(duì)話框也可以通過(guò)雙擊某一步彈出。所有在板布局中并發(fā)的改變都會(huì)被記錄在userlog中。 完整檢測(cè)項(xiàng)目的板布局編輯不能編輯完整檢測(cè)項(xiàng)目的板布局。 組可以通過(guò)delete subassay圖標(biāo)被打破。注意：板布局中的空白位置也可以一開(kāi)始就被選中作為子檢測(cè)項(xiàng)目。這就意味著可以平行的執(zhí)行兩個(gè)不同的檢測(cè)項(xiàng)目，每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目都可以有各自的具有不同目標(biāo)基因和染料的樣品。被歸為一組的樣品在板布局內(nèi)帶有顏色加亮的標(biāo)志，位于板布局的右下方。 幾個(gè)樣品的歸組，也可以通過(guò)將板布局中已存在的樣品歸為一組的形式建立復(fù)制。為復(fù)制板布局樣品，首先選中樣品，然后通過(guò)copy命令復(fù)制樣品到剪切板上。樣品編輯完成后，板布局如下圖所示： 熔點(diǎn)分析中的樣品類型在熔解曲線分析中，沒(méi)有特別需要考慮的方面。— 通過(guò)組合框well with housekeeping gene(monoplexing)向孔內(nèi)分配（或賦值），其中持家基因在此被檢測(cè)到?！?在target gene(s)面板中輸入目標(biāo)基因的名稱?！?點(diǎn)擊ok以確認(rèn)?！?打開(kāi)unknown對(duì)話框。選擇C2－C4的其中一個(gè)包含有持家基因的位置?！?點(diǎn)擊ok關(guān)閉unknown對(duì)話框。— 將位于C2－C4的樣品歸為一組?！?打開(kāi)unknown對(duì)話框。— 將位于C2－C4的樣品化為一組?！?打開(kāi)unknown對(duì)話框?！?通過(guò)在housekeeping gene復(fù)選框，在use of target gene(s)面板中明確 持家基因，用組合框選擇相關(guān)的染料。然后根據(jù)方法計(jì)算出其表達(dá)水平?！?輸入各參數(shù)?！?輸入?yún)?shù)— 點(diǎn)擊ok確認(rèn)輸入。陰性對(duì)照也要編輯。樣品名稱和所有相關(guān)的數(shù)據(jù)都被自動(dòng)分配。在preview calculated amounts欄中，通過(guò)組合框選中一個(gè)染料，根據(jù)在目標(biāo)基因中定義的濃度初始值，顯示濃度最終值。以不同的方向，不同的復(fù)制可以相鄰的排成行或者列。注意：只有當(dāng)板布局中超過(guò)一個(gè)位置被選中后，該功能才能被激活。在編輯標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，也可以自動(dòng)建立標(biāo)準(zhǔn)系列。分析中由內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照或者作為持家基因設(shè)定的基因被加亮為黃色。在此對(duì)話框中只輸入陰性對(duì)照的名稱和目標(biāo)基因數(shù)據(jù)。在analysis下進(jìn)行隨后的識(shí)別時(shí)，對(duì)話框里每個(gè)等位基因都被自動(dòng)分配一個(gè)顏色。（）注意：在這個(gè)對(duì)話框里可以進(jìn)行編輯的目標(biāo)基因的數(shù)量取決于在板布局中選擇的染料的數(shù)量。同時(shí)，在相關(guān)區(qū)域內(nèi)，必須明確用量和濃度的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)各項(xiàng)輸入完成后，帶有樣品類型、樣品名稱和sample表中的位置等數(shù)據(jù)的樣品就會(huì)顯示在左邊窗口內(nèi)。這也是執(zhí)行檢測(cè)項(xiàng)目所需的板類型。（）。 樣本體積輸入在工作區(qū)面板的右上端的sample vol中輸入樣本的體積。如果realplex軟件與mastercycler ep realplex2相連，那么580nm濾光片和605nm濾光片不會(huì)顯示在面板上。1 清理板2 未知3 標(biāo)準(zhǔn)4 陽(yáng)性對(duì)照5 陰性對(duì)照6 刪除樣本7 組成復(fù)制組8 拆分復(fù)制組9 建立子檢測(cè)項(xiàng)目10 刪除子檢測(cè)項(xiàng)目11 板布局的編輯模式注意：另外，以上各個(gè)功能還可以通過(guò)菜單項(xiàng)目plate layout或者鼠標(biāo)右鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)?？梢钥吹接疫叺膒cr板的96個(gè)位置。如果從屬項(xiàng)其中的一項(xiàng)被選中后，新建檢測(cè)項(xiàng)目顯示在右邊的工作區(qū)內(nèi)。注意：各自使用不同檢測(cè)項(xiàng)目的兩個(gè)模塊可以并行操作。4 編程（檢測(cè)項(xiàng)目的建立）mastercycler ep realplex軟件基本上包含有兩個(gè)模塊：assay setup和analysis。面板中顯示了將要被進(jìn)行歸檔操作的數(shù)據(jù)庫(kù)，在表databases中選中該數(shù)據(jù)庫(kù)。只有具有管理者權(quán)限的用戶可以進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)管理。在組合框內(nèi)選中自己的用戶名后，輸入用戶密碼，并按ok確認(rèn)（）。注意：也可以對(duì)一個(gè)檔案文件備份的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行恢復(fù)操作。該過(guò)程將被記錄在圖表log中。 輸入數(shù)據(jù)庫(kù)在realplex軟件中，如果要將原來(lái)的數(shù)據(jù)庫(kù)的備份激活，當(dāng)前數(shù)據(jù)庫(kù)必須被替換成一個(gè)備份文件，具體做法為首先在圖表restore database中選中備份文件。備份被自動(dòng)保存在目錄C:\programs\eppendorf\realplex\backup下。當(dāng)前的數(shù)據(jù)庫(kù)將被賦予名稱，點(diǎn)擊功能鍵save，將該數(shù)據(jù)庫(kù)以gbk形式放置在backup面板上提示的目錄下。通常來(lái)講，備份都是針對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)和檔案文件操作的。這些備份應(yīng)該保存在磁板或者服務(wù)器上。關(guān)于自動(dòng)保存的一些設(shè)置可以在圖表configuration中進(jìn)行。在selected database面板中，隨著數(shù)據(jù)庫(kù)的被關(guān)閉，數(shù)據(jù)庫(kù)顯示為紅色。數(shù)據(jù)庫(kù)的名字由數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)開(kāi)始使用的日期組成。 雙擊圖標(biāo)database tool后，顯示出realplex database administration對(duì)話框。背景校準(zhǔn)失敗的另一個(gè)原因可能是熱模塊內(nèi)一些容器內(nèi)的熒光污染造成的。前次的背景校準(zhǔn)的數(shù)據(jù)將被覆蓋。如果背景板在校準(zhǔn)過(guò)程中的某些位置校準(zhǔn)失敗時(shí)，單擊cancel來(lái)放棄校準(zhǔn)數(shù)據(jù)?！?插入背景板以后，單擊功能鍵calibrate開(kāi)始執(zhí)行校準(zhǔn)，單擊ok鍵確認(rèn)操作。 執(zhí)行背景校準(zhǔn)的日期 執(zhí)行背景校準(zhǔn)的用戶 一個(gè)新的背景校準(zhǔn)過(guò)程會(huì)在點(diǎn)擊該欄后出現(xiàn)的對(duì)話框中進(jìn)行。 使用的板名稱 作為默認(rèn)設(shè)置的背景校準(zhǔn)，帶有十字標(biāo)記。背景校準(zhǔn)必須要在顏色校準(zhǔn)之前執(zhí)行。一定要確保沒(méi)有液體蒸發(fā)，否則使用新的校準(zhǔn)板。注意：如果染料的濾光片發(fā)生改變的話，將會(huì)失去染料的校準(zhǔn)資料。濾光片必須與新染料的發(fā)射波長(zhǎng)相匹配。該數(shù)碼由軟件預(yù)先設(shè)置。 染料名稱 染料最大的發(fā)射波長(zhǎng)，單位為納米（nm） 染料檢測(cè)通道。在熒光測(cè)量中，染料是必須被適當(dāng)設(shè)定的。同樣的刪除操作可以用來(lái)刪除文件夾。 選中本人用戶結(jié)點(diǎn)后，通過(guò)功能鍵new來(lái)添加一個(gè)新的文件夾。 檢測(cè)項(xiàng)目的輸入 當(dāng)選中圖標(biāo)import assay from file時(shí)，一個(gè)格式為ASY的檢測(cè)項(xiàng)目就會(huì)被裝載到一個(gè)空白的文本中。 檢測(cè)項(xiàng)目的輸出檢測(cè)項(xiàng)目的輸入輸出功能用于幾個(gè)工作站之間的文本交換。具體方法：模板文件在assay setup通過(guò)功能鍵open assay中被裝載，以檢測(cè)項(xiàng)目的形式，命名后保存在用戶結(jié)點(diǎn)下。輸入檢測(cè)項(xiàng)目名后，文本通過(guò)復(fù)選框assay type被選中，點(diǎn)擊ok以確認(rèn)。只有登陸用戶才能執(zhí)行對(duì)這些程序文件的編輯操作。數(shù)據(jù)建立和執(zhí)行這些分析的用戶名都會(huì)被在這里列出來(lái)。標(biāo)有plete的文本代表數(shù)據(jù)獲得已經(jīng)發(fā)生過(guò)的文本。而且還會(huì)提示出各文本的狀態(tài)。 檢測(cè)項(xiàng)目管理在工具欄中可以實(shí)現(xiàn)以下的檢測(cè)項(xiàng)目的管理功能：1 新檢測(cè)項(xiàng)目2 打開(kāi)檢測(cè)項(xiàng)目3 保存檢測(cè)項(xiàng)目4 打印報(bào)告5 將文件輸入當(dāng)前的選中部分6 將當(dāng)前的選中部分輸出注意：以上提及的各個(gè)功能還可以通過(guò)file菜單，或者把鼠標(biāo)放在向?qū)谥悬c(diǎn)擊右鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)。Cover state一欄中顯示出加熱蓋的當(dāng)前位置。 realplex 模塊在realplex module結(jié)點(diǎn)下將顯示realplex模塊的特定的系統(tǒng)信息。溫度驗(yàn)定：通過(guò)溫度傳感器對(duì)儀器的溫度值進(jìn)行測(cè)量，屬于儀器溫度驗(yàn)定系統(tǒng)的一部分（請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)命令信息）。如果選中這個(gè)功能鍵，則原始記錄將被與計(jì)算機(jī)相連的打印機(jī)打印出來(lái)。首先給出了啟動(dòng)PCR程序的登陸用戶的信息以及該P(yáng)CR程序的程序名和啟動(dòng)時(shí)間。在incubate和lid圖表下，可以調(diào)整熱模塊和加熱蓋的溫度值。軟件管理者登陸系統(tǒng)以后，可以使用該對(duì)話框進(jìn)行建立新用戶，編輯和刪除已建立的用戶的操作。在向?qū)趦?nèi)不同的層次顯示為不同的符號(hào)。注意：所有的對(duì)程序各個(gè)功能的操作以及對(duì)系統(tǒng)配置的操作，都可以通過(guò)工具欄或者菜單欄實(shí)現(xiàn)。主屏幕包括向?qū)^(qū)，工作區(qū)和狀態(tài)區(qū)。以上兩種功能也可以通過(guò)File菜單來(lái)實(shí)現(xiàn)。而對(duì)軟件其他用戶的文件夾和分析程序只有讀的權(quán)限。如果點(diǎn)擊Cancel鍵，則顯示主屏幕（）。我們要做的就是選出自己的用戶名并輸入相應(yīng)密碼。這項(xiàng)是儀器的出廠設(shè)置，如有需要用戶可以在User Administrator對(duì)話框中對(duì)此項(xiàng)進(jìn)行修改（）。您也可以在mastercycler ep realplex處于關(guān)斷狀態(tài)下運(yùn)行realplex軟件，甚至在不接任何硬件的狀態(tài)下運(yùn)行該軟件。注意在把密封壓板歸位時(shí)小心不要弄傷手指。然后用壓板密封，程序開(kāi)始啟動(dòng)?，F(xiàn)在您可以開(kāi)始運(yùn)行realplex軟件了。3. 操作 管理者登陸當(dāng)realplex軟件第一次被打開(kāi)時(shí)，提示軟件管理者為Eppendorf命名并輸入登陸密碼。所有用戶名都列在選取框中。點(diǎn)擊OK鍵確認(rèn)后，重新進(jìn)入登陸程序。注意：登陸以后，用戶可以對(duì)自己的文件夾和分析程序進(jìn)行讀或者寫的操作，與Mastercycler ep realplex儀器連接后可以執(zhí)行其他的實(shí)驗(yàn)操作。 如果選擇登陸圖標(biāo)，User login對(duì)話框?qū)⒈粡棾?。登陸后，主屏幕顯示為Administror或者User。這一操作也可以通過(guò)setup菜單實(shí)現(xiàn)。其中對(duì)話框左邊列出了所有的使用者名單以及處于連接狀態(tài)的模塊名單，此外還有系統(tǒng)設(shè)置及其功能的結(jié)點(diǎn)選項(xiàng)。 對(duì)使用者的管理當(dāng)選中User項(xiàng)，User Administration圖表顯示在對(duì)話框右邊，列出所有的用戶名單。此外相應(yīng)硬件的資料以及最后登陸的用戶名，還有最后運(yùn)行的程序都會(huì)在此欄下顯示出來(lái)。PCR程序文檔信息在protocol圖表下顯示。如果選中這個(gè)功能鍵，則原始記錄將被作為txt文件保存。Sensors：顯示當(dāng)前傳感器的溫度值。其性能在溫度驗(yàn)定系統(tǒng)的操作手冊(cè)中有具體描述。Realplex module還會(huì)指明設(shè)置realplex模塊的CAN總線地址以及熱模塊和realplex模塊之間是否是通過(guò)CAN總線電纜相連的。這一圖表中的出錯(cuò)信息可以通過(guò)選中save功能鍵以txt格式保存下來(lái)，或者選中print功能鍵通過(guò)已連接的打印機(jī)打印出來(lái)。除了文本名、建立時(shí)間和更新時(shí)間會(huì)在assays面板上顯示出來(lái)以外，所有保存其中的檢測(cè)項(xiàng)目也都會(huì)在右邊顯示出來(lái)。 標(biāo)有template的文本可以作為建立新文本的模板文本使用。當(dāng)某個(gè)文本被選中，該文本中保存的所有分析數(shù)據(jù)都將被顯示在下方的analysis窗口中。 保存檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目可以由登陸用戶在他的結(jié)點(diǎn)下或者文件夾中執(zhí)行保存操作。當(dāng)要把一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目保存在某目標(biāo)文件夾下時(shí)，可以選中file菜單下的save as功能鍵，打開(kāi)相關(guān)對(duì)話框來(lái)實(shí)現(xiàn)。 模板文件的使用當(dāng)創(chuàng)建簡(jiǎn)單的新檢測(cè)項(xiàng)目時(shí)可以用到模板文件。這時(shí)用戶就可以在連接mastercycler ep realplex以后，直接啟動(dòng)和執(zhí)行復(fù)制的檢測(cè)項(xiàng)目了。在窗口的靠上一欄中選出檢測(cè)項(xiàng)目的保存位置，然后輸入文本的名字，并在file type一欄中選擇realplex－exchange（*.a